比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于点突变的检测效率

作     者：兰博 谢秋巧 明建军 黄仁彬 张士军 Lan Bo;Xie Qiuqiao;Ming Jianjun;Huang Renbin;Zhang Shijun

作者机构：广西医科大学药学院药理学教研室南宁530021 

出 版 物：《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)

年 卷 期：2015年第32卷第6期

页      面：887-890页

学科分类：10[医学] 

基　　金：2011年度留学人员科技活动择优资助项目(No.人社厅函508号) 

主　　题：T7E1 Surveyor 点突变 杂交 错配剪切活性 

摘      要：目的:比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于CRISPR-Cas9引起的点突变的错配剪切活性。方法:利用野生型和点突变的基因组DNA为模板,PCR扩增出突变位置的基因片段,用不同比例的野生型和点突变的PCR产物进行DNA杂交,分别用T7E1和Surveyor核酸内切酶对杂交后的产物进行切割,琼脂糖凝胶电泳分析结果。结果:当5%点突变DNA与95%野生型DNA杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为9.5%,Surveyor核酸内切酶为3.2%;当点突变DNA与野生型DNA等比例杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为45.6%,Surveyor核酸内切酶为26.4%;且T7E1和Surveyor核酸内切酶均能检测5%的突变DNA。结论:T7E1核酸内切酶检测点突变的效率高于Surveyor。