比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于点突变的检测效率
COMPARISON BETWEEN POINT MUTATION DETECTION EFFICIENCY OF T7E1 AND SURVEYOR ENDONUCLEASE作者机构:广西医科大学药学院药理学教研室南宁530021
出 版 物:《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)
年 卷 期:2015年第32卷第6期
页 面:887-890页
学科分类:10[医学]
基 金:2011年度留学人员科技活动择优资助项目(No.人社厅函508号)
主 题:T7E1 Surveyor 点突变 杂交 错配剪切活性
摘 要:目的:比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于CRISPR-Cas9引起的点突变的错配剪切活性。方法:利用野生型和点突变的基因组DNA为模板,PCR扩增出突变位置的基因片段,用不同比例的野生型和点突变的PCR产物进行DNA杂交,分别用T7E1和Surveyor核酸内切酶对杂交后的产物进行切割,琼脂糖凝胶电泳分析结果。结果:当5%点突变DNA与95%野生型DNA杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为9.5%,Surveyor核酸内切酶为3.2%;当点突变DNA与野生型DNA等比例杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为45.6%,Surveyor核酸内切酶为26.4%;且T7E1和Surveyor核酸内切酶均能检测5%的突变DNA。结论:T7E1核酸内切酶检测点突变的效率高于Surveyor。