鸡毒支原体p24蛋白的原核表达及膜定位研究

作     者：宋春 杨美 王柏林 周怡 成虹松 陈常秀 程振涛 SONG Chun;YANG Mei;WANG Bolin;ZHOU Yi;CHENG Hongsong;CHEN Changxiu;CHENG Zhentao

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 临沂大学农林科学学院山东临沂276005 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第54卷第5期

页      面：64-67页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31660723,32060786) 贵州省科技计划项目(黔科合基础1181号) 贵州省科技计划项目(黔科合支撑一般161号) 

主　　题：鸡毒支原体 p24基因 生物信息学 原核表达 膜定位 

摘      要：为研究p24蛋白在鸡毒支原体中的定位,对p24基因序列进行分析,PCR扩增p24基因并构建原核表达载体,表达p24蛋白,制备多克隆兔抗血清,ELISA测定其效价,提取鸡毒支原体总蛋白、膜蛋白、胞浆蛋白通过Western blot进行亚细胞定位。结果显示:p24基因高度保守,全长576 bp,编码192个氨基酸;成功构建表达载体pCold-p24,经转化、诱导表达后获得重组蛋白rp24,大小约为35 kDa;ELISA检测兔抗rp24血清效价为1∶12800,说明rp24蛋白具有很好的免疫原性;Western blot显示rp24蛋白在膜蛋白免疫印迹条带较亮,在胞浆蛋白中条带弱,证明p24主要分布在膜表面,是鸡毒支原体的膜蛋白。试验结果为后续基因工程疫苗研制、诊断试剂盒研发、致病机理研究奠定基础。