体外诱导获取利福平耐药结核分枝杆菌菌株及其稳定性研究

作     者：司晓燕 陈俊林 施慧慧 瞿梅 马娟 顾德林 SI Xiaoyan;CHEN Junlin;SHI Huihui;QU Mei;MA Juan;GU Delin

作者机构：南通市第六人民医院检验科江苏226011 

出 版 物：《交通医学》 (Medical Journal of Communications)

年 卷 期：2022年第36卷第1期

页      面：10-14,18页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：江苏省卫生健康委员会科研课题(Z2018028)。 

主　　题：结核分枝杆菌 利福平 体外诱导 耐药机制 外排泵基因 rpoB基因 

摘      要：目的:利用浓度倍增方法体外诱导对利福平(rifampicin,Rfp)耐药的结核分枝杆菌(mycobacteriurn tuberculosis,MTB)菌株,研究耐药机制演变过程及遗传稳定性。方法:将MTB标准菌株H37Rv在Rfp浓度2倍递增的7HIO液体培养基中进行传代培养,逐步诱导MTB菌株对Rfp耐药。利用Xpert MTB/RIF及荧光PCR熔解曲线法检测不同浓度Rfp诱导菌株rpoB基因的突变情况,实时荧光定量PCR方法检测外排泵基因Rv1457c、Rv1458c mRNA表达量,测算与标准菌株Rv1457c、Rv1458c相对表达量比值,将Rfp耐药菌株在无药罗氏培养基上连续培养10代,观察耐药性的变化。结果:MTB标准菌株诱导到Rfp 32μg/mL,获得rpoB基因突变菌株;Rv1457c和Rv1458c基因表达量随Rfp诱导浓度递增而逐渐上升,当浓度达到0.5μg/mL及以上时,与标准菌株的比值超过2,提示诱导菌株Rv1457c和Rv1458c基因已处于高表达状态。在无药培养基上连续传代10代后,rpoB基因发生突变前各浓度Rfp诱导菌株MIC明显降低,而rpoB基因突变菌株MIC值基本稳定。结论:通过体外诱导实验可以获得Rfp耐药MTB菌株,药物外排泵基因表达与MTB菌株诱导浓度有关,rpoB基因突变后的MTB菌株对Rfp耐药性能获得稳定遗传。