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单晶硅阳极氧化层表面骨状磷灰石的体外诱导沉积

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硅酸盐学报 2010年第1期38卷 143-147页

作者：吴振军李文生袁剑民任艳群湖南大学化学化工学院湖南大学材料科学与工程学院长沙410082

在磷酸钠碱性电解质中对单晶硅(100)进行阳极氧化处理,并将阳极氧化处理后的样品在模拟体液(simulated body fluid,SBF)中浸泡以考察其体外诱导骨状磷灰石沉积能力。用扫描电子显微镜观测体外浸泡前后样品的表面形貌,用电子能谱仪和X射... 详细信息

在磷酸钠碱性电解质中对单晶硅(100)进行阳极氧化处理,并将阳极氧化处理后的样品在模拟体液(simulated body fluid,SBF)中浸泡以考察其体外诱导骨状磷灰石沉积能力。用扫描电子显微镜观测体外浸泡前后样品的表面形貌,用电子能谱仪和X射线衍射仪研究阳极氧化后与体外浸泡不同时间后样品表面的成分。结果表明:单晶硅在10%的磷酸钠电解质中于5～20mA/cm2阳极氧化后,其表面原位形成火山口状结构,在SBF中浸泡1d后有磷灰石在单晶硅的阳极氧化层表面成核,浸泡6d后诱导形成了纳米骨状缺钙磷灰石层,体现出良好的体外诱导活性,表明阳极氧化处理是一种有希望应用于改善生物学与医学用单晶硅表面生物相容性的有效途径。

关键词：单晶硅骨状磷灰石表面生物学改性阳极氧化体外诱导

体外诱导成人脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第37期11卷 7494-7497页

作者：陈光辉夏菁秦宇红解放军总医院心内科实验室北京市100853

背景:目前对脂肪间充质干细胞在临床应用前还有许多问题需要解决,如脂肪间充质干细胞是否可以分化为完全意义上的心肌细胞,是否具备心肌细胞所特有的功能。如何提高脂肪间充质干细胞向心肌细胞的分化率,如何提高在移植后的归巢和存活率... 详细信息

背景:目前对脂肪间充质干细胞在临床应用前还有许多问题需要解决,如脂肪间充质干细胞是否可以分化为完全意义上的心肌细胞,是否具备心肌细胞所特有的功能。如何提高脂肪间充质干细胞向心肌细胞的分化率,如何提高在移植后的归巢和存活率等问题的解决对于指导干细胞的临床应用有重要的意义。目的:观察体外培养并诱导成人脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞。设计:随机对照观察。单位:解放军总医院心内科实验室。材料:脂肪取自解放军总医院普外科腹部手术患者(均知情同意);IMDM(Hyclon公司),Ⅰ型胶原酶(Gibco公司),5-aza(Sigma),抗心肌特异性肌钙蛋白T(TnT)多克隆抗体(福建迈新生物技术公司),抗CD44、抗CD45、抗CD34、HLA2DR、Ⅷ因子单克隆抗体、抗结蛋白(Desmin),抗α-横纹肌肌动蛋白、抗肌球蛋白重链购自北京中杉金桥生物技术有限公司,DAB染色剂由北京中杉金桥生物技术有限公司提供,RT-PCR试剂盒由Invitrogen公司提供,心房利钠肽放免试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所)。方法:实验于2005-03/2006-04在解放军总医院心内科实验室完成。细胞培养:采用消化法和贴壁培养法分离培养脂肪间充质干细胞。干预及检测:对第3代细胞进行细胞表面分子CD44,CD13,CD105,CD45,CD34,HLA-DR,factorⅧ的免疫细胞化学鉴定,并用5-氮杂胞苷(5-aza)进行诱导,于诱导后第7,14,21,28天采用RT-PCR法检测心肌化基因GATA4和Nkx2.5的表达,应用放射免疫法测定心房利钠肽含量。主要观察指标:①细胞表面标志鉴定结果。②心肌化基因GATA4和Nkx2.5的表达。③心房利钠肽含量。结果:①细胞表面标志鉴定:原代细胞CD13、CD44、CD105阳性表达,CD45、CD34、HLA2DR、Ⅷ因子阴性表达。诱导后7d,所有细胞Desmin,α-横纹肌肌动蛋白、抗肌球蛋白重链和抗心肌特异性肌钙蛋白T呈阴性反应,大多数细胞CD44阳性表达。诱导后14d少量细胞出现Desmin、α-横纹肌肌动蛋白和抗肌球蛋白重链抗原阳性表达,TnT阴性表达,部分细胞CD44呈阳性表达。诱导后21d,多数细胞Desmin、α-横纹肌肌动蛋白、抗肌球蛋白重链和抗心肌特异性肌钙蛋白T呈阳性反应,CD44呈阴性表达。②心肌化基因GATA4和Nkx2.5的表达:诱导后14d出现GATA4和Nkx2.5cDNA的表达。③心房利钠肽含量:诱导后14d心房利钠肽含量为(0.022±0.01)ng/L,与诱导后7d比较差异无显著性(P>0.05),诱导后21d和诱导后28d分别为(7.92±0.21)和(8.12±0.50)ng/L,与诱导后7d比较差异均有显著性(P0.05)。结论:成人脂肪组织中含有间充质干细胞,且可在5-氮杂胞苷诱导21d后分化为心肌样细胞。

关键词：脂肪间充质干细胞心肌细胞转化体外诱导

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体外诱导生成血小板的研究进展

细胞与分子免疫学杂志 2013年第9期29卷 1001-1003,1007页

作者：胡芬王伶杨人强南昌大学医学院南昌大学第二附属医院检验科江西南昌330006 南昌大学第二附属医院心血管内科江西南昌330006

血小板是大量存在于哺乳动物血液中的无核盘状小细胞,它来源于骨髓造血组织中的巨核细胞,具有止血、凝血,促进伤口愈合及参与免疫炎症反应等重要作用。本文主要是对体外条件下诱导干细胞生成血小板以及诱导培养体系中细胞因子的作用进... 详细信息

血小板是大量存在于哺乳动物血液中的无核盘状小细胞,它来源于骨髓造血组织中的巨核细胞,具有止血、凝血,促进伤口愈合及参与免疫炎症反应等重要作用。本文主要是对体外条件下诱导干细胞生成血小板以及诱导培养体系中细胞因子的作用进行综述。

关键词：干细胞体外诱导血小板细胞因子

体外诱导小鼠胎肝间充质细胞向神经元样细胞分化的研究

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 950-953页

作者：刘平平张洹刘革修暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的 :探讨胎肝间充质细胞在体外向神经元样细胞分化的潜能。方法 :无菌条件下获取胎龄 1 4 .5d的胎肝细胞 ,DMEM/HEPES/F1 2 (2 0 %FCS)培养得到贴壁细胞并传代 ,第 5代细胞经 β 巯基乙醇 (β mercaptoethanol,β ME)与全反式维甲酸 ... 详细信息

目的 :探讨胎肝间充质细胞在体外向神经元样细胞分化的潜能。方法 :无菌条件下获取胎龄 1 4 .5d的胎肝细胞 ,DMEM/HEPES/F1 2 (2 0 %FCS)培养得到贴壁细胞并传代 ,第 5代细胞经 β 巯基乙醇 (β mercaptoethanol,β ME)与全反式维甲酸 (all trans rentinoicacid ,ATRA)程序化诱导处理后 5h、5d ,用免疫细胞化学鉴定神经元抗原表达 ,同时用半定量RT PCR检测神经元相关基因mRNA表达情况。结果 :胎肝间充质细胞经 β ME、ATRA诱导处理后 ,约 80 %细胞呈现典型的神经元样的形态表型。免疫细胞化学显示诱导分化后的细胞表达神经元特异蛋白如神经元核特异性抗原 (neuron specificnuclearpro tein ,NeuN)、神经元特异性管蛋白Ⅲ型 (neuronc specifictubulinⅢ ,TuJ 1 )、神经丝蛋白中链 (neurofilament M ,NF M )及神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE) ,但是无成熟神经元微管相关蛋白Tau(microtubule associatedproteintau ,Tau 1 )、微管相关蛋白 2 (microtubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )表达。半定量RT PCR结果显示诱导分化后的细胞酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)mRNA有表达 ,脑因子 1基因 (brainfactor 1 ,BF 1 )、脑因子 3基因 (brain 3,Brn 3)、神经丝蛋白轻链基因

关键词：体外诱导小鼠胎肝间充质细胞神经元样细胞细胞分化

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体外诱导耳蜗毛细胞研究进展

中华耳科学杂志 2022年第1期20卷 121-124页

作者：徐正燕郭维维中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医学部国家耳鼻咽喉疾病临床医学研究中心聋病教育部重点实验室聋病防治北京市重点实验室北京100853

耳蜗毛细胞是听觉系统的机械感受器,在成年哺乳动物中不能自发再生,因此,耳蜗毛细胞损伤导致的听力损失是永久性的。毛细胞的再生疗法作为听力损失的新型治疗方法广泛受到人们的关注。文中对胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、间充质干细... 详细信息

耳蜗毛细胞是听觉系统的机械感受器,在成年哺乳动物中不能自发再生,因此,耳蜗毛细胞损伤导致的听力损失是永久性的。毛细胞的再生疗法作为听力损失的新型治疗方法广泛受到人们的关注。文中对胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、间充质干细胞几个常用干细胞和成纤维细胞体外诱导获得耳蜗毛细胞的研究进展和存在的问题进行总结,并对毛细胞再生疗法的未来发展进行展望。

关键词：听力损失干细胞成纤维细胞体外诱导耳蜗毛细胞

体外诱导脐血单核细胞向破骨样细胞的分化(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第6期13卷 1176-1180页

作者：鲍庆红刘文佳王晓荣周洪西安交通大学医学院附属口腔医院陕西省西安市710004 西安交通大学医学院陕西省西安市710061

背景:正畸牙齿移动的基础是牙周组织的改建,其中破骨细胞性骨吸收是牙齿移动的第一步,应力作用下有关破骨细胞分化和功能成熟的信号转导通路,以及牙周膜细胞和破骨细胞之间的关系是目前国内外研究的热点之一。目的:拟建立人破骨样细胞... 详细信息

背景:正畸牙齿移动的基础是牙周组织的改建,其中破骨细胞性骨吸收是牙齿移动的第一步,应力作用下有关破骨细胞分化和功能成熟的信号转导通路,以及牙周膜细胞和破骨细胞之间的关系是目前国内外研究的热点之一。目的:拟建立人破骨样细胞体外培养的简便方法,观察骨吸收刺激因子对破骨样细胞分化、增殖和功能的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-10/2008-05在西安交大口腔医院中心实验室完成。材料:脐带血来源于非高危妊娠的健康产妇,新鲜牛股骨由西安交通大学动物实验中心提供,用于制备100～200μm厚的骨片,1α,25-(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子、前列腺素E2等骨吸收刺激因子均为Sigma公司产品。方法:无菌条件下收集脐带血,Ficoll液分离后吸取呈云雾状的白膜层,离心弃上清,加入α-MEM培养液重悬,调整脐血单核细胞浓度为1×109L-1,接种于预置盖玻片和骨片的24孔培养板中,1.0mL/孔,设立空白对照组、10-8mol/L及10-7mol/L1α,25-(OH)2D3组、巨噬细胞集落刺激因子组、1α,25-(OH)2D3+前列腺素E2组,培养7d。主要观察指标:倒置显微镜观察细胞生长形态,TRAP染色法观察破骨样细胞的形成,甲苯胺蓝染色观察骨吸收陷窝情况,以TRAP染色(+)、细胞核≥2个的细胞为破骨样细胞进行计数。结果:培养3d后,空白对照组细胞形态及数量无明显变化,各诱导组单核细胞出现融合趋势;7d时空白对照组出现少量的破骨样细胞,核的数目2～3个,各诱导组可见大量多核破骨样细胞,核的数目3～20个不等。诱导后光镜下可见胞浆呈红色、胞核呈淡黄色的TRAP(+)破骨样细胞,尤其是10-8mol/L1α,25-(OH)2D3组可见含14个核的强阳性破骨样细胞,且胞体较大。各组均尚未形成骨吸收陷窝。与空白对照组比较,各诱导组破骨样细胞数量均明显增多(F=9.78,P0.05),巨噬细胞集落刺激因子组及1α,25-(OH)2D3+前列腺素E2组破骨样细胞数量均明显减少(F=7.46,P体外诱导培养后,可分化为TRAP(+)的多核破骨样细胞,其中10-8mol/L1α,25-(OH)2D具有最强的生物学效应。

关键词：脐血单核细胞破骨细胞体外诱导骨吸收刺激因子

体外诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞的初步研究

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解剖学报 2001年第4期32卷 301-304,T003页

作者：葛坚郭彦王智崇刘海泉杨智宽李永平李树浓中山医科大学中山眼科中心中山医科大学病理生理学教研室广州510060

目的　初步研究诱导胚胎干细胞ES D3细胞系向神经细胞定向分化可能性 ,为青光眼等视网膜视神经疾病的治疗提供可能的途径。　方法　以Buffalo大鼠肝细胞培养上清进行胚胎干细胞ES D3细胞系培养 ,参照Bain等方法进行改良 ,以视黄酸对ES D... 详细信息

目的　初步研究诱导胚胎干细胞ES D3细胞系向神经细胞定向分化可能性 ,为青光眼等视网膜视神经疾病的治疗提供可能的途径。　方法　以Buffalo大鼠肝细胞培养上清进行胚胎干细胞ES D3细胞系培养 ,参照Bain等方法进行改良 ,以视黄酸对ES D3细胞进行分化诱导 ,1d后加入阿糖胞苷 ,相差显微镜下观察细胞生长情况。　结果　加入视黄酸后 1d ,相差显微镜下可见散在 1个、2个或多个突起的神经样细胞。加入视黄酸后 2d、阿糖胞苷后第 1d ,可见大量 1条、2条或多条突起的神经样细胞 ,并相连成网络结构。　结论　视黄酸辅以阿糖胞苷在体外可成功诱导胚胎干细胞ES D3细胞系成为神经样细胞 ,并形成网络 ,结合我们裸鼠眼内接种ES D3细胞分化为神经细胞样细胞研究结果 ,胚胎干细胞定向分化及移植。

关键词：胚胎干细胞分化神经细胞青光眼体外诱导

体外诱导耐药阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药相关基因筛选

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第三军医大学学报 2020年第10期42卷 996-1001页

作者：夏志宽国晶张德全鲁勇敖俊红杨蓉娅陆军军医大学(第三军医大学)研究生院重庆400038 解放军总医院第七医学中心全军皮肤损伤修复研究所北京100700 军委政治工作部原机关门诊部北京100120 93199部队门诊部哈尔滨150001

目的筛选阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药相关基因,为研究该菌氟康唑耐药机制及开发新型抗真菌剂提供理论依据。方法将临床分离的氟康唑敏感阿萨希毛孢子菌通过不断倍增氟康唑药物浓度的方法进行体外诱导培养,直至药物浓度≥128μg/mL,再进行... 详细信息

目的筛选阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药相关基因,为研究该菌氟康唑耐药机制及开发新型抗真菌剂提供理论依据。方法将临床分离的氟康唑敏感阿萨希毛孢子菌通过不断倍增氟康唑药物浓度的方法进行体外诱导培养,直至药物浓度≥128μg/mL,再进行无药培养30代,测定其MIC值。分别提取敏感菌株和诱导耐药菌株的总RNA,构建RNA文库,转录组测序后进行生物信息学分析,寻找差异表达基因。相同方法诱导另外2株敏感菌株为耐药菌株,并对3对敏感与耐药菌株的基因组进行测序,比较ERG11基因序列。结果成功获得稳定的诱导耐药菌株,转录组发现耐药菌株中与药物转运相关基因、麦角固醇合成相关基因、抗氧化基因等上调表达,其中氟康唑靶酶编码基因ERG11基因表达上调了3.7倍。而基因组测序证实3株耐药菌株中ERG11基因的碱基序列未发生突变。结论阿萨希毛孢子菌耐药分子机制复杂,麦角固醇合成途径中的基因,特别是ERG11基因上调表达是其主要机制之一,同时还与外排转运基因、抗氧化基因等有关。

关键词：阿萨希毛孢子菌氟康唑体外诱导转录组耐药基因 ERG11

体外诱导滑膜间充质干细胞成软骨分化研究进展

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中华实验外科杂志 2014年第10期31卷 2366-2368页

作者：谢金硕陈松丁喆如符培亮吴海山上海长征医院关节外科200061

间充质干细胞（MSCs）是一种成体干细胞,具有多向分化潜能等优点,作为种子细胞,在软骨损伤修复中有广阔的应用前景.MSCs来源丰富，可以从骨髓、脂肪、骨膜、肌肉以及滑膜等多种组织中获得。滑膜间充质细胞（SMSCs）由于来源广泛，取材... 详细信息

间充质干细胞（MSCs）是一种成体干细胞,具有多向分化潜能等优点,作为种子细胞,在软骨损伤修复中有广阔的应用前景.MSCs来源丰富，可以从骨髓、脂肪、骨膜、肌肉以及滑膜等多种组织中获得。滑膜间充质细胞（SMSCs）由于来源广泛，取材方便，增殖能力强，而且具有比骨髓、骨膜、脂肪及肌肉来源的MSCs更好的成软骨能力，近年来深得广大研究学者的青睐。

关键词：间充质干细胞成软骨分化滑膜体外诱导多向分化潜能成体干细胞骨损伤修复间充质细胞