蚊母草提取物通过抑制Runx2活性抗乳腺癌破骨性骨转移作用

作     者：刘盛玲 吕红 田会茹 姜思琴 袁萍 傅蔚然 高书亮 付剑江 LIU Sheng-ling;LYU Hong;TIAN Hui-ru;JIANG Si-qin;YUAN Ping;FU Wei-ran;GAO Shu-liang;FU Jian-jiang

作者机构：江西中医药大学南昌330004 首都医科大学基础医学院北京100069 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第7期

页      面：81-87页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 100502[医学-中医临床基础] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然基金项目(81960736 81873043) 

主　　题：蚊母草 破骨性骨转移 乳腺癌 Runt相关转录因子2(Runx2) 核转录因子-κB受体活化因子 

摘      要：目的:研究蚊母草提取物(EVP)的抗乳腺癌破骨性骨转移作用。方法:采用左心室注射肿瘤细胞法建立裸鼠骨转移模型,通过巢式聚合酶链式反应(PCR)检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白-19(Ck-19)基因表达量确定肿瘤细胞的骨转移程度及EVP的抑制作用;采用多核细胞计数法及组织蛋白酶K(Cathepsin K)分泌量检测法,确定小鼠破骨细胞前体骨髓巨噬细胞(BMMs)的活性,并观察EVP(40、80、160 g·L^(-1))的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察EVP对BMMs细胞内核转录因子-κB受体活化因子(RANK)、Runt相关转录因子2(Runx2)、磷酸化Runx2(p-Runx2)及其下游蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响;采用明胶酶谱法检测EVP对基质金属蛋白酶(MMPs)水解明胶活性的影响。结果:与空白组比较,裸鼠给予EVP 5.5、11、22 g·kg^(-1),其骨髓组织中人Ck-19水平明显降低(P0.05),提示EVP具有抗骨转移作用;体外实验显示,与空白组比较,可溶性核转录因子-κB受体活化因子配基(sRANKL)可诱导BMMs分化为多核细胞(P0.05),EVP(40、80、160 g·L^(-1))可显著抑制上述sRANKL诱导的多核细胞形成(P0.01)。与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs的Cathepsin K分泌(P0.01);与sRANKL组比较,EVP组Cathepsin K分泌量明显下调(P0.05)。Western blot显示,与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs细胞RANK表达(P0.01);与sRANKL组比较,EVP组(40、160 g·L^(-1))BMMs细胞表达RANK蛋白明显降低(P0.05)。与空白组比较,sRANKL可明显增加BMMs细胞p-Runx2和MMP-9表达(P0.05);与sRANKL组比较,EVP组(40、160 g·L^(-1))BMMs细胞表达的p-Runx2和MMP-9蛋白明显降低(P0.05)。明胶酶谱显示,与空白组比较,sRANKL可明显增加pro-MMP-9、pro-MMP-2及64 kDa MMP-2水平(P0.05);与sRANKL组比较,EVP组pro-MMP-9、64 kDa MMP-2水平明显降低(P0.05),且160 g·L^(-1)EVP处理可明显降低pro-MMP-2水平(P0.05)。结论:蚊母草提取物可抑制肿瘤细胞诱导的破骨性骨转移,抑制骨形成相关转录因子Runx2活化,进而干扰RANK/RANKL信号转导从而抑制破骨细胞活化可能是其作用机制之一。