利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白

作     者：徐国双 姜童潇 郭艺迪 段铭 张茂林 关振宏 XU Guoshuang;JIANG Tongxiao;GUO Yidi;DUAN Ming;ZHANG Maolin;GUAN Zhenhong

作者机构：吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病教育部重点实验室吉林长春130062 

出 版 物：《广东农业科学》 (Guangdong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2022年第49卷第1期

页      面：121-127页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(32072902)。 

主　　题：禽流感病毒H7N9 PA-X GST pull-down 质谱 Hsp70-2 蛋白互作 

摘      要：【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。