绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立

作     者：葛优 郑晶 蒲善秋 周宇 黄翠锐 杨光友 谢跃 何冉 徐璟 古小彬 GE You;ZHENG Jing;PU Shanqiu;ZHOU Yu;HUANG Cuirui;YANG Guangyou;XIE Yue;HE Ran;XU Jing;GU Xiaobin

作者机构：四川农业大学动物医学院成都611130 中华人民共和国成都海关技术中心成都610041 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2022年第53卷第2期

页      面：567-575页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：四川省科技计划重点研发项目(2019YFN0155) 四川农业大学学科双支计划(2021993259) 

主　　题：绵羊痒螨兔亚种 MMP2 转录水平 原核表达 间接ELISA 

摘      要：本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47%,9/86)。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测。