假丝酵母氨基甲酸乙酯水解酶的分子克隆及酶学性质

作     者：张献 冯治平 张耀 张雪怡 杨丽娟 ZHANG Xian;FENG Zhiping;ZHANG Yao;ZHANG Xueyi;YANG Lijuan

作者机构：四川轻化工大学生物工程学院四川宜宾644000 酿酒生物技术及应用四川省重点实验室(四川轻化工大学)四川宜宾644000 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2022年第48卷第3期

页      面：56-62页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 083201[工学-食品科学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：四川轻化工大学人才引进项目(2018RCL23) 四川轻化工大学专业学位研究生课程案例库建设项目(KA202008) 大学生创新创业训练计划项目(B50104314) 

主　　题：假丝酵母 氨基甲酸乙酯 氨基甲酸乙酯水解酶 异源表达 酶学性质 

摘      要：氨基甲酸乙酯是存在于发酵食品中的一种潜在致癌物。生物酶法可有效降解氨基甲酸乙酯。该研究从假丝酵母CCTCC AY 2017001基因组中克隆了氨基甲酸乙酯水解酶基因cpUH,并实现了其在Escherichia coli中的高效表达。实验结果表明,cpUH基因大小为1656 bp,编码552个氨基酸;重组蛋白大小约为60 kDa,纯化后比酶活力为3.10 U/mg;cpUH的最适反应温度和pH分别为40℃和7.5,其在25~30℃和pH 6.0~9.0均有较好的稳定性;金属离子Cu^(2+)、Zn^(2+)明显抑制酶活力,其余Fe^(3+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)都对酶活力有抑制作用,而EDTA对酶活力无影响;此外,以氨基甲酸乙酯为底物时,其K_(m)和V_(max)值分别为6.01 mmol/L和3.34μmol/min,且cpUH对乙醇具有一定的耐受性,有望应用到酒饮料生产中。