一种快速检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66变异的实时荧光检测体系的开发及其在遗传学检测中的应用

作     者：龙驹 LONG Ju

作者机构：钦州市妇幼保健院广西钦州535099 西安交通大学医学部陕西西安710061 

出 版 物：《中国优生与遗传杂志》 (Chinese Journal of Birth Health & Heredity)

年 卷 期：2022年第30卷第1期

页      面：133-137页

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：钦州市科学研究与技术开发计划项目(20189914) 广西医学高层次骨干人才“139”计划培养人选(G201903017) 

主　　题：叶酸代谢 亚甲基四氢叶酸还原酶 甲硫氨酸合成酶还原酶 实时荧光PCR 快速检测 

摘      要：目的叶酸代谢的异常是导致反复流产、神经管畸形、先天性心脏病、高血压等多种疾病的高危因素,严重危害个体健康。个体携带MTHFR677、MTHFR1298或MTRR66致病变异时,会导致叶酸代谢通路受阻,是叶酸代谢异常的关键检测位点。本研究拟开发一种快速检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66变异的实时荧光检测体系。方法采用位点特异性PCR(AS-PCR)结合Taqman探针法开发实时荧光检测体系,分两管完成检测。结果采用已知基因型样本和随机样本对构建的实时荧光分析系统进行验证。经采用商品化试剂盒或测序法进行验证,本研究组所开发的检测体系的检测结果与验证方法的检测结果一致。300例随机样本检测结果显示,在本区域随机人群中,各SNP对应的基因频率分别为MTHFR1298C 29.83%、MTHFR1298A 70.17%;MTHFR677T 19.00%、MTHFR677C 81.00%;MTRR66G27.00%、MTRR66A73.00%。结论本研究成功开发了一种快速检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66基因多态性的检测方法。该方案简单易用,可以满足大部分已配备实时荧光检测系统的实验室的使用要求,检测速度快,自带内参基因、可以单样本检测,适用性较强。经验证,该体系检测结果与金标准(测序法)一致,是一种分析MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66基因多态性的有效方法。