霍乱弧菌二核苷酸环化酶的可溶性原核表达及其表达产物的生物活性分析

作     者：杨帆 龙朝琳 何小兵 陈国华 李维克 贾怀杰 房永祥 娄忠子 景志忠 YANG Fan;LONG Zhao-lin;HE Xiao-bing;CHEN Guo-hua;LI Wei-ke;JIA Huai-jie;FANG Yong-xiang;LOU Zhong-zi;JING Zhi-zhong

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2021年第51卷第12期

页      面：1533-1539页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：甘肃省自然科学基金项目(20JR10RA018) 国家自然科学基金青年项目(31302072)。 

主　　题：霍乱弧菌 二核苷酸环化酶 环二核苷酸 原核表达 纯化 活性分析 

摘      要：为获得具有生物活性的霍乱弧菌二核苷酸环化酶(DncV)蛋白与环二核苷酸c-di-GMP、c-di-AMP和3 3 -cGAMP,构建了DncV基因的原核表达载体pET-28a-SUMO-DncV,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件实现了可溶性表达;利用镍柱亲和层析纯化表达的重组蛋白产物,随后切除SUMO标签蛋白,再用亲和层析进一步纯化,获得了纯度较高的重组DncV蛋白;将获得的重组DncV蛋白通过体外酶促反应分别合成了c-di-AMP、c-di-GMP和3 3 -cGAMP,且合成产物能够诱导细胞产生Ⅰ型IFNs。结果表明,重组蛋白DncV及其产物c-di-GMP、c-di-AMP和3 3 -cGAMP均具有生物活性,这为后续抗病毒、抗肿瘤药物以及免疫增强剂和佐剂的开发奠定了基础。