草鱼肾中性粒细胞的分离鉴定与活性检测

作     者：常藕琴 霍礼霞 罗满林 石存斌 张德峰 潘厚军 任燕 CHANG Ouqin;HUO Lixia;LUO Manlin;SHI Cunbin;ZHANG Defeng;PAN Houjun;REN Yan

作者机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室广东广州510380 华南农业大学广东广州510225 

出 版 物：《中国水产科学》 (Journal of Fishery Sciences of China)

年 卷 期：2021年第28卷第12期

页      面：1515-1522页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：广州市科技计划项目(201904020004) 财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系项目(CARS-45) 

主　　题：草鱼 中性粒细胞 分离 鉴定 活性检测 

摘      要：分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红G(KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态,使用多功能酶标仪检测经MPA刺激的细胞活性,台盼蓝染色法和CCK-8检测细胞存活率。结果显示,获得的细胞大小均一,细胞核圆形或肾形,胞质有A、B型颗粒,表面有皱褶,具有中性粒细胞的形态特征;细胞纯度达(99.3±0.53)%,细胞活力达(97.70±0.76)%,在体外培养24h内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%;在PMA刺激下检测到细胞表达MPO、ROS、NO和NETs的量显著提高(P0.05),与刺激时间呈正相关。结果证实,分离的细胞具有很好的活力,具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法,细胞具有很好的活力,可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。