低剂量LPS通过上调巨噬细胞TLR4表达促进非酒精性脂肪性肝炎进展

作     者：于洋 付晓燕 吴艳红 许虎 杜宪红 吴沛恩 崔瑞翔 程丽霞 梁淑娟 YU Yang;FU Xiaoyan;WU Yanhong;XU Hu;DU Xianhong;WU Pei’en;CUI Ruixiang;CHENG Lixia;LIANG Shujuan

作者机构：潍坊医学院:山东省高校免疫学重点实验室山东潍坊261053 潍坊医学院:免疫学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院:病原微生物教研室山东潍坊261053 潍坊医学院:第一附属医院内分泌科山东潍坊261053 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2021年第43卷第22期

页      面：2423-2434页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81873883) 国家自然科学基金青年项目(82000525) 山东省医药卫生科技发展计划项目(2018WS065) 潍坊市科技发展计划项目(2020YX011)。 

主　　题：非酒精性脂肪性肝炎 高脂饲料 LPS 趋化因子 炎症因子 TLR4 

摘      要：目的作用及相关机制。方法 6~8周龄B6.WT小鼠分别给予正常饲料(ND组)、高脂饲料(HFD组)和HFD联合LPS注射(HFD+LPS组)。HFD+LPS组每周1次腹腔注射LPS(0111∶B4,1.25μg/g体质量),其他两组注射等体积生理盐水,饲养10周。酶法检测血清和肝组织TG、TC、ALT、AST水平,油红O染色观察肝内脂质沉积;ELISA法、RT-qPCR检测血清和肝组织IL-1β、TNF-α、CCL5、CCL2、CCL4水平;HE染色观察肝组织病理变化和炎症细胞浸润;免疫荧光(immunofluorescence,IF)观察肝内巨噬细胞、中性粒细胞浸润及TLR4蛋白表达;流式细胞术(flow cytometry,FCM)观察肝脏浸润单个核细胞中巨噬细胞及中性粒细胞比例。结果 HFD组血清TG、TC水平显著高于ND组(P均0.05)。HFD+LPS组肝内脂质沉积以及TG、TC水平显著高于HFD组(P均0.01),肝脏细胞空泡样变、炎症细胞浸润更为明显,NAS评分(P0.05)和肝脏单个核细胞数(P0.01)显著高于HFD组。同时,IF及FCM检测证实肝脏巨噬细胞、中性粒细胞浸润显著多于HFD组(P均0.05),HFD+LPS组血清中IL-1β、TNF-α、CCL5、CCL2、CCL4水平显著高于HFD组(P0.05);肝组织中IL-1β、CCL5、CCL2的蛋白和mRNA水平均显著高于HFD组(P均0.05)。免疫荧光结果提示LPS作用后肝组织中TLR4呈现明显的细胞膜转位,且TLR4与巨噬细胞共定位显示,HFD+LPS组巨噬细胞表面TLR4表达显著高于HFD组(P0.01)。结论 LPS通过诱导趋化因子及促炎因子释放,募集以巨噬细胞为主的炎性细胞浸润,从而加重HFD小鼠NASH进程;其机制可能与上调巨噬细胞表面TLR4表达有关。