猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用
The Development and Application of a Multiplex Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction for Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046
出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)
年 卷 期：2011年第42卷第10期
页 面：1485-1490页
核心收录：
学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
基 金："十一五"国家科技支撑计划课题(2006BAD06A12)
主 题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步多重RT-PCR 检测方法
摘 要：本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。
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