越橘离体腋芽小滴玻璃化超低温保存

作     者：李娴 张志东 刘海广 陈丽 李亚东 孙海悦 

作者机构：吉林农业大学园艺学院吉林省小浆果遗传育种与创新利用工程中心 

出 版 物：《吉林农业大学学报》 (Journal of Jilin Agricultural University)

年 卷 期：2021年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金：吉林省科技发展计划项目（20180201076NY和20200402080NC） 

主　　题：越橘 超低温保存 小滴玻璃化 腋芽 遗传稳定性 

摘      要：以越橘试管苗‘密斯提’的腋芽为材料，筛选了小滴玻璃化超低温保存过程中的各项技术参数；用8种66份越橘基因型验证了该方法的广谱性；用10个ISSR引物检测了超低温保存后5个品种再生株系遗传稳定性。结果显示：从30 d苗龄试管苗切取长1～1.5 mm单腋芽茎段分别在继代培养基（WPM + 0.3 mg/L ZT + 7 g/L 琼脂 + 30 g/L 蔗糖，SCM）和预培养基（WPM + 7 g/L 琼脂 + 0.3 mol/L蔗糖，PCM）上各培养1 d（25℃±2℃黑暗）；腋芽用加载液（WPM + 2.0 mol/L 甘油 + 1.0 mol/L 蔗糖，LS）处理30 min（室温），然后浸入植物玻璃化保护溶液Ⅱ（WPM + 300 g/L甘油 + 150 g/L乙二醇 + 150 g/L 二甲基亚砜 + 0.4 mol/L 蔗糖，PVS2）中40 min（0 ℃）；在铝箔纸上制成小滴（1腋芽/小滴）之后投入液氮中保存；取出的材料立即用卸载液（WPM + 1.2 mol/L 蔗糖，ULS）处理20 min（室温）；在SCM上腋芽黑暗培养1d后转至正常条件下再生培养。广谱性验证结果为平均成活率81.3%和再生率47.0%。5个越橘品种的分子标记检测结果显示未出现特异性条带。