胸膜肺炎放线杆菌纳米PCR检测方法建立与应用

作     者：张昆丽 席振军 徐民生 李艳 勾红潮 楚品品 蔡汝健 李春玲 

作者机构：广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2021年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：科技创新战略专项资金（高水平农科院建设）R2019YJ-YB2005 国家十三五重点计划专项课题（2016YFD0500709） 广州市科技项目（201906040005） 

主　　题：胸膜肺炎放线杆菌 纳米PCR 检测方法 

摘      要：为了建立一种高效、灵敏的胸膜肺炎放线杆菌（APP）检测方法，本研究针对APP的血清型保守基因-毒素4（APxⅣ）序列合成特异性引物，通过优化引物浓度、退火温度等建立了APP纳米PCR检测方法。敏感性试验结果显示，该纳米PCR对APP的检测下限为1 × 10;CFU/mL，其灵敏度是普通PCR的10倍。且特异性结果显示，该方法仅从APP核酸样品可检测到约417 bp的特异性目的条带，而对猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌等其他病原的检测结果均为阴性。最后应用本研究建立的纳米PCR技术检测了41份临床疑似APP感染病料，结果显示常规PCR和纳米PCR检测APP阳性率分别为17.07％（7/41）和19.51％（8/41），以上结果表明，本研究成功建立的APP的纳米PCR检测方法敏感性高、特异性好，可用于APP感染的临床诊断及流行病学调查。