罗非鱼SRA4基因重组表达、亚细胞定位及组织分布

作     者：黄子威 汪志文 黎源 夏洪丽 简纪常 鲁义善 HUANG Zi-wei;WANG Zhi-wen;LI Yuan;XIA Hong-li;JIAN Ji-chang;LU Yi-shan

作者机构：广东海洋大学水产学院 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院 广东省水生动物健康评估工程技术研究中心广东深圳518000 

出 版 物：《广东海洋大学学报》 (Journal of Guangdong Ocean University)

年 卷 期：2021年第41卷第5期

页      面：19-27页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 071002[理学-动物学] 

基　　金：广东省现代农业产业体系项目(2019KJ141) 深圳市科技计划项目(JCYJ20180306173023022) 深圳市大鹏新区科技创新和产业发展专项资金项目(PT202101-23) 

主　　题：尼罗罗非鱼 On-SRA4 重组表达 RT-qPCR 亚细胞定位 

摘      要：【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)清道夫受体基因(On-SRA4)的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋白rOn-SRA4的表达。同时,采用生物信息学、亚细胞定位手段分析On-SRA4的结构特征,用实时定量PCR分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肝、肠道、鳃、脑、肌肉、皮肤、血液的表达水平,用灭活无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、病毒类似物Poly I:C刺激健康罗非鱼,分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肠道的表达水平。【结果与结论】成功构建原核表达载体pET28a-OnSRA4,诱导获得目的蛋白rOn-SRA4,rOn-SRA4分子质量约80 ku。亚细胞定位显示,rOn-SRA4定位于细胞核与细胞质。组织定量分析表明,On-SRA4在所有组织中均有表达,且在血液中表达量最高,在灭活无乳链球菌与Poly I:C刺激后,健康罗非鱼胸腺、肠道、脾脏和头肾中On-SRA4表达量均显著升高,表明On-SRA4参与了病原引起的免疫反应,是罗非鱼抵抗病原的相关基因。