LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

作     者：侯婧瑛 吴雅娴 金小岩 凌辉 于霆峰 王凌云 HOU Jing-ying;WU Ya-xian;JIN Xiao-yan;Ling Hui;YU Ting-feng;WANG Ling-yun

作者机构：中山大学孙逸仙纪念医院临床研究中心广东广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院消化内科广东广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院综合科广东广州510120 深圳市人民医院广东深圳518020 

出 版 物：《中山大学学报（医学科学版）》 (Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences)

年 卷 期：2021年第42卷第5期

页      面：703-713页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81700242) 广州市科技计划项目(201704020121,202102080386) 广东省医学科研基金(C2018059) 

主　　题：长链非编码RNA-PVT1 微小RNA-15a B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1 胃癌细胞 增殖 

摘      要：【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。