表达D型流感病毒HEF蛋白重组新城疫病毒的拯救及其免疫原性研究

作     者：张鑫 张进进 贾艳娥 罗建勋 吉艳红 ZHANG Xin;ZHANG Jin-jin;JA Yan-e;LUJian-xun;JI Yan-hong

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2021年第51卷第9期

页      面：1082-1089页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31700801) 国家重点研发计划项目(2017YFD0500702-4) 甘肃省自然科学基金青年基金项目(20JR10RA021) 

主　　题：D型流感病毒 HEF蛋白 新城疫病毒 反向遗传学 免疫原性 

摘      要：D型流感病毒是近年来新发现的一种流感病毒,宿主范围、地域分布广泛,可与其它呼吸道病毒一起引起严重的牛呼吸道疾病,给家畜养殖业造成了威胁,并存在跨越种间屏障向人类传播的风险。国外的D型流感疫苗研究结果虽然并不理想,但已经在灭活苗和DNA疫苗两个方向都有所涉及,而国内对于D型流感疫苗的研究尚未有报道。D型流感病毒基因组由7个RNA片段组成,共编码9种蛋白。血凝素酯酶融合蛋白(hemagglutinin-esterase-fusion,HEF)是D型流感病毒唯一的糖蛋白,具有A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白的功能,同时有较强的免疫原性,是开发预防性疫苗的关键免疫原。本研究采用反向遗传学技术拯救了表达HEF蛋白的重组新城疫病毒,命名为rNDV-F-HEF(NDV97 F裂解位点替换为Lasota裂解位点的突变病毒);传代测序验证重组病毒的遗传稳定性,结果显示HEF基因在重组新城病毒rNDV-F-HEF中可以稳定遗传;Western-blot试验和间接免疫荧光试验表明rNDV-F-HEF能成功表达外源蛋白HEF;rNDV-F-HEF在鸡胚和雏鸡体内的毒力和生长能力与其亲本毒株NDV-F基本一致;rNDV-F-HEF肌肉注射免疫BALB/c小鼠的血清中含有HEF特异性Ig G抗体,其含量在三免后的第7天既能达到较高水平(约1800 ng/m L),说明rNDV-F-HEF具有防控IDV的潜质。重组病毒株rNDV-F-HEF可以用于IDV的预防性疫苗研发。