结核分枝杆菌DNA糖基化酶TagA的表达、纯化及晶体学研究

作     者：刘作隆 祁祺 战博闻 耿璐 李继喜 LIU Zuolong;QI Qi;ZHAN Bowen;GENG Lu;LI Jixi

作者机构：复旦大学生命科学学院上海200438 

出 版 物：《激光生物学报》 (Acta Laser Biology Sinica)

年 卷 期：2021年第30卷第4期

页      面：325-332页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家重点研发计划重点专项项目(2016YFA0500600) 国家自然科学基金面上项目(82071782) 

主　　题：DNA糖基化酶 TagA 结核分枝杆菌 动态光散射 结晶 

摘      要：结核病的病原体结核分枝杆菌是最致命的传染病病原体之一,然而2019年新冠疫情对结核病防治工作造成了沉重打击,因此对结核分枝杆菌进行深入研究有着重要的意义。基因组学的研究表明,结核分枝杆菌来源Ⅰ型3-甲基腺嘌呤DNA糖基化酶TagA(MtbTagA)可识别和切除受损烷基化碱基,以此维持基因组的正常复制、转录和翻译,但其结合底物的类型、催化机制以及结构基础尚不清楚。在大肠杆菌中异源表达MtbTagA,通过镍介质亲和层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析的方法获得高纯度的蛋白。动态光散射(DLS)试验发现MtbTagA蛋白以单体分布于溶液中,可与底物次黄嘌呤(Hx)和3-甲基腺嘌呤(3MA)结合,并改变其聚集状态。进一步结晶筛选优化出片状晶体,通过X光衍射获得分辨率为7Å的衍射数据。该研究为进一步探究DNA糖基化酶蛋白的生化性质和结构性质提供了参考。