龙鳖胶囊含药血清通过调控Hippo-YAP信号通路促进骨髓间充质干细胞迁移研究

作     者：梁桂洪 黄和涛 曾令烽 杨园 赵金龙 潘建科 杨伟毅 陈红云 罗明辉 韩燕鸿 刘军 LIANG Gui-hong;HUANG He-tao;ZENG Ling-feng;YANG Yuan;ZHAO Jin-long;PAN Jian-ke;YANG Wei-yi;CHEN Hong-yun;LUO Ming-hui;HAN Yan-hong;LIU Jun

作者机构：广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)骨科广东广州510120 广东省中医药科学院骨与关节退变及损伤研究团队广东广州510120 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2021年第52卷第15期

页      面：4569-4576页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(82004386) 国家自然科学基金资助项目(81873314) 国家自然科学基金资助项目(82004383) 国家自然科学基金资助项目(81974574) 国家自然科学基金资助项目(81473698) 广东省中医药局科研项目(20201129) 广东省普通高校重点科研平台和科研项目(2018KQNCX041) 广东省财政厅项目(157号,8号) 广东省中医院中医药科学技术研究专项(YN2019ML08,YN2015MS15,YK2013B2N19) 广东省医学科学技术研究基金资助项目(A2020105,B2019091) 广州市科技计划项目(202102010273) 

主　　题：龙鳖胶囊 含药血清 骨髓间充质干细胞 Hippo-YAP信号通路 细胞迁移 

摘      要：目的探索龙鳖胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)迁移和Hippo-Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein,YAP)信号通路的影响。方法通过全骨髓贴壁法提取大鼠原代BMSCs,取第3代细胞,采用流式细胞术检测CD29、CD44、CD45和CD90的表达情况;利用成脂和成骨分化诱导剂对BMSCs进行诱导,成骨分化后采用茜素红染色观察形成矿化结节的情况,成脂分化后采用油红O染色观察脂滴的形成情况。SD大鼠ig龙鳖胶囊(0.625g/kg),2次/d,连续7d,腹主动脉取血,制备含药血清;使用YAP抑制剂Verteporfin(2、5μmol/L)或5.0%含药血清处理BMSCs,采用划痕实验和Transwell迁移实验检测24 h后细胞的迁移情况。给予2.5%、5.0%含药血清处理BMSCs 24 h,采用Western blotting法检测Hippo-YAP信号通路相关蛋白的表达情况。结果BMSCs分离培养后正常贴壁生长,呈长梭形;经成骨诱导茜素红染色后,可见大量被染成红色的矿化结节;经成脂诱导油红O染色后,可见大量被染成橘红色的脂滴;流式结果显示,表达CD29的阳性率为99.68%,表达CD44的阳性率为99.03%,表达CD45的阳性率为0.14%,CD90的阳性率为95.38%,符合BMSCs的特征。与对照组比较,Verteporfin显著抑制BMSCs迁移(P0.05、0.01、0.001),5.0%含药血清显著促进BMSCs迁移(P0.05);与等剂量的Verteporfin组比较,5.0%含药血清+Verteporfin组BMSCs迁移率明显上升(P0.01、0.001)。2.5%、5.0%含药血清均显著下调大型肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor homolog 2,LATS2)蛋白表达水平(P0.05),上调YAP及其下游蛋白结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达水平(P0.01)。结论龙鳖胶囊含药血清具有促进BMSCs迁移的作用,其作用机制可能与调控Hippo-YAP信号通路相关。