Cas9融合RAD18因子提高HEK293T细胞的定点敲入效率

作     者：黄广燕 王豪强 李国玲 吴珍芳 张献伟 HUANG Guangyan;WANG Haoqiang;LI Guoling;WU Zhenfang;ZHANG Xianwei

作者机构：华南农业大学动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心广东广州510642 温氏食品集团股份有限公司广东云浮527400 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2021年第42卷第5期

页      面：8-18页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家转基因重大专项(2016ZX08006002) 广东特支本土创新创业团队(2019BT02N630) 

主　　题：基因编辑 CRISPR/Cas9系统 基因敲入 RAD18 融合蛋白 

摘      要：【目的】在哺乳动物细胞中,RAD51和RAD18是调节同源定向修复和非同源末端连接的关键因子。本研究目的在于探讨这2个因子在eSpCas9系统中对HEK293T细胞的定点敲入(Knock-in,KI)效率的影响,进而提高KI效率。【方法】通过构建eSpCas9-RAD51、eSpCas9-RAD18融合蛋白以及过表达RAD51、RAD18载体,比较它们的KI效率差异。【结果】eSpCas9-RAD18系统可以显著提高HEK293T细胞KI效率,约为原来eSpCas9系统的1.4~1.9倍(P0.01),而e Sp Cas9-RAD51系统和过表达RAD51/RAD18对KI效率无显著提高作用。【结论】本研究构建的eSpCas9-RAD18系统可以有效地提高HEK293T细胞的KI效率,可为基因编辑、基因治疗及定点转基因提供一种新的辅助整合工具。