透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的机制研究

作     者：林木南 邵翔 许丽梅 张欣 朱在师 韩一旦 段辛威 陈建梅 高松 李西海 LIN Munan;SHAO Xiang;XU Limei;ZHANG Xin;ZHU Zaishi;HAN Yidan;DUAN Xinwei;CHEN Jianmei;GAO song;LI Xihai

作者机构：中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院福建福州350025 福建中医药大学中西医结合学院福建福州350122 

出 版 物：《康复学报》 (Rehabilitation Medicine)

年 卷 期：2021年第31卷第3期

页      面：228-233页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81573998) 

主　　题：骨关节炎 透骨消痛胶囊 miRNAs Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路 

摘      要：目的:探讨透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的作用机制。方法:取4周龄SD雄性大鼠的双侧膝关节软骨,经Ⅱ型胶原酶消化法获得大鼠软骨细胞,并采用Ⅱ型胶原免疫组化法对所得细胞进行鉴定;取第2代软骨细胞分为空白组、模型组(10 ng/mL LPS干预8 h)、抑制剂组(10 ng/mL U0126先干预30 min后再加入10 ng/mL LPS干预8 h)、透骨消痛胶囊组(10 ng/mL LPS+300μg/mL透骨消痛胶囊一同干预8 h)。采用Western blot检测软骨细胞中Ras、Raf、p-ERK1/2、MEK1/2、MMP-3和MMP-13蛋白表达,qPCR检测软骨细胞中MEK1/2、ERK1/2、MMP-3和MMP-13基因表达及miR-27b、miR-34a和miR-146a表达。结果:①软骨细胞经Ⅱ型胶原免疫组化处理后,阳性组细胞胞浆被染为棕黄色,阴性组不显色,表明所提取细胞为软骨细胞。②与空白组相比,模型组中Ras、Raf、MEK1/2、MMP-3和MMP-13蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组相比,抑制剂组与透骨消痛胶囊组Ras、Raf、MEK1/2、p-ERK1/2、MMP-3、MMP-13蛋白表达均下降(P0.05)。③与空白组相比,模型组中MEK1/2、ERK1/2、MMP-3、MMP-13基因表达明显升高(P0.01);与模型组相比,透骨消痛胶囊组与抑制剂组上述基因表达均下降(P0.01,P0.05)。④模型组miR-27b的表达低于空白组(P0.01),抑制剂组、透骨消痛胶囊组miR-27b的表达高于模型组(P0.01);模型组miR-34a、miR-146a的表达均高于空白组(P0.01,P0.05),而抑制剂组、透骨消痛胶囊组均低于模型组(P0.01,P0.05)。结论:透骨消痛胶囊通过调控Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路中关键因子及miR-27b、miR-34a和miR-146a的表达,调节软骨细胞炎症反应,从而抑制骨关节炎炎症,保护关节软骨。