P2Y6稳定干扰乳腺癌细胞系的建立及其增殖能力评价

作     者：杨林立 李瑞梅 潘新华 钱旻 杜冰 YANG Lin-li;LI Rui-mei;PAN Xin-hua;QIAN Min;DU Bing

作者机构：华东师范大学生命科学学院生命医学研究所上海200241 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2012年第28卷第5期

页      面：510-513页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31000398) 中央高校基本科研业务费专项(78210023) 

主　　题：P2Y6 shRNA 慢病毒 增殖 乳腺癌细胞 

摘      要：目的:应用shRNA技术,构建P2Y6基因稳定干扰的乳腺癌细胞株,为P2Y6调控乳腺癌发生发展的功能及机制研究奠定基础。方法:以人P2Y6基因为靶序列,设计并合成干扰序列,并将其插入经EcoR I和Age I酶切的PLKO线性化质粒。阳性克隆经EcoRⅠ和NdeⅠ酶切、测序正确后与ps-PAX2、pMD2.G和PLKO重组慢病毒载体共转染293T细胞,包装成完整病毒。病毒经富集后感染乳腺癌细胞BT549,经嘌呤霉素筛选P2Y6稳定干扰的乳腺癌细胞。通过RT-PCR、Western blot等方法检测P2Y6的干扰效率。最后通过MTS实验对P2Y6基因稳定干扰后乳腺癌细胞的增殖能力进行评价。结果:阳性克隆经DNA测序后与预期相符。稳定转染P2Y6shRNA的BT549细胞中P2Y6的mRNA和蛋白表达水平与对照组细胞相比明显下降。P2Y6基因干扰后乳腺癌细胞的增殖能力没有显著变化。结论:成功构建人P2Y6基因表达稳定干扰的乳腺癌细胞株BT549。P2Y6的表达与乳腺癌细胞增殖无明显相关性。