鸡滑液支原体磷酸甘油酸激酶的克隆表达及酶学活性测定

作     者：尚原冰 祁晶晶 王宇 李浩然 刘晓涵 王少辉 李涛 田明星 于圣青 周铁忠 SHANG Yuanbing;QI Jingjing;WANG Yu;LI Haoran;LIU Xiaohan;WANG Shaohui;LI Tao;TIAN Mingxing;YU Shengqing;ZHOU Tiezhong

作者机构：锦州医科大学畜牧兽医学院锦州121000 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州大学兽医学院扬州225009 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2021年第29卷第3期

页      面：71-79页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31902244) 国家重点研发项目(2017YFD0500705) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2019JB11)。 

主　　题：鸡滑液支原体 磷酸甘油酸激酶 原核表达 酶学活性 

摘      要：磷酸甘油酸激酶(PGK)是生物进行糖酵解的关键酶,目前未见关于鸡滑液支原体(MS)PGK的相关研究报道。本实验采用Overlap PCR方法对MS的pgk基因进行点突变扩增,然后连接至pET-28a(+)表达载体并在大肠杆菌BL21中表达,纯化获得重组MSPGK(rMSPGK)蛋白,然后对纯化后的rMSPGK蛋白的酶学活性进行测定,包括温度、pH及不同底物对酶活的影响,并计算其酶比活力、米氏常数及最大反应速率。结果显示:最终获得了纯化的rMSPGK蛋白,其相对分子质量约为45 kDa;酶学活性测定显示,rMSPGK蛋白的酶比活力为100.70 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5;双倒数法求得rMSPGK蛋白相对于3-PGA的最大反应速率Vmax为370.37μmol/(L?min),米氏常数Km值为3.88 mmol/L;相对于ATP的最大反应速率Vmax为357.14μmol/(L?min),Km值为0.25 mmol/L。综上,本实验成功地表达了MS的PGK蛋白,并获得了酶活力较高的rMSPGK蛋白,为进一步研究鸡滑液支原体代谢和致病机制奠定了基础。