黄芩素对缺氧/复氧诱导的心肌损伤保护作用以及RIPK1/RIPK3信号通路的影响

作     者：高新富 边瑞民 王滨 谢世阳 宋征 GAO Xin-fu;BIAN Rui-min;WANG Bin;XIE Shi-yang;SONG Zheng

作者机构：滨州医学院附属医院药学部山东嵌州256603 河南中医药大学第一附属医院心血管内科郑州450000 

出 版 物：《中国药学杂志》 (Chinese Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2021年第56卷第8期

页      面：654-661页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 1002[医学-临床医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：山东省中医药科技发展计划项目资助(2017-229) 山东省医药卫生科技发展计划项目资助(2017WS233) 

主　　题：黄芩素 缺氧/复氧 RIPK1/RIPK3通路 程序性坏死 心肌损伤 

摘      要：目的探究黄芩素对缺氧/复氧诱导的心肌损伤保护作用以及活化受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)/RIPK3信号通路的影响。方法体外培养H9c2细胞,分为空白组、模型组和实验组(黄芩素20μmol·L^(-1))。实验组和模型组先用黄芩素或无血清培养基预处理12 h,然后100μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理4 h造成氧化应激损伤。PI法和TUNEL法检测细胞坏死和凋亡情况。对于体内实验,将C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组、阳性组(Nec-13 mg·kg^(-1))和3个实验组(黄芩素7.5、15和30 mg·kg^(-1))。除假手术组外,采用小鼠左冠状动脉侧支阻断法建立缺血/再灌注模型,术后次日给药,连续7 d。检测心肌梗死面积、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。Western blot法检测RIPK1、RIPK3蛋白表达水平;免疫沉淀法检测H2O2作用于心肌细胞后RIPK1与RIPK3的相互作用。结果MTT法确定黄芩素对H9c2细胞的无毒剂量为20μmol·L^(-1)后,进行后续实验。与模型组相比,实验组H9c2细胞PI阳性细胞指数[(19.26±3.35)%vs(12.82±4.30)%]和TUNEL阳性细胞指数[(25.75±5.70)%vs(13.80±5.47)%]则显著降低(P0.05),同时细胞培养上清中LDH、MDA水平降低,SOD、GSH-Px水平则升高(P0.05);RIPK1和RIPK3蛋白表达量也显著下调(P0.05)。与模型组相比,黄芩素30 mg·kg^(-1)组大鼠心肌组织梗死面积明显降低[(28.65±7.54)%vs(11.85±4.20)%](P0.05);同时CK、CK-MB、LDH、SOD含量下降,SOD、GSH-Px水平则升高(P0.05);RIPK1和RIPK3蛋白表达量下调(P0.05),且RIPK1/RIPK3凋亡小体逐渐解聚。结论黄芩素可保护缺氧/复氧诱导的心肌损伤,其机制可能与抑制RIPK1和RIPK3蛋白表达并干扰RIPK1/RIPK3坏死小体稳定性进而抑制心肌细胞程序性坏死有关。