长链非编码RNA TP73-AS1调控miR-181b及其靶基因HMGB1的表达以及对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

作     者：李超 何淼 杨桄权 何小艳 陈兆红 LI Chao;HE Miao;YANG Guangquan;HE Xiaoyan;CHEN Zhaohong

作者机构：德阳市人民医院肿瘤科四川德阳618000 

出 版 物：《肿瘤》 (Tumor)

年 卷 期：2021年第41卷第4期

页      面：225-237页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：四川省科技计划资助项目(编号:2016SZ0049) 

主　　题：癌,非小细胞肺 RNA,未翻译 HMGB1蛋白质 细胞增殖 细胞运动 细胞凋亡 

摘      要：目的:探讨长链非编码RNA TP73-AS1通过调控微RNA(microRNA,miRNA,miR)-181b及其靶基因高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测42例癌组织及其对应的癌旁组织,以及人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人NSCLC细胞(A549和NCI-H1299)中TP73-AS1的表达水平,并分析TP73-AS1表达与患者总生存期的相关性。采用脂质体法将shRNA-TP73-AS1(shTP73-AS1)和shRNA-NC(shNC)转入A549和NCI-H1299细胞,分别采用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲减TP73-AS1表达对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告基因验证TP73-AS1、miR-181b和HMGB1间的靶向关系。A549和NCI-H1299细胞中分别转入shTP73-AS1、shTP73-AS1+miR-181b-抑制子(inhibitor)和shTP73-AS1+pcDNA-HMGB1,再用CCK-8法、Transwell小室实验、划痕愈合实验及FCM法检测敲低TP73-AS表达后再沉默miR-181b表达或使HMGB1过表达对A549和NCI-H1299细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果:TP73-AS1 mRNA在癌组织中的相对表达量明显高于癌旁组织(P0.05),癌组织中TP73-AS1的表达水平与miR-181b的表达水平呈负相关(r=-0.623,P0.05)。A549和NCI-H1299细胞中TP73-AS1的表达水平均明显高于BEAS-2B细胞(P值均0.05)。敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并促进细胞凋亡(P值均0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实,TP73-AS1靶向作用于miR-181b并下调其表达,miR-181b可负调控HMGB1的表达。敲低TP73-AS1表达可以明显抑制A549和NCI-H1299细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平(P值均0.05)。同时,转染shTP73-AS1+miR-181b-inhibitor或者shTP73-AS1+HMGB1过表达载体后,HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平较仅转染shTP73-AS1明显上调(P值均0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力也明显升高,而凋亡水平明显下降(P值均0.05)。结论:TP73-AS1在NSCLC组织和细胞中高表达,可通过调控miR-181b/HMGB1轴促进癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进凋亡。