七叶皂苷A在小鼠软骨细胞及骨关节炎中的作用及相关分子机制

作     者：王淼 万锐杰 刘伟 彭科 WANG Miao;WAN Rui-jie;LIU Wei

作者机构：重庆市沙坪坝区中医院骨伤一科重庆400030 重庆市中医院康复科重庆400021 重庆医科大学附属第三医院骨科重庆401120 重庆医科大学基础医学院重庆400016 

出 版 物：《中国中西医结合外科杂志》 (Chinese Journal of Surgery of Integrated Traditional and Western Medicine)

年 卷 期：2021年第27卷第2期

页      面：189-197页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：重庆市技术创新与应用发展专项面上项目(cstc2019jscx-msxmX0853)。 

主　　题：骨关节炎 七叶皂苷A 缺氧诱导因子-2α 核因子-κB 抗氧化 

摘      要：目的:探讨七叶皂苷A(EsA)在小鼠骨关节炎(OA)中的作用及相关分子机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠原代软骨细胞,将细胞用10 mg/L白细胞介素(IL)-1β及不同浓度(10、50、100μmol/L)EsA进行处理后,CCK-8检测细胞活性,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时定量PCR检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和聚蛋白多糖酶(ADAMTS5)mRNA表达水平,Western blotting检测II型胶原蛋白(Collagen II)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及缺氧诱导因子(HIF)-2α和核因子-κB(NF-κB)途径相关蛋白表达,免疫荧光染色检测p65表达,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)试剂盒检测氧化活性水平。将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、OA组、OA+低剂量EsA组和OA+高剂量EsA组,每组15只,建立了小鼠OA模型后,OA+低剂量EsA组、OA+高剂量EsA组小鼠分别按照5 mg/kg、10 mg/kg进行腹膜注射EsA,每隔一天注射1次,持续6周后处死小鼠,骨密度测量仪检测小鼠股骨近端骨密度,HE染色和番红O固绿染色检测骨组织病理形态学改变。结果:EsA能够抑制IL-1β刺激后引起的细胞存活率下降与TNF-α、IL-6含量升高,使MMP-13和ADAMTS-5 mRNA表达下降,Collagen II蛋白表达升高且MMP-9蛋白表达降低,并抑制了IL-1β诱导的HIF-2α与NF-κB信号通路的激活,使MDA水平下降、SOD与CAT活性升高,差异均有统计学意义(P0.05)。OA小鼠经低、高剂量EsA治疗后,小鼠股骨骨密度值均升高(P0.05),骨组织病变现象得到改善。结论:EsA能够抑制小鼠骨关节炎,其机制可能与HIF-2α和NF-κB途径及其发挥抗氧化活性有关。