棉铃虫乙醇脱氢酶5的原核表达和活性分析及其抗血清的制备
Prokaryotic Expression,Activity Analysis and Antibody Preparation of Alcohol Dehydrogenase 5 from Helicoverpa armigera作者机构：新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046
出 版 物：《新疆大学学报（自然科学版）（中英文）》 (Journal of Xinjiang University(Natural Science Edition in Chinese and English))
年 卷 期：2021年第38卷第2期
页 面：197-203,212页
学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学]
基 金：国家自然科学基金(31972279) 新疆维吾尔自治区2017年天山雪松计划(2017XS20)
主 题：棉铃虫 乙醇脱氢酶5 原核表达 活性分析 抗血清制备
摘 要：本课题组前期基于酵母单杂交技术筛选出响应2-十三烷酮诱导CYP6B6过表达的6个调控因子,乙醇脱氢酶5(HaADH5)是其中之一,乙醇脱氢酶是一种代谢乙醇的重要酶类,在哺乳动物中的研究很多,但在昆虫中的研究很少.为了进一步探究HaADH5是否参与P450 CYP6B6的过表达,进而参与棉铃虫对包括杀虫剂在内的外界有毒物质的代谢.本实验将pET32a-HaADH5转化至大肠杆菌Transetta中进行诱导表达,Western blot进一步验证融合蛋白HisHaADH5的表达,通过镍柱纯化获得融合蛋白His-HaADH5,且测定了酶活.用蛋白免疫法制备了鼠抗His-HaADH5的血清,Western blot分析了该抗血清的免疫特异性,继而用此抗体检测了HaADH5在不同组织中的表达.活性分析表明,在NAD+的存在下,融合蛋白可以对不同醇类和甲醛进行脱氢,尤其对异戊醇的脱氢活性最高,活性为1333 U/mg.制备的抗血清效价为1∶*** blot结果表明,该抗血清既能与融合蛋白His-HaADH5结合,也能与棉铃虫体内的HaADH5结合,还发现HaADH5在脂肪体中的表达量最高.原核表达的融合蛋白能代谢异戊醇,制备的抗血清具有较好的免疫特性,这些结果为HaADH5蛋白水平的鉴定以及功能研究提供了重要的检测工具,也有助于我们更好地探索棉铃虫乙醇脱氢酶5的功能.
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