羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性

作     者：陈轶霞 才学鹏 景志忠 丁军涛 王颖 蒙学莲 张燕 贾万忠 乔军 闫鸿斌 房永祥 陈国华 骆学农 CHEN Yi-xia;CAI Xue-peng;JING Zhi-zhong;DING Jun-tao;WANG Ying;MENG Xue-lian;ZHANG Yan;JIA Wan-zhong;QIAO Jun;YAN Hong-bin;FANG Yong-xiang;CHEN Guo-hua;LUO Xue-nong

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2008年第24卷第2期

页      面：133-137页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 1002[医学-临床医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：甘肃省重大科技专项(ZGS063-A43-013) 

主　　题：羊痘病毒 P32基因 真核表达载体 表达 免疫原性 

摘      要：通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)和已插入CpG序列的pcDNA3·1-CpG中,构建pcDNA3·1-P32、pcDNA3·1-CpG-P32和pcDNA3·1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞亚群。结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4+T细胞数目和CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组。结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答。