沉默Ttf1对神经元细胞及雌性大鼠弓状核内Kiss1和Gn RH基因表达的影响

作     者：臧少莲 尹小琴 吕拥芬 许丽雅 郭盛 李嫔 ZANG Shao-lian;YIN Xiao-qin;LÜYong-fen;XU Li-ya;GUO Sheng;LI Pin

作者机构：上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院内分泌科上海200333 

出 版 物：《上海交通大学学报（医学版）》 (Journal of Shanghai Jiao tong University:Medical Science)

年 卷 期：2020年第40卷第11期

页      面：1447-1453页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81871131) 上海交通大学医工交叉基金(YG2015MS39) 金磊儿科内分泌中青年医师成长科研基金(PEGRF201506002) 上海市儿童医院院级面上项目(2016YMS003) 上海市卫生和计划生育委员会面上项目(201640140)。 

主　　题：甲状腺转录因子1 亲吻素基因 促性腺激素释放激素 RNA干扰 慢病毒载体 青春期发育 

摘      要：目的·探讨抑制神经元细胞和雌性大鼠下丘脑弓状核中甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,Ttf1)基因的表达对亲吻素(Kiss1)和促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因表达的影响。方法·针对大鼠Ttf1基因的mRNA序列分别设计3对特异性的干扰序列(TTF1-shRNA1、TTF1-shRNA2、TTF1-shRNA3),包装成慢病毒质粒。以神经元细胞ND7-23为体外模型,采用real-time PCR及Western blotting技术筛选干扰效率最高的慢病毒质粒(LV-TTF1-shRNA),转染72 h后检测Kiss1和GnRH基因的表达。将LV-TTF1-shRNA和空载质粒注射到21日龄雌性大鼠的下丘脑弓状核内,分别在幼年期(25日龄)、青春发育早期(35日龄)、成年期(42日龄)检测弓状核内Kiss1和GnRH基因的表达变化并观察雌鼠的阴门开放时间。结果·慢病毒质粒转染ND7-23细胞72 h后,LV-TTF1-shRNA2组、LV-TTF1-shRNA3组的Ttf1 mRNA及蛋白表达均显著减少(均P0.05),其中LV-TTF1-shRNA3干扰效果最佳。采用LV-TTF1-shRNA3抑制ND7-23细胞中Ttf1表达后,Kiss1和GnRH基因的mRNA表达均显著降低(均P0.05)。雌鼠弓状核内双侧显微注射LV-TTF1-shRNA3后,25日龄、35日龄、42日龄大鼠弓状核Kiss1和GnRH的mRNA均显著降低(均P0.05),35日龄和42日龄时KISS1蛋白水平明显降低,且雌鼠阴门开放时间延迟。结论·在细胞水平和雌性大鼠弓状核内抑制Ttf1基因表达均使得Kiss1和GnRH基因表达显著下调,也导致雌鼠阴门开放时间明显延迟。