胚胎干细胞向肝细胞定向诱导分化的体外实验研究

作     者：胡安斌 蔡继业 郑启昌 何晓青 潘运龙 

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心武汉430022 暨南大学生命科学院 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2003年第83卷第18期

页      面：1592-1596页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家重点基础研究发展规划项目 (973 )(2 0 0 1CB5 10 10 1) 国家自然科学基金资助项目 (3 0 2 3 0 3 5 0 ) 

主　　题：胚胎干细胞 肝细胞 定向诱导分化 体外实验 形态学变 

摘      要：目的 探讨胚胎干细胞体外定向诱导分化为肝细胞的条件和机制。方法 选用Balb/c小鼠胚胎干细胞 ,经过拟胚体发育分化 5d后开始定向诱导培养 ,将拟胚体转入白明胶处理的培养板中贴壁生长 ,在不同时间段分别在细胞培养基中添加酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)、肝细胞生长因子 (HGF)等细胞生长因子进行肝细胞定向诱导。细胞分化过程的形态学变化用倒置显微镜追踪观察 ;用放免法对细胞培养上清中抗小鼠甲胎蛋白 (AFP)和抗小鼠白蛋白 (ALB)进行动态检测 ,用免疫细胞化学法检测肝细胞分化标记物AFP ,ALB ,CK8,CK18,并计算其阳性表达率 (肝细胞分化率 )。结果 胚胎干细胞在重组小鼠白血病抑制因子 (LIF)存在的情况下保持未分化生长状态 ,撤去LIF后很快发育为拟胚体并继续分化。在第 8天检测到上清中AFP出现 ,浓度为 3.4ng/ml,ALB在第 11天开始检测到 ,浓度为 0 .2 μg/ml,随培养时间延长 ,AFP和ALB浓度逐渐增加。第 8天分化细胞开始出现AFP阳性 ,第 10天出现CK8、CK18阳性 ,第 11天出现ALB阳性 ,阳性细胞结构符合正常肝细胞结构特点。计算分化细胞中ALB阳性细胞率 ,得到肝细胞的分化率为 30 %。结论 胚胎干细胞经过拟胚体发育阶段 ,在特定培养条件和aFGF、HGF等生长因子的作用下 ,可定向分化为肝细胞 ,这种?