人溶菌酶定点突变基因在毕赤酵母中的表达及活性分析

作     者：陈熙 陈毓 齐小雨 张炜 CHEN Xi;CHEN Yu;QI Xiao-yu;ZHANG Wei

作者机构：南京农业大学生命科学学院江苏南京210095 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2014年第30卷第6期

页      面：1396-1401页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：江苏省科技支撑计划项目(BE2013428) 南京农业大学青年科技创新基金项目(KJ2013030) 

主　　题：人溶菌酶 巴斯德毕赤酵母 信号肽 定点突变 

摘      要：利用PCR法将人溶菌酶(h LYZ)成熟肽与载体信号肽连接处的氨基酸残基进行定点突变,突变基因亚克隆至酵母分泌型表达载体p PICZαA,重组载体线性化后通过电击转化法转化巴斯德毕赤酵母X-33,利用含Zeocine抗生素的YPDS平板筛选高拷贝转化子。转化子酵母经甲醇诱导后取培养基离心上清液进行SDS-PAGE和活性检测。结果显示,突变体h LYZ活力和表达量较野生型均有显著提高。表明定向改变h LYZ信号肽残基性质可以提高其表达量和分泌效率。