黔北麻羊SRD5A2基因干扰载体构建及其对产羔相关基因表达的影响

作     者：洪磊 陈祥 唐文 周志楠 段志强 赵佳福 HONG Lei;CHEN Xiang;TANG Wen;ZHOU Zhinan;DUAN Zhiqiang;ZHAO Jiafu

作者机构：贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点试验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点试验室贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵阳550025 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2020年第51卷第12期

页      面：2980-2990页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFD0502005) 国家自然科学基金(31760652) 贵州省优秀青年科技人才项目(〔2017〕5624)。 

主　　题：黔北麻羊 SRD5 A2基因 RNA干扰 卵巢颗粒细胞 产羔性状 

摘      要：旨在探究SRD5 A2基因对山羊产羔性状相关基因表达的影响。本研究选择健康的(2~3岁)黔北麻羊经产母羊3只,体重约32 kg,采集卵巢组织并成功培养卵巢颗粒细胞。通过在线软件设计SRD 5A2基因的4对siRNA干扰序列和1对阴性对照序列,连接pGPH1/GFP/Neo载体后,将构建成功的干扰载体转染至黔北麻羊卵巢颗粒细胞。利用qRT-PCR方法筛选出干扰效率最佳的载体,检测其对SRD 5A2基因表达的影响。运用qRT-PCR检测沉默SRD 5A2基因对山羊产羔性状相关基因骨形态发生蛋白15(BMP 15)、生长分化因子9(GDF 9)、骨形态发生蛋白1B(BMPR-1B)和卵泡刺激素β亚基(FSHβ)表达的影响。结果表明,本试验在培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞的基础上,成功构建了黔北麻羊SRD 5A2基因的干扰载体,并筛选出shRNA-SRD5A2-1干扰效果最佳(P0.01);抑制SRD 5A2基因表达后,qRT-PCR检测产羔性状相关基因BMP 15、BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量均显著降低,BMP 15的表达量极显著低于shRNA-NC对照组(P0.01),BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量显著低于shRNA-NC对照组(P0.05)。本研究成功构建了SRD 5A2基因干扰载体并转染至卵巢颗粒细胞,发现体外沉默SRD 5A2基因可抑制产羔性状相关基因的表达,提示SRD 5A2基因与黔北麻羊产羔性状密切相关,本试验结果为进一步研究SRD 5A2基因对黔北麻羊产羔性状的调控机制提供了基础。