检索结果-南通市图书馆

作者：周志鹏南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)抑制剂PES在热疗条件下对胃癌SGC-7901细胞自噬及耐药的影响。方法:将对数期生长的胃癌SGC-7901细胞分为四组:A组:43℃DMSO组,B组:37℃DMSO组,C组:43℃PES组,D组:37℃PES组。四组细胞按原定的处理条件培养... 详细信息

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)抑制剂PES在热疗条件下对胃癌SGC-7901细胞自噬及耐药的影响。方法:将对数期生长的胃癌SGC-7901细胞分为四组:A组:43℃DMSO组,B组:37℃DMSO组,C组:43℃PES组,D组:37℃PES组。四组细胞按原定的处理条件培养6小时。四组细胞培养结束后,利用Western-blot方法测定各组细胞热休克蛋白70(HSP70),P-糖蛋白(P-gp)及自噬标志蛋白(Beclin1)的表达情况。结果:各组HSP70表达情况为:A组(72.92±0.05)、B组DMSO(62.93±0.04)、C组(40.91±0.04)、D组(27.97±0.02)。结果显示各组胃癌SGC-7901细胞均能表达HSP70;A组VS B组(72.92±0.05 VS 62.93±0.04)比较差异有统计学意义(P<0.05),表明热疗(43℃)条件下能诱导胃癌SGC7901细胞高表达HSP70,使HSP70表达水平上升;A组VS C组(72.92±0.05 VS 40.91±0.04)、B组VS D组(62.93±0.04 VS 27.97±0.02),比较差异有统计学意义(P<0.05)表明在37℃及43℃的条件下PES均能抑制胃癌SGC7901细胞表达HSP70,使HSP70表达水平下调。各组P-gp表达情况为:A组(59.52±0.02)、B组(53.95±0.04)、C组(41.60±0.03)、D组(33.67±0.06)。结果显示各组胃癌SGC-7901细胞均能表达P-gp;A组VS B组(59.52±0.02 VS 53.95±0.04)比较差异有统计学意义(P<0.05),表明热疗(43℃)条件下能诱导胃癌SGC7901细胞高表达P-gp,使P-gp表达水平上升(P<0.05);A组VS C组(59.52±0.02 VS 41.60±0.03)、B组VS D组(53.95±0.04 VS 33.67±0.06)比较差异有统计学意义(P<0.05),表明在37℃及43℃的条件下PES均能抑制胃癌SGC7901细胞表达P-gp,使P-gp表达水平下调。各组Beclin1表达情况为:A组(88.09±0.05)、B组(68.79±0.03)、C组(56.73±0.03)、D组(41.31±0.04)结果显示各组胃癌SGC-7901细胞均能表达Beclin1;A组VS B组(88.09±0.05VS 68.79±0.03)比较差异有统计学意义(P<0.05),表明热疗(43℃)条件下能诱导胃癌SGC7901细胞高表达Beclin1,使Beclin1表达水平上升;A组VS C组(88.09±0.05 VS 56.73±0.03)、B组VS D组(68.79±0.03 VS 41.31±0.04)结果差异有统计学意义(P<0.05),表明在37℃及43℃的条件下PES均能抑制胃癌SGC7901细胞表达Beclin1,使Beclin1表达水平下调结论:在热疗(43℃)条件下PES能抑制P-gp蛋白及Beclin1蛋白表达,其机制可能与PES抑制胃癌SGC-7901细胞HSP70的表达有关。在热疗条件下PES能影响胃癌SGC-7901细胞的自噬及耐药。

关键词： PES 热休克蛋白70(HSP70) P-糖蛋白(P-gp) 自噬标志蛋白(Beclin1) 自噬

Apelin-13对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中自噬的影响

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Apelin-13对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中自噬的影响

作者：陈豪南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨Apelin-13对大鼠急性坏死性胰腺炎(Acute necrotic pancreatitis,ANP)自噬相关蛋白LC3-II、Beclin-1的影响。方法:取健康雄性SD大鼠54只,将它们随机分为C组(对照组)、P组(ANP组)、S组(ANP+Apelin-13治疗组),各组18只。C组为假手术组,P组SD大鼠以5%的牛黄胆酸钠胆胰管逆行推注制造急性坏死性胰腺炎模型,S组是造模后5min给予Apelin-13尾静脉注射干预组。P组和S组在建立急性坏死性胰腺炎模型后5min,分别尾静脉注射等量生理盐水和Apelin-13(0.1ug/g)。每组大鼠按不同的时相点分别于术后第3,6,12h麻醉后腹主动脉采血,采取血清检测淀粉酶;并取一部分胰腺组织用4%的甲醛固定,做常规病理切片和HE染色;另一部分用Western-Blot检测自噬有关蛋白LC3-II、Beclin-1的表达情况。结果:1.胰腺病理学评分:(1)P组、S组和C组之间各时间点的病理损伤评分差异有着显著性(P0.05)。(2)各个时点P组大鼠血清淀粉酶较C组(对照组)显著升高(P<0.05);与P组相比较,S组大鼠各时间点的血清淀粉酶有明显降低(P<0.05)。***-Blot检测LC3-II,Beclin-1蛋白的表达结果:与C组相比,在大鼠发生ANP 3h,6h,12h后P组自噬相关蛋白LC3-II、Beclin-1的蛋白表达均有着显著增加(P<0.05);然而与P组相比,S组各时间点自噬相关蛋白LC3-II和Beclin-1的蛋白表达水平出现明显降低(P<0.05)。结论:1、急性坏死性胰腺炎时自噬的表达是增加的,且这种自噬的表达会随着病理损伤程度加重而增加。2、Apelin-13可以明显抑制急性坏死性胰腺炎后大鼠胰腺组织细胞自噬相关蛋白Beclin-1,LC3-II的表达。

关键词： Apelin-13 急性坏死性胰腺炎自噬 Beclin-1 LC3

Apelin-13对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡影响的研究

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Apelin-13对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡影响的研究

作者：雷俊悦南华大学

学位级别：硕士

目的：研究Apelin-13对肝癌HepG2细胞的细胞增殖情况及增殖相关蛋白CyclinD1表达和细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Caspase3的表达水平的影响，为临床肝癌治疗药物的研发提供新的思路。方法：培养HepG2细胞，将同一批处于对数生长期的HepG2... 详细信息

目的：研究Apelin-13对肝癌HepG2细胞的细胞增殖情况及增殖相关蛋白CyclinD1表达和细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Caspase3的表达水平的影响，为临床肝癌治疗药物的研发提供新的思路。方法：培养HepG2细胞，将同一批处于对数生长期的HepG2细胞等量计数后，按实验分组：Apelin-13量效关系组（①10%FBS（对照组）;②0.0001μmol/L;③0.001μmol/L;④0.01μmol/L;⑤0.1μmol/L，处理时间为24h）;Apelin-13时效关系组（①0h（对照组）;②6h;③12h;④18h;⑤24h，处理浓度为0.1μmol/L）。通过MTT法检测处理后各组细胞的数量，比较不同Apelin-13浓度及处理时间下HepG2细胞的增殖情况。提取按时效及量效关系进行Apelin-13处理的HepG2细胞的蛋白，通过Western Blot检测并比较不同Apelin-13浓度及处理时间的HepG2细胞细胞增殖相关蛋白CyclinD1和细胞凋亡相关蛋白Caspase3的表达水平。结果：1.量效关系组：①10%FBS (对照组);②0.0001μmol/L;③0.001μmol/L;④0.01μmol/L;⑤0.1μmol/L， MTT检测各组细胞密度， OD值分别为：①0.464±0.025;②0.510±0.094;③0.547±0.174;④0.598±0.035;⑤0.654±0.016。Apelin-13呈浓度依赖促进HepG2细胞增殖，随Apelin-13浓度提高，细胞增殖增强，各组组间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。2.时效关系组：①0h(对照组);②6h;③12h;④18h;⑤24h;MTT检测各组细胞密度，OD值分别为：①0.489±0.030;②0.537±0.042;③0.587±0.042;④0.632±0.022;⑤0.681±0.016。Apelin-13呈时间依赖性促进HepG2细胞增殖，在24h内呈递增趋势，Apelin-13处理时间越长，细胞密度越高，各组组间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。3. Western blot法检测结果显示，Apelin-13按照量效及时效分别处理HepG2细胞后，量效关系组各组的CyclinD1蛋白的灰度值比值分别为（①0.544±0.026;②0.699±0.015;③0.831±0.012;④0.985±0.109;⑤1.160±0.098），时效关系组各组的CyclinD1蛋白的灰度值比值分别为（①0.582±0.020;②0.730±0.021;③0.891±0.020;④1.059±0.064;⑤1.290±0.041）CyclinD1随Apelin-13处理浓度的升高而升高，随处理时间延长而升高。各实验组与对照组比较具有显著性差异（P<0.01），各实验组组间两两比较具有显著性差异（P<0.05）。4. Western blot法检测结果显示，Apelin-13按照量效及时效处理HepG2细胞后，量效关系组各组的Caspase3蛋白的灰度值比值分别为（①1.024±0.092;②0.826±0.042;③0.683±0.063;④0.524±0.052;⑤0.259±0.010），时效关系组各组的Caspase3蛋白的灰度值比值分别为（①0.855±0.056;②0.694±0.046;③0.446±0.020;④0.269±0.017;⑤0.189±0.009）Caspase3随Apelin-13处理浓度的升高而降低，随处理时间延长而降低。各实验组与对照组比较具有显著性差异（P<0.01），各实验组组间两两比较具有显著性差异（P<0.05）。结论：1、Apelin-13能浓度依赖及时间依赖促进肝细胞癌HepG2细胞CyclinD1的表达，从而促进HepG2细胞的增殖。2、Apelin-13能浓度依赖及时间依赖抑制肝细胞癌HepG2细胞Caspase3的表达，从而抑制HepG2细胞的凋亡。

关键词： Apelin 肝细胞癌增殖凋亡

热疗条件下PES对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

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热疗条件下PES对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

作者：王志南华大学

学位级别：硕士

目的:研究热疗条件下PES对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法:将对数期生长的细胞分为四组:37℃DMSO组,37℃PES组,43℃DMSO组,43℃PES组。各组细胞在设定的处理条件下培养1小时后在37℃,5%CO2细胞培养基中... 详细信息

目的:研究热疗条件下PES对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法:将对数期生长的细胞分为四组:37℃DMSO组,37℃PES组,43℃DMSO组,43℃PES组。各组细胞在设定的处理条件下培养1小时后在37℃,5%CO2细胞培养基中继续培养:1.继续培养6h后,West-blot方法测定各组细胞HSP70的表达;***-8实验检测各组细胞处理后24h,48h及72h细胞的增殖情况;***小室实验检测各组细胞24h后细胞迁移及侵袭情况。结果:***-blot实验结果显示胃癌SGC-7901细胞能表达HSP70蛋白,热刺激(43℃)条件下能诱导胃癌SGC-7901细胞高表达HSP70蛋白(43℃DMSO组VS 37℃DMSO组:2.28±0.06 VS 1.52±0.01),使HSP70蛋白表达水平上升(P<0.05)。在温度37℃及43℃的条件下,PES均能能抑制胃癌SGC-7901细胞表达HSP70蛋白,(37℃PES组VS 37℃DMS组:0.76±0.02 VS 1.52±0.01,43℃PES组VS 37℃DMSO组:1.25±0.05VS1.52±0.01)使HSP70蛋白表达水平下调(P<0.05)。***-8实验结果显示:37℃DMSO组、43℃DMSO组、37℃PES组及43℃PES组对胃癌SGC-7901细胞增殖能力均有抑制(P<0.05),其中43℃PES的抑制效果最为明显(P<0.01)。***小室迁徙实验结果显示24h后细胞迁移数目:43℃DMSO(40.40±2.70)、37℃PES(25.40±2.97)及43℃PES(17.20±1.48)对胃癌SGC-7901细胞迁移能力相对37℃DMSO(50.80±2.86)组均有抑制(P<0.05),其中以43℃PES组的抑制效果最为明显(P<0.01)。Transwell小室侵袭实验结果显示24h后细胞侵袭数目:43℃DMSO(28.00±2.45)、37℃PES(17.60±1.95)及43℃PES(11.60±1.95)对胃癌SGC-7901细胞侵袭能力相对37℃DMSO(38.00±4.36)组均有抑制(P<0.05),其中以43℃PES组的抑制效果最为明显(P<0.01)。结论:PES在热疗条件下,能抑制胃癌SGC-7901细胞的增值、迁移及侵袭能力,其机制可能与PES抑制胃癌SGC-7901细胞HSP70蛋白的表达有关。

关键词： PES 热休克蛋白70 人胃癌SGC-7901细胞热疗

热疗增强PES对SGC7901细胞增殖抑制及NK细胞杀伤作用的研究

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热疗增强PES对SGC7901细胞增殖抑制及NK细胞杀伤作用的研究

作者：刘华柱南华大学

学位级别：硕士

目的:探讨热疗与PES(2-Phenylethynesulfonamide)对胃癌SGC7901细胞增殖活性以及NK细胞杀伤能力的影响,为基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据。方法:将人胃癌SGC7901细胞分为四组:37℃组,37℃PES组,43℃组,43℃PES组。37℃组细胞处理... 详细信息

目的:探讨热疗与PES(2-Phenylethynesulfonamide)对胃癌SGC7901细胞增殖活性以及NK细胞杀伤能力的影响,为基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据。方法:将人胃癌SGC7901细胞分为四组:37℃组,37℃PES组,43℃组,43℃PES组。37℃组细胞处理条件为37℃5%CO培养1小时,43℃组细胞处理条件为43℃5%CO培养1小时,PES组在各自温度条件下加入15μmol/L PES。各组细胞在设定条件下初步培养后继续在37℃5%CO培养基中培养6h后,各组加入NK细胞共培养24h。CCK-8实验检测热疗与PES对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率及NK细胞对胃癌SGC7901细胞的杀伤率;ELISA检测各组NK细胞穿孔素及颗粒酶B的释放情况。结果:***-8实验结果显示在三个不同时间段(6h、12h、24h),热疗对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率(%)分别为:(16.65±3.66)、(8.68±2.53)、(32.94±1.66),PES对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率(%)分别为(26.77±2.93)、(22.14±5.51)、(40.69±1.79),热疗与PES对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率(%)分别为(41.81±3.63)、(34.80±5.27)、(47.59±1.60),三个时间段各组细胞增殖抑制率比较均为43℃PES组>37℃PES组>43℃组,差异均具有统计学意义(P37℃组>43℃PES组>37℃PES组,差异均具有统计学意义(P37℃组>43℃PES组>37℃PES组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.热疗可增强PES对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制;2.热疗可以增强NK细胞对胃癌SGC7901细胞的杀伤,而PES对NK细胞的杀伤能力有抑制作用。

关键词：热疗细胞免疫胃癌 NK细胞 PES

Let-7d下调HMGA2对胃癌BGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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Let-7d下调HMGA2对胃癌BGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：何宝凤南华大学

学位级别：硕士

目的:研究Let-7d在胃癌进展中的作用及机制,为Let-7d是否可以作为新的胃癌分子标志物及发现新的胃癌发病机制提供实验依据。方法:1.从GEO数据库搜索符合条件的mi RNA芯片,利用在线分析工具GEO2R分析得到差异表达mi RNA,查阅文献得到候选... 详细信息

目的:研究Let-7d在胃癌进展中的作用及机制,为Let-7d是否可以作为新的胃癌分子标志物及发现新的胃癌发病机制提供实验依据。方法:1.从GEO数据库搜索符合条件的mi RNA芯片,利用在线分析工具GEO2R分析得到差异表达mi RNA,查阅文献得到候选mi RNA。通过Target Scan、mir DB、mir DIP三个数据库预测mi RNA的靶点m RNA,做Venn图,再通过查阅文献得到最终的靶基因,利用Starbase数据库预测mi RNA和靶基因的结合位点。2.q RT-PCR检测胃癌BGC-803细胞和正常胃黏膜GES-1细胞中的Let-7d和HMGA2的表达;***-7d mimic转染胃癌BGC-803细胞,使Let-7d过表达,检测过表达组和对照组的HMGA2的表达情况;4.对过表达组和对照组分别行CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验,检测两组的增殖、迁移和侵袭能力。结果:***数据库分析得到差异表达的mi RNA有7个:hsa-Let-7d、hsa-mi R-196a-5p、hsa-mi R-199a-5p、hsa-mi R-4636、hsa-mi R-27b-3p、hsa-mi R-125b-5p、hsa-mi R-23b-3p。查阅文献后,选择hsa-let-7d作为候选基因,通过三个数据库预测靶基因后做Venn图取交集后得到60个靶基因。通过查阅文献后得知HMGA2在胃癌的发生发展中发挥着重要作用。通过Starbase数据库分析Let-7d和HMGA2存在结合位点。2.q RT-PCR检测胃癌BGC-803细胞和正常胃黏膜细胞GES-1中的Let-7d和HMGA2的表达:胃癌BGC-803细胞中Let-7d的表达明显低于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(P<0.01)。胃癌BGC-803细胞中的HMGA2表达高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(P<0.05)。3.与对照组相比,转染了Let-7d mimic的胃癌BGC-803细胞(过表达组),HMGA2的表达明显降低(P<0.01)。***-8实验结果显示:对照组测得的48h的OD值为1.430±0.063,Let-7d mimic组48h时测得的OD值为0.995±0.109。Let-7d mimic(过表达)组在48h的增殖活性明显低于对照组(P<0.01)。5.划痕实验结果显示:对照组在0h、48h测得的划痕宽度分别为1.955±0.041、0.390±0.088,Let-7d mimic组在0h、48h测得的划痕宽度分别为1.992±0.058)、1.447±0.168。Let-7d mimic组在48h的迁移能力明显低于对照组(P<0.01)。***实验结果显示:对照组在48h测得的细胞侵袭数为55.00±3.00,Let-7d mimic组在48h测得的细胞侵袭数为33.1±7.75。Let-7d mimic组在48h的侵袭能力明显低于对照组(P<0.01)。结论:***-7d在胃癌BGC-803细胞中表达下调,HMGA2在胃癌BGC-803细胞中表达上调。***-7d下调HMGA2抑制胃癌BGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： Let-7d HMGA2 胃癌

热疗对不同分化程度胃癌细胞增殖侵袭能力及Hsp70蛋白表达的影响

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热疗对不同分化程度胃癌细胞增殖侵袭能力及Hsp70蛋白表达的影响

作者：龙明炬南华大学

学位级别：硕士

目的:研究热疗对三种不同分化程度的胃癌细胞株增殖活性、侵袭能力及Hsp70蛋白表达的影响,初步探索不同分化程度的胃癌细胞对热疗的敏感性差异,为胃癌病人的个体化热疗提供理论依据,并初步探讨Hsp70蛋白在不同分化程度的胃癌细胞株中的... 详细信息

目的:研究热疗对三种不同分化程度的胃癌细胞株增殖活性、侵袭能力及Hsp70蛋白表达的影响,初步探索不同分化程度的胃癌细胞对热疗的敏感性差异,为胃癌病人的个体化热疗提供理论依据,并初步探讨Hsp70蛋白在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达情况。方法:将AGS(高分化)、SGC7901(中分化)、BGC-823(低分化)三种不同分化程度的胃癌细胞株在适宜的条件下体外培养至对数生长期,取该对数生长期细胞进行实验研究。将此三种不同分化程度的胃癌细胞株分为AGS热疗组、AGS常温组、SGC7901热疗组、SGC7901常温组、BGC-823热疗组、BGC-823常温组。热疗组细胞处理条件为43℃5%CO2热处理1小时后继续在37℃5%CO2条件下培养23小时;常温组细胞处理条件为37℃5%CO2连续培养24小时。热疗组和常温组细胞总的处理时间均为24小时。将进行了相应处理后的细胞分别进行如下实验:***实验,比较热疗组与常温组不同分化程度的胃癌细胞的增殖活性;***细胞侵袭实验,检测热疗组与常温组各细胞侵袭的数目;***-blot实验检测热疗组与常温组各细胞Hsp70蛋白的表达情况。结果:***实验结果显示:与常温组相比,热疗组不同分化程度的胃癌细胞OD值均明显降低,差异具有统计学意义(均PSGC7901>BGC-823(PSGC7901>BGC-823(PAGS(PBGC-823(P>0.05),BGC-823>AGS(P>0.05)。***细胞侵袭实验结果:热疗组和常温组不同分化程度胃癌细胞株侵袭细胞数目(个)分别为:AGS热疗组(31.80±1.79)、AGS常温组(84.60±4.16)、SGC7901热疗组(48.80±4.49)、SGC7901常温组(104.60±3.21)、BGC-823热疗组(76.00±7.38)、BGC-823常温组(124.60±1.14)。与常温组相比,热疗组各胃癌细胞侵袭细胞数目均减少,差异具有统计学意义(均PSGC7901>BGC-823(PBGC-823>AGS(P<0.05)。结论:1.热疗对胃癌AGS、SGC7901、BGC-823三种不同分化程度的细胞增殖活性、侵袭能力均有抑制作用,且细胞的分化程度越高,热疗的抑制作用越强。2.热疗能促进胃癌AGS、SGC7901、BGC-823三种不同分化程度的细胞Hsp70蛋白的表达上调。

关键词：热疗分化程度胃癌增殖活性热休克蛋白-70

DcR3 siRNA活化Caspase依赖的线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡的研究

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DcR3 siRNA活化Caspase依赖的线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡的研究

作者：曹超南华大学

学位级别：硕士

目的探讨诱捕受体（decoy receptor3，DcR3）RNA干扰对HepG2细胞体外抑制作用及诱导其凋亡机制。方法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测DcR3在肝癌细胞中的表达情况;MTT法检测DcR3siRNA对肝癌HepG2细胞增殖的影响;光学显微镜... 详细信息

目的探讨诱捕受体（decoy receptor3，DcR3）RNA干扰对HepG2细胞体外抑制作用及诱导其凋亡机制。方法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测DcR3在肝癌细胞中的表达情况;MTT法检测DcR3siRNA对肝癌HepG2细胞增殖的影响;光学显微镜检测DcR3siRNA对肝癌HepG2细胞形态学改变;罗丹明123（Rh123）和碘化丙啶（PI）双染，流式细胞术分析测定细胞线粒体膜电位和凋亡率;Caspase-9分光光度法检测试剂盒检测经DcR3siRNA处理后人肝癌HepG2细胞中Caspase-9活性;Western blot检测DcR3siRNA处理后肝癌HepG2细胞中线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白细胞色素C（Cyt c）、Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2等表达。结果 DcR3mRNA在人肝癌HepG2细胞中表达水平是正常肝L-02细胞的3.76倍。MTT显示，DcR3siRNA对人肝癌HepG2细胞生长有显著抑制作用，呈时间和剂量依赖性。转染40μmol·L-1DcR3siRNA12h、24h、48h后OD值分别为（0.26±0.03）、（0.33±0.03）、（0.35±0.02），分别与对照组比较，差异均有统计学意义（p＜0.05）;转染DcR3siRNA（20μmol·L-1、40μmol·L-1、80μmol·L-1）及对照NC24h后其OD值分别为（0.21±0.03）、（0.34±0.03）、（0.38±0.04），分别与对照组比较，差异均有统计学意义（p＜0.05）。形态学观察发现，DcR3siRNA处理24h后，部分HepG2细胞变圆，体积明显缩小，胞质强嗜酸性，核固缩、深染，核染色质积聚至核膜周边，呈现典型凋亡细胞形态。Rh123/PI双染FCM检测结果显示，40μmol·L-1DcR3siRNA处理人肝癌HepG2细胞12h、24h、48h后，HepG2细胞中Rh123荧光强度逐渐降低，凋亡率逐渐增加，呈现时间依赖性关系，与对照组相比，差异均有统计学意义（p＜0.05）;40μmol·L-1DcR3siRNA合用Ac-LEHD-CHO组（Caspase-9特异性抑制剂香荚兰醛）处理24h后Rh123荧光强度及凋亡率与单用DcR3siRNA处理组比较，差异有统计学意义（p＜0.05）。Caspase-9分光光度法检测发现DcR3siRNA能以时间依赖方式增加Caspase-9活性，40μmol·L-1DcR3siRNA处理人肝癌HepG2细胞12h、24h、48h后，Caspase-9活性分别为对照组的（5.4±0.4）、（7.8±0.5）和（8.9±0.7）倍，且Ac-LEHD-CHO能拮抗DcR3siRNA对Caspase-9活性作用。Western blot检测结果显示，40μmol·L-1DcR3siRNA能促进Cyt c释放，Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达下调，Ac-LEHD-CHO可以拮抗上述作用。结论 DcR3siRNA能抑制人肝癌HepG2细胞增殖，并通过活化Caspase依赖的线粒体信号传导途径诱导其凋亡。

关键词：诱捕受体肝癌凋亡线粒体跨膜电位

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PRMT2在胃癌组织中的表达及临床意义

PRMT2在胃癌组织中的表达及临床意义

作者：曾奎南华大学

学位级别：硕士

目的:检测蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)在胃癌组织中的表达情况,探讨PRMT2与胃癌患者临床资料及预后之间的关系。方法:入组105例于2016年1月至12月期间在南华大学附属第一医院胃肠外科行手术治疗并经术后病理确诊为胃癌的患者,收集... 详细信息

目的:检测蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)在胃癌组织中的表达情况,探讨PRMT2与胃癌患者临床资料及预后之间的关系。方法:入组105例于2016年1月至12月期间在南华大学附属第一医院胃肠外科行手术治疗并经术后病理确诊为胃癌的患者,收集患者术后癌组织及癌旁组织石蜡病理切片,采用免疫组织化学染色法分别检测胃癌及癌旁组织中PRMT2的表达情况并进行病理评分。收集105例入组患者的临床资料,分析PRMT2与临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、浸润深度、淋巴转移、远处转移、病理类型、分化程度、肿瘤部位)之间的相关性。同时对患者进行生存随访以评估PRMT2表达与生存预后之间的关系。结果:PRMT2阳性呈淡黄色颗粒状且主要表达于胞浆中。在105例人胃癌组织中共81例PRMT2表达阳性(77.14%),在癌旁组织中的PRMT2阳性表达12例(11.43%),在胃癌组织中PRMT2阳性表达高于癌旁组织(P<0.05)。相关性分析表明PRMT2表达与胃癌病理类型(P<0.001)及3年OS(P=0.02)存在明显相关性,K-M法生存分析显示PRMT2阴性组预后优于阳性组(P=0.041),PRMT2高表达组预后较低表达组更差(P<0.001)。单因素COX分析显示PRMT2表达、肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴转移、远处转移是胃癌不良预后的预测因素(均P<0.05),进一步的多因素COX分析表明PRMT2表达(P=0.006)、淋巴转移(P=0.007)为影响胃癌预后的独立危险因素。结论:PRMT2在胃癌组织中的阳性表达高于癌旁组织,PRMT2表达与不良病理类型相关。PRMT2阳性表达与胃癌预后不良相关,是导致胃癌预后不良的独立危险因素。

关键词：蛋白质精氨酸甲基转移酶2 胃癌预后

活性氧介导5，7-二甲氧基黄酮诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的实验研究

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活性氧介导5，7-二甲氧基黄酮诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的实验研...

作者：张艳生南华大学

学位级别：硕士

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,5,7-DMF)是否具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用;并探讨其作用机制是否涉及促进活性氧(reactiveoxygen species, ROS)生成。方法体外培养人结肠癌HT-29细胞，采用酶联免疫吸附法(enz... 详细信息

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,5,7-DMF)是否具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用;并探讨其作用机制是否涉及促进活性氧(reactiveoxygen species, ROS)生成。方法体外培养人结肠癌HT-29细胞，采用酶联免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)测定5,7-DMF对HT-29细胞组蛋白/DNA碎片的影响。碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式细胞术(flow cytometry, FCM)定量分析5,7-DMF对HT-29细胞凋亡率的影响;二氯荧光素二乙酯(2’7’-dichlorofluoresein diacetate, DCFH-DA)荧光标记FCM检测5,7-DMF对HT-29细胞ROS生成的影响。结果 ELISA测定结果显示，5,7-DMF以浓度依赖方式诱导人结肠癌HT-29细胞DNA组蛋白/DNA碎片水平增高(P＜0.05)。PI染色FCM结果表明，5,7-DMF促进HT-29细胞凋亡率增加，呈浓度依赖性(P＜0.05)。DCFH-DA荧光标记FCM结果发现，5,7-DMF显著激活HT-29细胞ROS产生(P＜0.05)。此外，N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC,10mmol/L)预孵育能有效阻断5,7-DMF诱导HT-29细胞ROS生成和细胞凋亡作用(P＜0.05)。结论 1.5,7-DMF具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用，呈浓度依耐性。 2.5,7-DMF能有效刺激HT-29细胞ROS生成。 3.5,7-DMF诱导HT-29细胞凋亡作用与其促进细胞内ROS增加相关。

关键词：结肠癌 5,7-二甲氧基黄酮细胞凋亡活性氧