检索结果-南通市图书馆

作者：吴宁大连工业大学

学位级别：硕士

本论文主要研究了用Fe3+无机催化法将PPD转化为人参皂苷Rg3、Rg5和RK1,对反应条件进行优化,并进行Rg3、Rg5、RK1粗产品的分离提纯及精制。本实验以人参二醇皂苷PPD为底物,Fe3+为催化剂,初步确定催化人参皂苷的主要产物是Rg3的反应条件... 详细信息

本论文主要研究了用Fe3+无机催化法将PPD转化为人参皂苷Rg3、Rg5和RK1,对反应条件进行优化,并进行Rg3、Rg5、RK1粗产品的分离提纯及精制。本实验以人参二醇皂苷PPD为底物,Fe3+为催化剂,初步确定催化人参皂苷的主要产物是Rg3的反应条件为：底物浓度1.6%,Fe3+浓度1050 mmol/L,温度50℃,时间10 h。人参皂苷无机催化产物主要含Rg5、RK1最佳反应条件是：底物浓度为0.1%,Fe3+浓度为1800 mmol/L,温度5℃,时间88 h。AB-8大孔吸附树脂对催化产物进行分离,再用硅胶柱进一步分离提纯。7倍柱体积的46%乙醇能将皂苷Rg3洗脱下来,用5倍柱体积66%乙醇将皂苷Rg5洗脱下来。PPD经Fe3+催化后,经过AB-8大孔吸附树脂吸附分离和硅胶柱进一步提纯分别得到较纯Rg3得率为14.10%。Rg5和RK2得率为17.10%。6倍柱体积的46%乙醇能将皂苷Rg3洗脱下来,用7倍柱体积66%乙醇将皂苷Rg5洗脱下来。PPD经催化反应后,经过AB—8大孔吸附树脂吸附分离和硅胶柱进一步提纯分别得到较纯Rg3得率为3.32%,Rg5和RK1得率为18.91%。

关键词：无机催化 Fe3+ 人参皂苷Rg3 人参皂苷Rg5 人参皂苷RK1

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微生物产人参皂苷Rb1水解酶的酶性质研究

微生物产人参皂苷Rb1水解酶的酶性质研究

作者：张妍大连工业大学

学位级别：硕士

本论文以研究Arthrobacter chloropHenolicus ***0202菌所产人参皂苷Rb1水解酶为研究对象,主要研究了该菌的发酵条件、该人参皂苷Rb1水解酶粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的酶性质及酶特性。通过实验,发现GS0202菌分别在20℃... 详细信息

本论文以研究Arthrobacter chloropHenolicus ***0202菌所产人参皂苷Rb1水解酶为研究对象,主要研究了该菌的发酵条件、该人参皂苷Rb1水解酶粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的酶性质及酶特性。通过实验,发现GS0202菌分别在20℃和60℃培养下所产人参皂苷Rb1水解酶的主要水解产物不同,分别为人参皂苷F2和人参皂苷Rg3。并确定了该菌在20℃培养下的最佳发酵时间为7天,在60℃培养下的最佳发酵时间为4天。20℃培养下的人参皂苷Rb1水解酶粗酶液的酶反应条件为：最佳底物浓度为0.25%;最佳pH为5.0;最佳酶浓缩倍数为4倍;最佳反应温度为35℃;最佳反应时间为22h。60℃培养下的人参皂苷Rb1水解酶粗酶液的酶反应条件为：最佳底物浓度为0.25%;最佳pH为5.0;最佳酶浓缩倍数为10倍;最佳反应温度为40℃;最佳反应时间为20h。对这两种培养温度下得到的粗酶液进行电泳检测,找到了4条差异蛋白带,它们的分子量分别约为66kDa、47kDa、35kDa、22kDa。用DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱对60℃培养下的人参皂苷Rb1水解酶粗酶液进行分离纯化,提纯酶用SDS-PAGE检测,得到了电泳单带,并由SDS-PAGE确定提纯酶的分子量约为66kDa,与第一条差异蛋白带的分子量是相吻合的。通过对提纯酶酶性质的研究可知,人参皂苷Rbl水解酶的酶反应最佳pH为5.0;最佳温度40℃;该酶在pH3.0～7.0,20℃～60℃范围内酶活力相对稳定;金属离子对酶活力的影响为：K+、Na+、Zn2+对酶活力影响很小;Ca2+、Mg2+、Cu2+对酶活力有明显的抑制作用;酶反应动力学参数为Vmax=0.1275mmol/(h·L),Km=4.392mmol/L。提纯酶的酶特性研究表明,此酶只水解人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd-C-20位上的葡萄糖苷键,分步水解人参皂苷Rb1经过人参皂苷Rd最终生成人参皂苷Rg3。此酶不具有pNP-β-D-Gal、pNP-α-D-Gal、pNP-β-D-Glc、pNP-α-D-Glc、pNP-α-L-Rha及α-淀粉酶活力。

关键词：人参皂苷Rb1 人参皂苷Rg3 人参皂苷F2 人参皂苷Rb1水解酶

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人参皂苷糖基的无机催化

人参皂苷糖基的无机催化

作者：孙秀艳大连工业大学

学位级别：硕士

本实验以研究Fe3+无机催化人参皂苷为目的,以人参皂苷PPD为底物,以Fe3+为催化剂,大量制备人参皂苷PPD的催化产物,并对其进行分离纯化。同时,还研究了Fe3+对其他糖苷类物质的催化作用。采用AB-8大孔吸附树脂分离催化产物和Fe3+,确定用5... 详细信息

本实验以研究Fe3+无机催化人参皂苷为目的,以人参皂苷PPD为底物,以Fe3+为催化剂,大量制备人参皂苷PPD的催化产物,并对其进行分离纯化。同时,还研究了Fe3+对其他糖苷类物质的催化作用。采用AB-8大孔吸附树脂分离催化产物和Fe3+,确定用5倍柱体积的去离子水洗脱Fe3+,用5倍柱体积的83%的乙醇洗脱人参皂苷。结果表明,利用AB-8大孔吸附树脂可以将Fe3+和人参皂苷完全分离。利用硅胶柱层析法将人参皂苷PPD的催化产物进行纯化,经HPLC检测得到五种物质,Rh2.20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1和Rg5。 Fe3+催化人参皂苷的主要产物是Rg3,通过试验确定,V(氯仿)：V(甲醇)=8.5：1.5的洗脱液进行洗脱的Rg3相对较纯。 Fe3+对其他糖苷类物质的研究表明,Fe3+对淀粉有催化作用,而对麦冬多糖、CMC和pNP系列物质都没有明显的催化作用。Fe3+对其他天然苷类中的人参皂苷Rf和Rg3,虎眼万年青皂苷LM、虎眼万年青皂苷GH、黄芪总皂苷均有催化作用。说明Fe3+催化作用是有选择性的。

关键词：无机催化人参皂苷Rg3 Fe3+

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异槲皮苷葡萄糖基水解酶的纯化及酶学性质

异槲皮苷葡萄糖基水解酶的纯化及酶学性质

作者：辛国华大连工业大学

学位级别：硕士

本文旨在对微生物Absidia sp.R9g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行提取、分离、纯化,同时对该提纯酶的最适温度、温度稳定性、最适pH、pH稳定性、金属离子的影响、反应动力学等酶学性质进行研究。Absidia sp.R9g发酵粗酶液先后经葡聚糖凝... 详细信息

本文旨在对微生物Absidia sp.R9g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行提取、分离、纯化,同时对该提纯酶的最适温度、温度稳定性、最适pH、pH稳定性、金属离子的影响、反应动力学等酶学性质进行研究。Absidia sp.R9g发酵粗酶液先后经葡聚糖凝胶Sephadex G-100分子筛层析柱和DEAE-Cellulose DE52阴离子交换柱分离得到纯酶,该提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱法进行了纯度检测,结果显示其纯度较高,同时确定异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶蛋白的分子量约为50 kDa。对提纯酶的酶性质研究表明异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的最适温度为50℃,最适pH为5.0,在温度60℃以下,pH 3.0-7.0范围内酶活力较稳定,Na+、K+、Ca2+三种金属离子对异槲皮苷-β葡萄糖苷酶的酶活力的影响不大,而Fe3+、Cu2+两种金属离子对异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶有很明显的抑制作用:其酶反应动力学方程为:1/V=0.307+17.7/S,最大反应速度Vmax=3.26 mmol/L.h,米氏常数Km=57.6 mmol/L。

关键词：异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶分离纯化酶性质

白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶分离纯化及基因的克隆

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白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶分离纯化及基因的克隆

作者：刘欣茹大连工业大学

学位级别：硕士

白头翁皂苷糖基水解酶能够特异性的水解白头翁皂苷上的糖苷键,使多糖基白头翁皂苷转化为低糖基白头翁皂苷,不仅能提高白头翁皂苷的生物利用率,还可以提高其药效价值。本论文主要对Absidia sp.P00r菌发酵产的白头翁皂苷糖基水解II型酶的... 详细信息

白头翁皂苷糖基水解酶能够特异性的水解白头翁皂苷上的糖苷键,使多糖基白头翁皂苷转化为低糖基白头翁皂苷,不仅能提高白头翁皂苷的生物利用率,还可以提高其药效价值。本论文主要对Absidia sp.P00r菌发酵产的白头翁皂苷糖基水解II型酶的分离纯化和基因调取进行了研究。在Absidia sp.P00r菌的液体发酵培养研究中发现,白头翁皂苷糖基水解II型酶在以70%的槐花浸出液为诱导物配制的5°麦芽汁培养基培养120 h时,产量较大,诱导效果较好。利用DEAE-Cellulose(DE52)阴离子交换柱进行分离纯化,得到电泳纯的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白,将该酶通过蛋白质电印迹转膜至PVDF膜上后,经过蛋白质N-端序列测定,确定该酶N-端序列为YPDSVQHAETVQNLI。根据测得的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白N-端序列和测得的肽质谱数据登陆NCBI网站和Matrixscience网站的蛋白质数据库进行比对,查找同源性,并根据同源性设计引物。根据白头翁皂苷糖基水解II型酶的N-端序列设计简并引物,以Absidia sp.P00r菌株的mRNA为模板,采用RT-PCR进行基因序列的调取;根据3’RACE和5’RACE技术扩增白头翁皂苷糖基水解II型酶的3’端和5’端的基因片段并测序,得到白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全序列,最后对调取的基因序列进行序列分析。白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全长为1376 bp,其中14 bp为5’UTR,长度为84 bp;85137 bp为基因的CDS区,长度为1053 bp;可编码351个氨基酸;1138365bp为3’UTR,长度为228 bp;1366376 bp为Poly A部分,长度为11 bp。

关键词：白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶蛋白纯化 N-末端序列 RACE技术

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生物酶法转化绞股蓝皂苷的研究

生物酶法转化绞股蓝皂苷的研究

作者：杨宇大连工业大学

学位级别：硕士

本论文以酶法转化绞股蓝皂苷为目的,对绞股蓝皂苷的分离、提取、绞股蓝皂苷糖苷酶产生菌种的发酵条件、绞股蓝皂苷糖苷酶的酶学性质三方面进行了研究。采用醇提法对绞股蓝皂苷进行提取,提取液经石油醚脱脂、AB-8大孔吸附树脂脱糖后,制... 详细信息

本论文以酶法转化绞股蓝皂苷为目的,对绞股蓝皂苷的分离、提取、绞股蓝皂苷糖苷酶产生菌种的发酵条件、绞股蓝皂苷糖苷酶的酶学性质三方面进行了研究。采用醇提法对绞股蓝皂苷进行提取,提取液经石油醚脱脂、AB-8大孔吸附树脂脱糖后,制得绞股蓝总皂苷,提取率为2.43%。利用硅胶柱层析法对绞股蓝总皂苷进行了分离纯化,制得多糖基绞股蓝皂苷。以多糖基绞股蓝皂苷为底物,检验了8种菌所产酶对底物的水解能力,从中筛选出高产绞股蓝皂苷糖苷酶菌株Absida ***4r。发酵条件研究表明：菌种Absida ***4r在30℃下发酵培养6天所提取的酶液对底物的水解能力最佳。最佳诱导物为绞股蓝,最适诱导物浓度为20%。采用离子交换层析法对粗酶液进行了分离纯化,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了纯度检测,确定其分子量约为67kDa。酶学性质研究表明：该酶酶反应的最适pH为5.0、在pH4.0～8.0范围内稳定：最适温度为30℃;在40℃以下稳定性较好;Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+五种离子对该酶影响不大,Fe3+、Cu22+对该酶的酶活力有明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,Vmax为1.0mmol/(L·h), Km为32.76mmol/L。

关键词：绞股蓝绞股蓝皂苷绞股蓝皂苷糖苷酶

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丹参素转化酶的分离纯化及酶性质研究

丹参素转化酶的分离纯化及酶性质研究

作者：冯芳侠大连工业大学

学位级别：硕士

本论文以微生物所产丹参素转化酶为研究对象,主要研究了微生物发酵粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的性质及酶反应特性。通过实验,确定了粗酶液的酶反应条件为:最适底物浓度为2%;最适pH为5.0;最适反应时间为8h;最适反应温度... 详细信息

本论文以微生物所产丹参素转化酶为研究对象,主要研究了微生物发酵粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的性质及酶反应特性。通过实验,确定了粗酶液的酶反应条件为:最适底物浓度为2%;最适pH为5.0;最适反应时间为8h;最适反应温度为45℃。用DEAE-celluloseDE52阴离子交换柱对上述粗酶液进行分离纯化,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳检测纯化度,得到了单带,并由SDS-PAGE确定提纯酶的分子量为60BKDa。对提纯酶的酶性质研究可知,丹参素转化酶的最适pH值为5.0;最适温度45℃;最适反应时间为8h;pH范围在3～7时酶活力稳定;温度范围在25℃～60℃时酶活力稳定;金属离子对酶活力的影响为:Fe3+、Cu2+、Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+对酶活力有激活作用;Zn2+、K+、Na+对酶活力影响不大;酶反应的Vmax=7.246mmlo/L·h,Km=68.03mmol/L。提纯酶的酶反应特性为,此酶具有pNP-β-D-Gal、pNPR、pNPP酶活力;对pNP-a-D-GLc具有弱的水解活力;不具有pNP-β-D-GLc、pNP-α-D-Gal及α-淀粉酶活力。

关键词：丹参素丹参素转化酶酶分离纯化酶性质

人参皂苷Re的FeCl3催化转化及产物组成分析

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人参皂苷Re的FeCl3催化转化及产物组成分析

作者：娄玲玲大连工业大学

学位级别：硕士

人参皂苷Rh1具有抗肿瘤、护肝、提高免疫力等良好的功能,近年来,人参皂苷Rh1的制备受到了广泛的关注。但是人参皂苷Rh1在人参中的含量极低,从植物中直接提取成本很高,而利用人参三醇类皂苷Re等催化转化制备Rh1就成为可行的方法。本论文... 详细信息

人参皂苷Rh1具有抗肿瘤、护肝、提高免疫力等良好的功能,近年来,人参皂苷Rh1的制备受到了广泛的关注。但是人参皂苷Rh1在人参中的含量极低,从植物中直接提取成本很高,而利用人参三醇类皂苷Re等催化转化制备Rh1就成为可行的方法。本论文以人参三醇类皂苷Re为底物,FeCl作为催化剂,主要研究了Rh1的催化转化工艺,并对制备的产物进行了组成分析。为提高人参皂苷Rh1的转化率,对反应条件做了单因素实验,最终确定在乙醇体系下FeCl催化人参皂苷Re水解的最佳条件是:70%(V/V)的乙醇溶液,Fe浓度为0.65mol/L,Re的浓度为10 g/L,温度为60℃,反应时间为17 h。根据上述最优反应条件进行产物制备,得率为75%(W/W)。对产物进行组成分析,结果表明产物中主要由20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rk3和Rh4、Rg4和Rg6等组成,其中人参皂苷20(S)-Rh1和20(R)-Rh1的含量分别为7.19%(W/W)和4.00%(W/W)。产物的硅胶柱层析分离纯化得到20(R)-Rh1和20(S)-Rh1组分混合品,其中20(S)-Rh1的含量为64.15%(W/W),20(R)-Rh1的含量为33.70%(W/W),二者的比例约为6:4,纯化样品的纯度达97.85%。

关键词：离子催化 FeCl3 人参皂苷高效液相色谱硅胶柱层析分离

人参二醇类皂苷的金属离子催化反应中水合反应的研究

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人参二醇类皂苷的金属离子催化反应中水合反应的研究

作者：桂琳大连工业大学

学位级别：硕士

本论文针对金属离子在醇-水溶剂中催化人参二醇类皂苷生成20(S,R)-Rg3的同时伴随有脱水和水合的反应现象,主要研究脱水反应产物Rk1和Rg5的水合反应,考察不同条件因素对水合反应的影响,并对水合反应产物进行了组分分析。对无水条件下金... 详细信息

本论文针对金属离子在醇-水溶剂中催化人参二醇类皂苷生成20(S,R)-Rg3的同时伴随有脱水和水合的反应现象,主要研究脱水反应产物Rk1和Rg5的水合反应,考察不同条件因素对水合反应的影响,并对水合反应产物进行了组分分析。对无水条件下金属离子催化人参皂苷Rb1的反应进行优化,最佳反应条件是以无水乙醇为溶剂,Fe浓度为0.4 mol/L,反应温度为40℃,反应时间14 h,底物浓度为1.8%(W/V)。反应产物HPLC分析结果表明,产物主要为Rk1和Rg5,含量为72.07%(W/W)。表明无水条件下人参皂苷Rb1在Fe的催化下主要进行糖苷键的裂解和C20的脱水反应。对醇-水溶剂体系下金属离子催化转化人参皂苷Rk1和Rg5的水合反应进行了研究。反应至30 h,产物中20(S,R)-25OH-Rg3、20(S,R)-Rg3、Rk1和Rg5的含量分别为74.01%(W/W)、11.34%(W/W)和7.26%(W/W),水合反应的主要产物为20(S,R)-25OH-Rg3,同时有少量的20(S,R)-Rg3产生。表明醇-水溶剂中人参皂苷Rk1和Rg5在Fe的催化下,主要对C20和C24位上的烯键进行水合反应。

关键词：金属离子人参皂苷Rk1 催化转化

生物转化法和无机催化法制备人参二醇类苷元的研究

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生物转化法和无机催化法制备人参二醇类苷元的研究

作者：张沛大连工业大学

学位级别：硕士

本文研究了生物酶法和Fe3+无机催化法水解人参二醇类皂苷制备苷元(PPD),并对产物进行了分离纯化。生物酶法催化反应中,菌株***.G48r在3.5%的人参诱导下、培养9d可以产水解人参皂苷20(R)-Rg3的酶;该菌株在1.5%的人参诱导下,培养6d可以产... 详细信息

本文研究了生物酶法和Fe3+无机催化法水解人参二醇类皂苷制备苷元(PPD),并对产物进行了分离纯化。生物酶法催化反应中,菌株***.G48r在3.5%的人参诱导下、培养9d可以产水解人参皂苷20(R)-Rg3的酶;该菌株在1.5%的人参诱导下,培养6d可以产水解人参皂苷20(S)-Rg3的酶。20(R)-Rg3生成PPD最佳酶反应条件为:浓度***/ml、温度50℃C、pH 4.0、时间60h;20(S)-Rg3生成PPD最佳酶反应条件为:浓度为2.0mg/ml,温度50℃C,pH5.0,时间 24h。1.0g人参皂苷Rg3(R:S=14:86)在最适条件下,进行酶反应,经正丁醇萃取后得人参皂苷粗品0.772g,得率为77.2%,再经石油醚萃取得人参皂苷0.117g,得率为11.7%。经两步有机萃取后,产物人参皂苷元含量由80.06%上升为86.94%。Fe3+无机催化法中,探讨了底物浓度、Fe3+浓度、温度、反应时间对反应效果的影响,得出此实验方法中最佳反应条件为:底物浓度3.0mg/ml,Fe3+浓度为1.8mmol/L,反应温度为50℃℃,反应时间为30h。1.5g人参皂苷C-K在最佳条件下反应,经乙酸乙酯萃取后得人参皂苷粗品0.825g,得率为55.0%,再经石油醚萃取后得人参皂苷0.131g,得率为8.7%。经两步有机萃取后,产物人参皂苷元含量由71.34%上升为84.45%。

关键词：人参二醇类苷元 PPD 生物转化无机催化 Fe3+