异槲皮苷葡萄糖基水解酶的纯化及酶学性质

作     者：辛国华 

作者单位：大连工业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：鱼红闪

授予年度：2014年

学科分类：081703[工学-生物化工] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

主      题：异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶 分离纯化 酶性质 

摘      要：本文旨在对微生物Absidia sp.R9g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行提取、分离、纯化,同时对该提纯酶的最适温度、温度稳定性、最适pH、pH稳定性、金属离子的影响、反应动力学等酶学性质进行研究。Absidia sp.R9g发酵粗酶液先后经葡聚糖凝胶Sephadex G-100分子筛层析柱和DEAE-Cellulose DE52阴离子交换柱分离得到纯酶,该提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱法进行了纯度检测,结果显示其纯度较高,同时确定异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶蛋白的分子量约为50 kDa。对提纯酶的酶性质研究表明异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的最适温度为50℃,最适pH为5.0,在温度60℃以下,pH 3.0-7.0范围内酶活力较稳定,Na+、K+、Ca2+三种金属离子对异槲皮苷-β葡萄糖苷酶的酶活力的影响不大,而Fe3+、Cu2+两种金属离子对异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶有很明显的抑制作用:其酶反应动力学方程为:1/V=0.307+17.7/S,最大反应速度Vmax=3.26 mmol/L.h,米氏常数Km=57.6 mmol/L。