检索结果-南通市图书馆

作者：李真真华中农业大学

学位级别：硕士

二化螟(Chilo suppressalis)属鳞翅目害虫,是对我国水稻(Oryza sativa)产业为害最严重的害虫之一。Cry晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在孢子形成的过程中产生的杀虫蛋白,在防治二化螟等害虫中发挥巨大的作用。探索... 详细信息

二化螟(Chilo suppressalis)属鳞翅目害虫,是对我国水稻(Oryza sativa)产业为害最严重的害虫之一。Cry晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在孢子形成的过程中产生的杀虫蛋白,在防治二化螟等害虫中发挥巨大的作用。探索昆虫防御Cry杀虫蛋白的调控机制,为在实际生产中更好地利用Cry杀虫蛋白提供新的技术思路。Micro RNA(miRNA)可参与调控生物的许多重要生理过程,有研究显示某些昆虫miRNA的靶基因是免疫信号通路MAPK中的关键因子,且本实验室已有研究结果显示,二化螟p38 MAPK参与幼虫对Cry1Ca的防御过程。因此,本研究基于Illumina Solexa二代测序技术对经Cry1Ca诱导处理的二化螟中肠miRNA进行测序,注释并分析差异表达miRNA,并根据靶基因预测筛选出可能参与二化螟Cry1Ca防御反应的miRNA,通过对候选miRNA是否参与防御过程的功能研究,最后鉴定可增效生物农药的新靶标。研究结果不仅为解析昆虫对Cry蛋白的防御机制提供新的理论基础和数据支持,同时为增强Bt制剂及转Bt作物对昆虫的毒力、延缓昆虫抗性发展的新技术提供了靶标。主要结果如下:1、Cry1Ca处理组和对照转录组中小RNA分布峰值均为22 nt,被注释的已知小RNA比例都很低,分别为7.2%和7.9%。Cry1Ca处理后,二化螟中肠内miRNA、son RNA、sn RNA、r RNA、pi RNA数量均少于对照。与对照相比,Cry1Ca处理后二化螟中肠内共有358个小RNA表达上调,747个小RNA表达下调;25个差异表达量最高的已知miRNA中,表达量显著上调的miRNA有3个,表达量显著下调的miRNA有22个;而在66个新预测novel miRNA中,23个上调表达,43个下调表达。随机挑选10个miRNA利用q RT-PCR检测不同样品中的表达量,其结果与测序结果一致。2、从差异表达的miRNA中挑选10个候选miRNA,分别沉默和过表达miRNA后,检测二化螟对抗虫水稻T1C-19、T2A-1、TT51的敏感性,结果表明沉默csu-mi R-7322-5p可显著降低二化螟幼虫对TIC-19、TT51的敏感性,过表达csu-mi R-7322-5p可显著增加二化螟幼虫对TIC-19、TT51的敏感性;沉默csu-mi R-3262可显著降低二化螟幼虫对TIC-19的敏感性,过表达csu-mi R-3262可显著增加二化螟幼虫对TT51的敏感性。其它miRNA则未显示与二化螟幼虫敏感性相关。3、基于实验室已有的二化螟基因组序列,使用mi Randa、RNAhybrid、RNA22共同预测得出csu-mi R-7322-5p可与Csp38的3’非编码区结合,最小自由能(Energy)为-25.18 kcal/mol。双荧光素酶报告实验和csu-mi R-7322-5p饲喂实验结果均表明Csp38与csu-miR-7322-5p存在靶标关系,且csu-mi R-7322-5p对Csp38具有转录后调控作用。本研究通过高通量测序、miRNA功能鉴定、miRNA靶基因鉴定等最终筛选得到与二化螟防御Cry杀虫蛋白相关的miRNA。该miRNA可用于生产实践中,从而提高Bt生物农药的毒力,促进Bt生物农药可持续应用,同时为二化螟生物防治策略提供必要的基因资源。

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中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育——基于对郑州市S中学的调查

中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育——基于对郑州市S中...

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作者：马義坤郑州大学

学位级别：硕士

近年来,国家高度重视中华民族共同体意识教育。如何增强青少年“五个认同”,铸牢青少年中华民族共同体意识,成为政府在基础教育阶段必须重视和解决的问题。历史教育具有“以史育人、以文化人”的学科功能和特性,能够有效促进中华民族共... 详细信息

近年来,国家高度重视中华民族共同体意识教育。如何增强青少年“五个认同”,铸牢青少年中华民族共同体意识,成为政府在基础教育阶段必须重视和解决的问题。历史教育具有“以史育人、以文化人”的学科功能和特性,能够有效促进中华民族共同体意识培育。调查研究中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育状况,对推动中华民族共同体意识教育切实融入教育教学具有重要意义。郑州市S中学是河南省开展民族团结教育的代表性高中,多年来接收少数民族学生到校学习。本研究选取S中学作为调查对象,对高一年级学生发放调查问卷,对高一年级历史教师进行个别访谈,掌握中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育现状。调查结果显示,教师已经注意到在教学过程中培育学生对国家与民族的认同感,但中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育还存在一些不足。具体体现在教师和学生对中华民族共同体意识的相关概念内涵认知模糊,教师在教学过程中对体现中华民族共同体的教材内容运用不够充分,教师在教授教材相关内容时采用的教学方式较为单调,教师对有助于培育中华民族共同体意识的课外资源应用较少。结合对统编版高中历史新教材内容的分析,针对教学过程中存在的不足,提出在高中历史教学中培育中华民族共同体意识的提升策略。第一,立足历史学科核心素养,制定明确的教学目标。第二,依据时序线索与课文主题,整合重构教材内容,突出教学重点。第三,灵活运用多种教学方法,通过创设情境激发学生学习兴趣,通过问题探究引导学生深入思考,通过历史论文写作深化学生自我认识。第四,合理应用博物馆、时事政治、历史题材影视剧等课外资源。第五,立足中原独特文化、联系学生家乡历史,因地制宜开发校本课程。为阐明提升策略在教学中的实际运用办法,选取统编版高中历史教材中体现中华民族共同体的典型内容进行教学设计。深化中华民族共同体意识在高中历史教学中的培育,需要将中华民族共同体意识教育切实融入历史教育教学全过程,通过学生的自我内化与感悟增强中华民族共同体意识。

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精喹禾灵等三种化学农药对龟纹瓢虫的安全性评价

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作者：常国凤华中农业大学

学位级别：硕士

龟纹瓢虫是农田生态系统中重要的捕食性天敌。长期以来农田病虫草害的防控总体上以化学防治为主,频繁的使用农药虽然控制了病虫草的危害,但也可对农田天敌昆虫种群构成威胁。目前,绝大多数有关农药对天敌昆虫安全性评估的研究常以杀虫... 详细信息

龟纹瓢虫是农田生态系统中重要的捕食性天敌。长期以来农田病虫草害的防控总体上以化学防治为主,频繁的使用农药虽然控制了病虫草的危害,但也可对农田天敌昆虫种群构成威胁。目前,绝大多数有关农药对天敌昆虫安全性评估的研究常以杀虫剂为研究对象,但是田间实际使用的农药种类不仅有杀虫剂,如除草剂、杀菌剂、植物生长调节剂等农药,它们对天敌昆虫的潜在威胁尚不清楚。本文利用实验动物学、实时荧光定量PCR技术、16S r RNA和转录组测序技术,研究了棉田常用的除草剂精喹禾灵、杀菌剂甲基硫菌灵和植物生长调节剂缩节胺对龟纹瓢虫生长发育、共生菌多样性和转录组的变化,明确了三种农药对龟纹瓢虫安全性的影响。本研究为棉田化学农药的合理应用提供了一定的理论支撑,也对保护农田天敌资源具有现实意义。本研究获得以下主要研究结果:1.揭示了三种农药胁迫对龟纹瓢虫生物学参数的影响。与对照组相比,精喹禾灵处理组龟纹瓢虫F2代雌虫(P=0.027)、F3代雌虫(P=0.023)和雄虫(P=0.031)存活率均明显增加,并达到显著水平;F3代龟纹瓢虫雄虫体重显著增加20.0%;F1、F2、F3代龟纹瓢虫寿命、产卵前期和总产卵量均无显著影响,且F2、F3代龟纹瓢虫幼虫发育历期和羽化率也无显著影响。甲基硫菌灵和缩节胺处理组对F1、F2、F3代龟纹瓢虫体重、存活率、寿命、产卵前期和总产卵量均无显著影响,对F2、F3,F4代龟纹瓢虫幼虫发育历期和F2、F3代羽化率也无显著影响。2.明确了三种农药对F3代龟纹瓢虫成虫共生菌组成和多样性的影响。F3代龟纹瓢虫16S r RNA测序结果发现,成虫共生菌优势菌属为沙雷氏菌属Serratia;和对照组相比,精喹禾灵、甲基硫菌灵和缩节胺处理组,对龟纹瓢虫共生细菌OTU数量,丰富度、多样性和优势菌属组成均无显著性影响;但是在精喹禾灵处理组,沃尔巴克氏体Wolbachia、罗尔斯通菌Ralstonia、假单胞菌Pseudomonas、戴氏菌Dyella和诺氏菌Reyranella的含量显著升高,分别升高了132、4.2、4.5、6.2、7.9倍。3.明确了三种农药对F3代龟纹瓢虫成虫全基因组转录水平的影响。甲基硫菌灵和缩节胺处理组的差异表达基因分别占总基因数的0.55%和0.10%,并且其差异基因未在KEGG通路中显著富集;精喹禾灵处理组,差异表达基因占总基因数为1.0%,关于药物代谢通路的相关基因如葡萄糖醛酸转移酶和谷胱甘肽S-转移酶表达量下调,而营养通路的关键基因表达量上调,多为FOXO、PI3K-Akt和mTOR通路中的相关差异基因。

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烟粉虱MED隐种共生菌对氟啶虫胺腈敏感性影响

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作者：罗宵华中农业大学

学位级别：硕士

化学防治是现在农业生产过程中应用最广、效果最好的一种防治害虫的方式,但也引发了一系列如昆虫抗药性升高等问题,因此在农业生产中,亟需寻找一些应对昆虫抗药性的方法。已经有许多研究证明,共生菌可能与昆虫抗药性相关。本研究希望从... 详细信息

化学防治是现在农业生产过程中应用最广、效果最好的一种防治害虫的方式,但也引发了一系列如昆虫抗药性升高等问题,因此在农业生产中,亟需寻找一些应对昆虫抗药性的方法。已经有许多研究证明,共生菌可能与昆虫抗药性相关。本研究希望从共生菌角度出发,找到影响烟粉虱抗药性的关键因素,并能够利用共生菌在防控烟粉虱方面发挥作用,因此,本研究以烟粉虱对氟啶虫胺腈抗性种群(BR)和敏感种群(BS)为对象,对其共生菌的物种组成、多样性、丰富度以及物种之间的相互关系进行了分析,筛选出了抑制其体内共生菌的抗生素种类及其使用剂量,测定了抑菌前后抗感品系对4种化学农药的敏感性及其体内4种解毒代谢酶的活性,从转录组水平分析了不同品系间的差异表达基因表达量的变化,研究结果有助于揭示共生菌与昆虫抗药性关系,为共生菌与宿主昆虫互作提供参考依据,同时为利用共生菌防治害虫提供新的思路,主要研究结果如下:1.利用扩增子测序技术比较分析了烟粉虱氟啶虫胺腈抗感品系间微生物的多样性,发现两品系感染共生菌为原生菌Portiera,次生菌Rickettsia、Hamiltonella、Hemipteriphilus、Fritschea、Geomicrobium、Nesterenkonia和Bacillus;其中抗性种群中的Portiera、Ricketttsia、Hamiltonella和Hemipteriphilus含量显著高于敏感种群,且以Rickettsia的含量最高;抗性种群中微生物的物种丰富度(Ace指数)和物种多样性(shannon指数)均高于敏感种群,微生物种类主要富集在变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteriota)三个门中,变形菌门的丰度最高;不同物种之间的相关性强、关系复杂,而敏感种群的共生菌之间相互关系弱,相关性简单。2.通过饲喂利福平、氨苄青霉素、盐酸四环素和硫酸卡那霉素来去除烟粉虱体内的共生菌,结合荧光定量PCR检测烟粉虱的共生菌菌载量。结果表明利福平对烟粉虱共生菌的去除效果最好。随着抗生素处理浓度的增高,烟粉虱共生菌的去除效率增强,明确了利福平的最佳处理浓度和处理时间分别是100 mg/L和48 h。3.利用筛选获得的抗生素对两品系进行处理,分析了其体内微生物的多样性差异。结果表明,抗生素处理后,抗感品系体内微生物丰富度与多样性均出现了显著下降,抗性品系下降更显著;抗生素处理后,在敏感品系中,Bacillus和Geomicrobium含量下降不显著,其余6种菌含量显著性下降,而抗性种群中8种菌的含量均出现了显著性的下降,特别是Portiera、Rickettsia和Hamiltonella,分别下降了80%、85%和81%。PCo A分析结果表明,抗生素处理前后,两品系的微生物物种组成均表现明显差异性。4.采用琼脂保湿法分别测定了利福平处理的抗感品系对氟啶虫胺腈、吡虫啉、噻虫嗪和溴氰虫酰胺4种药剂的亚致死浓度LC敏感性。结果表明,抗生素处理过的抗性品系烟粉虱对4种药剂敏感性都显著增加,处理后的敏感品系仅对氟啶虫胺腈和溴氰虫酰胺的敏感性显著上升,对噻虫嗪和吡虫啉的无明显变化。进一步对抗生素处理前后抗感品系的谷胱甘肽S-转移酶(GST)、羧酸酯酶(Car E)、乙酰胆碱酯酶(Ach E)和细胞色素氧化酶(P450)四种解毒代谢酶活性测定,结果表明,与敏感品系相比,抗性品系的Ach E和Car E活性无明显变化,GST和P450活性显著性上升;抗生素处理后两品系的Ach E、Car E和GST活性无明显变化,P450活性显著下降,推测介导烟粉虱对氟啶虫胺腈抗药性因素可能与P450活性变化有关。5.使用棉花和营养液饲喂抗生素处理后的抗性种群烟粉虱,发现饲喂棉花和营养液的烟粉虱共生菌含量在48 h内均没有恢复,这可能与利福平在烟粉虱体内的持续性有关,饲喂棉花的烟粉虱在72 h和96 h的时候,共生菌依旧没有恢复,但营养液饲喂的烟粉虱在72 h和96 h的时候,共生菌已经有了比较明显的恢复情况。饲喂营养液发现共生菌恢复后的烟粉虱对氟啶虫胺腈和溴氰虫酰胺的敏感性降低,饲喂棉花的烟粉虱共生菌未恢复,同时烟粉虱对氟啶虫胺腈和溴氰虫酰胺的敏感性没有显著变化,这表明,抗性共生菌的增加赋予了烟粉虱抗药性。6.对利福平处理抗感品系前后进行转录组分析,结果表明,抗感品系的差异表达基因主要富集在调控解毒代谢、能量代谢和免疫系统通路中。与敏感品系相比,抗性品系中与解毒代谢相关差异表达基因(如葡萄糖醛酸转移酶UGT2B18和UGT2B7,P450细胞色素氧化酶CYP6D4、CYP6A14、CYP6K1和CYP6A20)表达量大部分上调;抗生素处理后,敏感品系与抗性品系中的这些差异表达基因均显著下调,这些结果表明,烟粉虱共生菌可能对表达的寄主解毒代谢酶基因有调节作用,进而参与了烟粉虱对氟啶虫胺腈的抗性产生。以上结果

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基于教学设计的高中科技史教学策略探究

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作者：寇山杉郑州大学

学位级别：硕士

2020年，第11次中国公民科学素质调查显示我国公民具备科学素质的比例仅有10％。此外，在科学家座谈会上，习近平总书记多次强调发扬要科技创新精神，新时代建设社会主义现代化强国，科技的力量愈发重要。　　科技史是高中历史课程的重... 详细信息

2020年，第11次中国公民科学素质调查显示我国公民具备科学素质的比例仅有10％。此外，在科学家座谈会上，习近平总书记多次强调发扬要科技创新精神，新时代建设社会主义现代化强国，科技的力量愈发重要。　　科技史是高中历史课程的重要组成部分，在培养学生的科学与人文精神方面有着积极作用。然而，在实际教学中，由于科技史教学内容具有较强的独立性，且在三本必修书中均有所涉及，知识点涵盖了古今中外，其中一些科技成果亦需要一定量的理科知识来进行解释，因此在教学上有一定难度。学生对科技成果的掌握并不牢靠，教师没有对科技史深层的教育价值进行充分挖掘，距离2020年新修订的普通高中历史课程标准提出的课程目标和学科核心素养，还有一定的差距。面对这样的现状，对科技史展开有效的教学策略研究就更为必要。　　为了更好地使用人教版高中历史教材，培养和提高学生的历史学科核心素养，促进学生的自主学习、合作学习和探究学习能力，培养创新精神;文章以“如何从教学设计入手对高中科技史进行有效教学”为研究主题，运用问卷调查法和文本分析法对当前高中科技史教学中存在的问题做进一步的分析探究，在建构主义的理论指导下结合实际课例进行教学设计，进而提出具有可操作性和具有指导性的解决策略，为中学历史教师更好地开展科技史教学工作提供一定的参考。在内容结构上，文章由以下四个章节展开。　　第一章研究科技史在高中历史教学的教育意义。研究科技史在教材中所占的比重以及它对学生人文精神、科学精神、历史学科核心素养培育方面所起到的积极作用。　　第二章研究问卷调查的结果。通过问卷对高中历史学科中有关科技史的教学现状进行调查，对收集到的有效问卷数据进行归纳整理分析，研究调查结果反映出的问题。　　第三章研究具体的教学策略。首先研究如何运用建构主义来进行历史教学设计。接着针对调查得出的问题，对症下药，提出相应的解决策略，从而提升教学效果。　　第四章选取人教版历史必修三中的一课为例，运用上一章研究得出的教学策略，进行制作一个完整的教学设计，根据课堂效果进行分析与改进。

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CO2和热浪胁迫下豚草次生代谢物变化对广聚萤叶甲的毒害作用

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作者：田震亚华中农业大学

学位级别：硕士

生物防治可以有效的节省资源,防止环境污染。广聚萤叶甲(Ophraella communa)属鞘翅目(Coleoptera)叶甲科(Chrysomelidae)是一种防治豚草的有效的生防昆虫,全球温室气体浓度持续升高,温室效应日益严重,相伴随的热浪事件频繁发生。有研究... 详细信息

生物防治可以有效的节省资源,防止环境污染。广聚萤叶甲(Ophraella communa)属鞘翅目(Coleoptera)叶甲科(Chrysomelidae)是一种防治豚草的有效的生防昆虫,全球温室气体浓度持续升高,温室效应日益严重,相伴随的热浪事件频繁发生。有研究表明,高浓度CO能促进植物产生对昆虫具有防御作用的次生代谢物,而热浪能够消除这种诱导效应。为了探究CO和热浪对广聚萤叶甲的综合影响,本文设置高浓度CO和热浪两个因素处理豚草,检测其体内代谢物成分的变化,及这种变化对取食豚草的广聚萤叶甲体内生理代谢物质和生长发育的影响。研究结果为后续进行豚草和广聚萤叶甲的代谢关系以及营养关系的研究提供了初步的理论和数据支持。主要结果如下:1高浓度CO和热浪处理对豚草代谢组的影响进行高浓度CO和热浪处理后,两组豚草叶片的代谢组共有163种代谢物出现了明显差异,其中88种物质含量显著上调,75种代谢物质显著下调。含量显著上调的前十种物质的种类包括;色胺及其衍生物、糖类、奎宁酸及其衍生物、黄酮、异黄酮、有机酸及其衍生物、氨基酸衍生物。差异代谢产物的KEGG通路富集显示,富集显著的通路为萜类和类固醇的生物合成代谢途径、异黄酮的生物合成代谢途径、芳香族化合物的降解代谢途径、酪氨酸代谢途径、类固醇激素生物合成代谢途径、类固醇降解代谢途径、血清素受体激动剂代谢途径、多环芳烃降解代谢途径等20个代谢通路。2取食高浓度CO和热浪处理后的豚草对广聚萤叶甲发育与繁殖的影响无论是否对豚草进行热浪处理,取食高浓度CO处理的豚草后,广聚萤叶甲的一龄幼虫、幼虫期、蛹期以及整个未成熟虫态的发育历期显著延长,蛹期存活率显著降低,成虫寿命显著缩短且产卵量降低。种群生命表参数显示,取食高浓度CO处理的豚草后,广聚萤叶甲种群的内禀增长率和净繁殖率显著降低,世代历期显著延长,但是种群的周限增长率没有受到太大的影响。豚草在进行高浓度的CO处理后,对取食的广聚萤叶甲生长发育以及种群繁衍产生了不利的影响,且热浪处理促进了高浓度CO引起的这种不利影响。3取食高浓度CO和热浪处理后的豚草对广聚萤叶甲体内酶活性的影响在取食高浓度CO条件下种植的豚草后,广聚萤叶甲体内过氧化物酶、超氧化物歧化酶、乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶、胰蛋白酶、脂肪酶活性均显著升高,而胃蛋白酶活性显著降低,试验结果表明热浪能够促进这种效应。雌雄虫之间的对比显示,雌虫体内的酶活性均高于雄虫,高浓度CO和热浪对这种活性关系没有明显的影响。4取食八种差异代谢物对广聚萤叶甲的影响通过使用差异代谢物的标准品对广聚萤叶甲进行饲喂生测试验,其中取食4个不同浓度梯度的4-O-咖啡酰奎宁酸和肉桂酰五羟色胺后,广聚萤叶甲的幼虫期和未成熟期的死亡率相较于对照组显著上升。对广聚萤叶甲的产卵量、雌性性比、成虫寿命和成虫体重未出现影响。其余六种物质对广聚萤叶甲未产生明显的影响。综上所述,取食高浓度CO和热浪处理的豚草,可影响广聚萤叶甲的生长发育、繁殖能力和体内生理代谢相关酶活性,引起这种变化的原因可能是高浓度CO和热浪处理提高了豚草体内对广聚萤叶甲生长发育不利的次生代谢产物的含量。上述研究结果为后续更好的利用广聚萤叶甲对豚草的防治的工作提供新的理论基础。

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明代周嘉冑《香乘》研究

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作者：郭亚杰郑州大学

学位级别：硕士

因香料独特的魅力且与人们日常生活紧密相关,人们始终没有停止过对它的研究。明代周嘉胄的《香乘》系统总结有关香料名品、香方、典故等,是香文化集大成者。周嘉胄,明末淮海人,他精通装潢技艺,喜欢香,著有《装潢志》和《香乘》,且以布... 详细信息

因香料独特的魅力且与人们日常生活紧密相关,人们始终没有停止过对它的研究。明代周嘉胄的《香乘》系统总结有关香料名品、香方、典故等,是香文化集大成者。周嘉胄,明末淮海人,他精通装潢技艺,喜欢香,著有《装潢志》和《香乘》,且以布衣之身与南都人士往来。《香乘》内容丰富,它的成书离不开周嘉胄对香药的喜爱、明朝香料贸易的繁荣、人民生活中用香的广泛以及明代实学思潮的影响。《香乘》有刊本和钞本,比较四库全书本和日本无碍庵本,内容相差不大,只是细微之处字词的不同。剖析《香乘》的史料来源和香方,通过表格统计分析,作者收录的书籍中唐宋时期最多,其次是明朝。《香乘》引用的书目名称有些较原书有变化,且列书名时无规律。其引用史料唐、宋、明时期最多,这因为唐朝香料使用极多,宋代香文化渗透到社会生活的各方面,明代郑和下西洋与宣德炉问世使香文化得以延续。选取《香乘》中的5种香方进行分析,不同种类的香方偏重使用的药物不同,这与香料本身的特质、制成过程和香方的呈现方式有一定关系。将丁谓《天香传》、范成大的《桂海虞衡志·志香》、董说的《非烟香法》、赵学敏的《本草纲目拾遗》与《香乘》进行比较,发现《香乘》收录《天香传》、《桂海虞衡志·志香》中一些知识,与它们最大区别是周嘉胄实践经历的缺乏。同为明代遗民的周嘉胄和董说,在隐逸生活中选择读书著述,《香乘》是涉猎广泛的书籍,而《非烟香法》则专讲蒸香。《香乘》与《本草纲目拾遗》的相似是对前人著作的补充订误,且后来都进行增补,但增补宗旨、写作目的不同。《香乘》融汇多家香谱精华,是探索古人生活状况、医疗保健、经济、香方制作等的重要资料。书中的香学知识丰富了中医药的药材种类,对人体生理、心理都会有影响,也一定程度上滋长了社会奢靡之风。《香乘》不仅收录众多古籍,且周嘉胄还根据自己的香学知识与其他文献的记载,订正、弥补所录书籍的错误和不足。《香乘》内容广泛,有助于我们对明及以前香料的社会文化习俗、中外交流、贸易经济、中医药本草等方面进行研究,具有较高的研究价值与现实意义。

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Cry1Ca诱导的二化螟中肠差异磷酸化蛋白组分析

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作者：孙亚杰华中农业大学

学位级别：硕士

鳞翅目害虫二化螟Chilo suppressalis(Walker)是危害我国水稻生产最严重的害虫之一。苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的杀虫蛋白(Cry)已经成功地转入到水稻中用于防治二化螟等害虫。研究昆虫对Cry蛋白的防御机制有利于... 详细信息

鳞翅目害虫二化螟Chilo suppressalis(Walker)是危害我国水稻生产最严重的害虫之一。苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的杀虫蛋白(Cry)已经成功地转入到水稻中用于防治二化螟等害虫。研究昆虫对Cry蛋白的防御机制有利于更好地应用转基因抗虫作物。昆虫对Cry蛋白的细胞防御反应主要受丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)路径调控,而MAPK只是应急信号通路之一,并不直接参与对抗成孔杀虫蛋白,其下游基因才起真正的防御作用。实验室前期研究发现,p38 MAPK参与了二化螟对Cry1Ca的防御过程,但对Cry1Ca起防御作用的p38 MAPK下游基因并不清楚。MAPK下游基因的激活可能受p38MAPK通路磷酸化进行调控的。因此,本研究首先利用差异磷酸化蛋白质组筛选受Cry1Ca诱导的差异磷酸化蛋白、再通过RNA干扰技术鉴定候选蛋白与Cry蛋白毒力之间的关系、最后利用q PCR等技术分析目的基因的表达模式及其与p38 MAPK的上下游关系。研究结果对明确昆虫对Cry蛋白的防御机制具有重要意义,同时为提高Cry蛋白对靶标昆虫的毒力、延缓靶标昆虫对转Bt抗虫作物的抗性发展提供新的思路和理论依据。主要结果如下:1.利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,i TRAQ)技术测定Cry1Ca处理和无Cry1Ca处理组的二化螟中肠磷酸化蛋白质组,一共得到了523个唯一肽段,其中发生磷酸化的蛋白有437个。Cry1Ca处理与无Cry1Ca处理的二化螟中肠中磷酸化水平差异的蛋白有45个,其中,磷酸化程度上调的有21个,下调的有24个。按照磷酸化差异倍数和文献检索,我们选择了其中7个基因进行下一步实验。根据二化螟转录组注释,这7个基因为uncharacterized protein LOC101736359(Up101)、uncharacterized protein LOC105391923 isoform X2(Up105)、domain-binding glutamic acid-rich protein homolog(Gph)、autophagy-related protein 2 homolog A-like(Arp)、protein lethal(2)essential for life-like(Elf2)、spectrin alpha chain isoform X3(Sac)、thioredoxin-related transmembrane protein 1-like(Trtp)。2.合成靶标基因的ds RNA,用饲喂法进行RNA干扰。利用q PCR技术检测喂食ds RNA 48小时后靶标基因的m RNA的表达量变化。结果显示Up101、Up105、Gph、Arp、Elf2、Sac、Trtp基因的表达量明显下调。将抑制基因表达后的二化螟幼虫转到T1C-19(表达Cry1Ca蛋白)、TT51(表达Cry1Ab/Cry1Ac蛋白)、T2A-1(表达Cry2Aa蛋白)3种转基因水稻上,结果显示,只有Elf2基因被抑制表达后,二化螟幼虫取食这三种水稻的死亡率比对照组显著升高,表明只有Elf2基因参与了二化螟对3种Cry蛋白的防御作用。3.获得Elf2全长序列后,利用NCBI blast进行搜索显示该基因含有一个典型的small heat shock protein(s Hsp)功能域。其开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)共507bp,编码168个氨基酸,预测蛋白分子质量为19.01 k Da。系统发育分析表明,Elf2的蛋白序列与斜纹夜蛾的Hsp19.3同源性最高。Elf2时空表达模式分析表明该基因在4龄幼虫的体内表达量最高,且在中肠中表达量最高。进一步利用q PCR技术验证该基因与p38的转录调控关系,结果显示,饲喂ds Csp38后,Elf2的表达量显著下降,饲喂的ds Elf2后,p38的表达量没有显著变化。表明Elf2基因位于p38MAPK通路的下游。

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Dicer和Argonaute基因对二化螟RNAi效率的影响

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作者：金慧慧华中农业大学

学位级别：硕士

鳞翅目昆虫二化螟Chilo suppressalis(Walker)是水稻上的重要害虫。目前对二化螟的防治主要采用化学防治手段,易导致二化螟的抗药性快速增加、污染环境和威胁人类健康,因此,需要开发新型二化螟防控策略。RNAi技术可以抑制昆虫关键基因,... 详细信息

鳞翅目昆虫二化螟Chilo suppressalis(Walker)是水稻上的重要害虫。目前对二化螟的防治主要采用化学防治手段,易导致二化螟的抗药性快速增加、污染环境和威胁人类健康,因此,需要开发新型二化螟防控策略。RNAi技术可以抑制昆虫关键基因,是一种对环境友好的具有应用前景的害虫防治新技术。而将RNAi技术应用到田间鳞翅目害虫防控,需要攻克几个难题。其中,鳞翅目昆虫的RNAi效率普遍偏低,且关于鳞翅目昆虫中的RNA干扰的作用机制报道相对较少,因此,RNAi效率的提高是需要考虑的核心问题之一。本研究对二化螟5个RNAi核心元件基因Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2与Ago-5的序列进行了克隆鉴定,以及氨基酸序列分析。分析其系统发育树,保守域以及预测蛋白二、三级结构。合成相应ds RNA,并通过RNAi技术和荧光定量PCR(q PCR)技术分析了沉默二化螟Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2基因对其RNAi效率的影响。主要获得了以下结果:1、本研究取得的二化螟Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2与Ago-5的开放阅读框(ORF)全长序列源于实验室二化螟转录组、基因组数据库。通过提取二化螟总RNA,反转录和PCR等一系列分子生物学技术,验证了Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2以及Ago-5的ORF全长序列。通过对Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2以及Ago-5序列分析,发现Dcr-1 ORF序列全长为6903 bp,包含2300个氨基酸残基,预测该蛋白的分子质量是261.61 k Da,等电点(p I)值为5.14;Dcr-2 ORF全长序列为4056 bp,包含1351个氨基酸残基,预测其分子质量是154.80 k Da,p I值为8.74;Ago2-1 ORF全长序列为2742 bp,编码913个氨基酸残基,预测的分子质量是101.77 k Da,p I值为9.26;Ago2-2 ORF全长序列为3375 bp,编码1124个氨基酸残基,预测其分子质量是101.77 k Da,p I值为9.26;Ago-5 ORF全长序列为2946 bp,编码981个氨基酸残基,预测蛋白的分子质量是112.88 k Da,p I值为9.09。2、通过对二化螟以及其他鳞翅目昆虫Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2以及Ago-5的氨基酸多重序列比对,发现二化螟Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2与Ago-5具有高度保守性。通过系统发育分析,Cs Dcr-1与白蜡窄吉丁(Arctia plantaginis)的Dcr-1同源性最高;Cs Dcr-2与亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的Dcr-2蛋白的同源性最高;Cs Ago2-1与脐橙螟(Amyelois transitella)的Ago-2蛋白同源性最高;Cs Ago2-2与亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)以及玉米螟(Ostrinia nubilalis)的Ago-2蛋白的同源性最高;Cs Ago-5与柑橘凤蝶(Papilio xuthus)的Ago蛋白同源性最高。上述分析表明这5个基因均具有高度保守性,与其他昆虫同源性较高。3、通过保守结构域分析显示,Cs Dcr-1在C端有4个结构域:Ribonuclease III domain、PAZ domain、Dicer dimerisation domain、Helicase conserved C-terminal domain;Cs Dcr-2在C端有5个结构域:Ribonuclease III domain、PAZ domain、Dicer dimerisation domain、Helicase conserved C-terminal domain、Type III restriction enzyme,res subunit;Cs Ago2-1在C端有6个结构域:Piwi domain、Mid domain of argonaute、Argonaute linker 2 domain、PAZ domain、Argonaute linker 1 domain、N-terminal domain of argonaute;Cs Ago2-2在C端有5个结构域:Piwi domain、Argonaute linker 2 domain、PAZ domain、Argonaute linker 1 domain、N-terminal domain of argonaute;Cs Ago-5在C端有3个结构域:Piwi domain、PAZ domain、N-terminal domain of argonaute。保守结构域分析表明二化螟Dcr-1、Dcr-2、Ago2-1、Ago2-2与Ago

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异色瓢虫和南方小花蝽体内Cry1Ac和Cry2Aa的潜在结合蛋白研究

引用

作者：李大波华中农业大学

学位级别：硕士

转基因抗虫作物在全球范围内广泛种植,有效地控制靶标害虫,减少农药的使用。但是,转基因抗虫作物对农田生态系统存在潜在的风险,其中对天敌的安全性评估是环境风险评估中不可缺少的一部分。捕食性天敌异色瓢虫和南方小花蝽是两种重要的... 详细信息

转基因抗虫作物在全球范围内广泛种植,有效地控制靶标害虫,减少农药的使用。但是,转基因抗虫作物对农田生态系统存在潜在的风险,其中对天敌的安全性评估是环境风险评估中不可缺少的一部分。捕食性天敌异色瓢虫和南方小花蝽是两种重要的非靶标昆虫。在本文中,通过western blot杂交、ESI MS/MS蛋白质谱、竞争性结合分析以及生物素标记的方法,研究异色瓢虫和南方小花蝽体内Cry1Ac和Cry2Aa的潜在结合蛋白,为转基因作物对天敌昆虫的安全性评价研究提供一定的理论基础。主要实验结果如下:1.异色瓢虫体内Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的潜在结合蛋白分析Western blot结果显示,异色瓢虫幼虫总蛋白与Cry1Ac蛋白无明显的结合条带;与Cry2Aa蛋白的结合条带为非特异性结合。异色瓢虫成虫总蛋白与Cry1Ac蛋白无明显的结合条带;与Cry2Aa蛋白的结合条带为非特异性结合。2.南方小花蝽体内Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的潜在结合蛋白分析Western blot结果显示,南方小花蝽若虫总蛋白与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白均无明显的结合条带;而南方小花蝽成虫总蛋白与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白均有一条结合条带,分子量约为70KDa;经ESI MS/MS质谱测序后,在东亚小花蝽数据库中运用Mascot2.2分析匹配出两种蛋白,分别为热激蛋白Hsc70和Hsp90;同源竞争性结合实验表明,Cry1Ac、Cry2Aa蛋白在南方小花蝽成虫体内的结合为非特异性结合。3.生物素标记技术在筛选天敌昆虫体内Cry蛋白结合蛋白中的应用利用生物素标记的方法,筛选Cry蛋白的结合蛋白,发现异色瓢虫、南方小花蝽总蛋白与bio-Cry1Ac、bio-Cry2Aa没有明显的结合蛋白,而作为对照的链霉亲和素与异色瓢虫总蛋白、南方小花蝽总蛋白有结合条带,因此,我们认为生物素标记技术不能应用于异色瓢虫和南方小花蝽体内Cry蛋白的结合蛋白筛选研究。本研究应用Western blot技术探究了异色瓢虫和南方小花蝽体内Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的潜在结合蛋白,结果发现,异色瓢虫总蛋白与Cry蛋白之间没有潜在的结合特性;而在南方小花蝽总蛋白中筛选得到一个潜在的结合蛋白,质谱鉴定的结果为热激蛋白,并鉴定为非特异性结合,表明Cry蛋白在南方小花蝽体内没有潜在的结合特性。

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