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作者：胡毅娜华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分INHB参与多囊卵巢综合征发病机制的初步研究目的通过检测多囊卵巢综合征患者血清,卵泡液和卵巢颗粒细胞中抑制素B的水平,初步探讨INHB在PCOS发病机制中所起的作用。方法采用酶联免疫吸附试验检测体外受精周期中71例PCOS患者D... 详细信息

第一部分INHB参与多囊卵巢综合征发病机制的初步研究目的通过检测多囊卵巢综合征患者血清,卵泡液和卵巢颗粒细胞中抑制素B的水平,初步探讨INHB在PCOS发病机制中所起的作用。方法采用酶联免疫吸附试验检测体外受精周期中71例PCOS患者D3天基础血清INHB以及采卵日卵泡液和血清中INHB水平,同时提取卵泡液中颗粒细胞,应用RT-PCR方法检测颗粒细胞INHB mRNA的表达。结果PCOS非肥胖组卵巢颗粒细胞INHB mRNA表达较对照非肥胖组明显增强(P0.05),卵泡液INHB水平与BMI呈显著负相关,INHB与血清FSH、E2、P、T水平无明显相关性(P>0.05);与获卵数、受精数及子宫内膜厚度等未发现相关性。结论PCOS患者体内较高水平的INHB提示INHB可能参与了PCOS发病机制的某些环节,最终导致PCOS排卵障碍的发生,INHB水平的降低可能会影响卵子的回收,而影响IVF-ET的结局。

关键词：抑制素多囊卵巢综合征颗粒细胞 BMI 抑制素B 卵泡液体外受精-胚胎移植

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胎儿期生长受限对大鼠卵巢功能的影响

胎儿期生长受限对大鼠卵巢功能的影响

作者：廖探探华中科技大学

学位级别：硕士

目的:研究大鼠胎儿期生长受限对卵巢产生的影响及其机制,从而为有胎儿生长受限(IUGR or FGR)史的女性,提供生育健康方面的早期干预以及后期治疗的理论依据。方法:通过限制母鼠的饮食,构建子鼠胎儿生长受限模型,作为实验组(IUGR组,20只)... 详细信息

目的:研究大鼠胎儿期生长受限对卵巢产生的影响及其机制,从而为有胎儿生长受限(IUGR or FGR)史的女性,提供生育健康方面的早期干预以及后期治疗的理论依据。方法:通过限制母鼠的饮食,构建子鼠胎儿生长受限模型,作为实验组(IUGR组,20只),以正常饮食组为对照组(NC组,18只),待子鼠28d时,取子鼠的卵巢及血清进行研究,在实验第一阶段,测实验组和对照组大鼠血清的睾酮值、AMH值,对卵巢进行HE染色分析各级卵泡的情况,并且应用TUNEL荧光检测凋亡卵泡。在实验第二阶段,通过免疫组化的方法来检测实验组和对照组的AMHR-II的表达差异,应用PCR方法测IGF-1的mRNA表达,用Western blot方法检测卵巢中IGF-1蛋白的表达差异。应用SPSS13.0等软件对数据进行检验分析并作图,所有数据结果的P值若<0.05即表示差异具有统计学意义。结果:第一阶段实验结果:(1)实验组始基卵泡的百分比小于对照组(IUGR组为65.2%,NC组为68.9%),而发育卵泡的百分比大于对照组(IUGR组为34.8%,NC组为31.1%),(P<0.05);(2)实验组卵巢凋亡卵泡数高于对照组(P<0.05);(3)实验组血清中的AMH值显著高于对照组(IUGR组为10.7ng/ml,NC组5.08ng/ml,P<0.05);(4)实验组睾酮值高于对照组(IUGR组为45.34ng/dl,NC组为36.39ng/dl,P<0.05)。第二阶段实验结果:(1)实验组卵巢中的AMHR-II的表达高于对照组(P<0.05)(2)实验组卵巢中的IGF-1的mRNA和蛋白的表达高于对照组(P<0.05)结论:目前结果发现,胎儿期生长受限对卵巢产生了影响,改变了卵巢的微环境,影响了卵泡的生长过程,加速了卵泡的早期募集和消耗,且在后期可能会出现生长和成熟障碍。胎儿生长受限影响了卵巢功能,会对远期的生育能力造成一定程度的影响。对这部分有IUGR史的患者,要引起足够的重视并进行早期的生育干预。

关键词：卵巢胎儿生长受限

复合荧光染色法检测人类精子顶体反应和存活率的相关研究

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复合荧光染色法检测人类精子顶体反应和存活率的相关研究

作者：周定杰华中科技大学

学位级别：硕士

目的:同时使用Hoechst 33258/FITC-Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA)复合荧光染色法检测精子顶体反应和存活率,以评价此染色法的有效性和临床应用价值。材料方法:18名既往有生育史的男性提供新鲜精液标本。使用上游法收集标本中的... 详细信息

目的:同时使用Hoechst 33258/FITC-Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA)复合荧光染色法检测精子顶体反应和存活率,以评价此染色法的有效性和临床应用价值。材料方法:18名既往有生育史的男性提供新鲜精液标本。使用上游法收集标本中的存活精子。Hoechst 33258加入标本染色10分钟,洗脱后涂片,吹干,再用FITC-PSA染色30分钟。使用荧光显微镜观测结果。同时进行CTC金霉素染色法检测顶体完整率,及伊红染色检测精子的存活率用以对照。实验中使用钙离子载体A23187诱发顶体反应,比较使用钙离子载体A23187前后的顶体反应情况。结果:观察到4种不同染色结果的精子:a)存活的顶体反应的精子,b)存活的顶体完整的精子,c)死亡的顶体反应的精子,d)死亡的顶体完整的精子。Hoechst 33258染色的结果和伊红染色检测的精子活率结果具有显著相关性(r=0.633,P<0.01)。 FITC-PSA和CTC检测精子顶体完整率结果具有显著相关性(r=0.928, P<0.001)。Hoechst 33258/FITC-PSA复合染色可以发现钙离子载体A23187具有诱发顶体反应的效果。经钙离子载体A23187处理后存活的顶体完整的精子百分比显著降低(P<0.01),死亡的顶体反应的精子和存活的顶体反应的精子百分比显著升高(P<0.01,P<0.05)。死亡的顶体完整的精子百分比基本没有变化。结论:Hoechst 33258/FITC-PSA复合染色能够简便有效的同时检测精子顶体反应和活率。此复合染色法简便快捷,能够有效评价精子功能,具有临床应用价值。

关键词：荧光染色精子功能检测顶体反应精子活率 FITC-PSA Hoechst 33258

囊性纤维化跨膜转导调节器与卵巢过度刺激综合征发病关系研究

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囊性纤维化跨膜转导调节器与卵巢过度刺激综合征发病关系研究

作者：汤瑞玲华中科技大学

学位级别：硕士

目的:通过建立卵巢过度刺激综合征(OHSS)大鼠模型,初步研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义。方法:22日龄未成年Wistar雌鼠,随机分为常规刺激组和过度刺激组,按Ujioka等的方法建立OHSS模型。测血E2水... 详细信息

目的:通过建立卵巢过度刺激综合征(OHSS)大鼠模型,初步研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义。方法:22日龄未成年Wistar雌鼠,随机分为常规刺激组和过度刺激组,按Ujioka等的方法建立OHSS模型。测血E2水平,尾静脉注人美兰溶液30min后取腹腔灌洗液和卵巢,用分光光度计分别测定腹腔灌洗液和卵巢组织中的美兰含量来判断腹膜和卵巢血管通透性;比较两组间卵巢重量,血E2水平及卵巢、腹腔液中美兰含量,并分别通过免疫组织化学方法和免疫印记方法比较两组间卵巢组织中CFTR蛋白表达量的变化。结果:注射hCG 48hrs后,过度刺激组大鼠卵巢重量、血E2水平、腹腔液和卵巢中美兰含量显著高于常规刺激组;免疫组化方法检测到CFTR呈棕黄色颗粒表达于大鼠卵巢黄体细胞胞浆,免疫组化和免疫印记方法定量分析均显示过度刺激组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于常规刺激组。结论:注射过量PMSG+hCG致大鼠血E2水平异常升高,使体内CFTR表达量显著增加,继之,推测通过氯离子通道和上皮细胞分泌活动亢进机制,导致液体过多聚积于卵巢和第三腔隙等,从而参与OHSS时卵巢增大、囊肿形成及水、电解质失调等病理生理变化。

关键词：囊性纤维化跨膜转导调节器卵巢过度刺激综合征氯离子通道 E2

超排卵周期人脂联素及脂联素受体的表达与体外受精结局的相关研究

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超排卵周期人脂联素及脂联素受体的表达与体外受精结局的相关研究

作者：余凡华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分肥胖人群脂联素及脂联素受体表达与IVF-ET结局的相关研究目的:比较肥胖和非肥胖者血清和卵泡液中脂联素水平及黄素化颗粒细胞脂联素、脂联素受体mRNA表达的差异,探讨脂联素及其受体表达与肥胖、性激素、卵子成熟和IVF结局的相... 详细信息

第一部分肥胖人群脂联素及脂联素受体表达与IVF-ET结局的相关研究目的:比较肥胖和非肥胖者血清和卵泡液中脂联素水平及黄素化颗粒细胞脂联素、脂联素受体mRNA表达的差异,探讨脂联素及其受体表达与肥胖、性激素、卵子成熟和IVF结局的相关性。方法:选择体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的31例肥胖妇女(BMI>24kg/m2)和40例正常体重者(BMI≥18.5kg/m2且BMI≤24kg/m2),在超排卵周期的取卵日留取外周血及卵泡液,并提取颗粒细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和卵泡液中脂联素蛋白水平表达,化学发光法检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)的含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量测定卵巢黄素化颗粒细胞脂联素、脂联素受体mRNA的表达水平。结果:肥胖妇女血清脂联素与颗粒细胞脂联素受体的表达均低于正常体重者(P24kg/m2)14例,第2组为正常体重PCOS组(BMI≤24kg/m2)22例,第3组为肥胖非PCOS患者(BMI>24kg/m2)17例,第4组为正常体重非PCOS患者(BMI≤24kg/m2)18例。在超排卵周期的取卵日留取外周血及卵泡液,并提取颗粒细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和卵泡液中脂联素蛋白水平表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量测定卵巢黄素化颗粒细胞脂联素、脂联素受体mRNA的表达水平。结果:两组PCOS患者血清与卵泡液中脂联素及颗粒细胞脂联素受体水平与相应对照组无差异;肥胖患者(PCOS或非PCOS)中血清脂联素与颗粒细胞脂联素受体的表达低于正常体重者(P14mm卵泡数正相关(r=0.381,P<0.05);妊娠患者血清脂联素水平明显高于未妊娠者(P<0.05)。结论:脂联素及其受体表达仅与肥胖密切相关,与PCOS无明显相关性;采卵日血清中高水平脂联素可预示良好的IVF结局。

关键词：脂联素脂联素受体多囊卵巢综合征体外受精胚胎移植肥胖

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乙肝病毒父婴垂直传播分子机制的初步研究

乙肝病毒父婴垂直传播分子机制的初步研究

作者：刘世伟华中科技大学

学位级别：硕士

目的：通过乙肝病毒感染精子的膜蛋白受体，研究乙肝病毒感染精子的分子机制以及观察乙肝病毒感染导致的精液参数改变，并为体外阻遏HBV父婴垂直传播提供理论依据。方法：收集IVF周期中乙肝病毒阴性的男性精液标本与HBV阳性患者血清及... 详细信息

目的：通过乙肝病毒感染精子的膜蛋白受体，研究乙肝病毒感染精子的分子机制以及观察乙肝病毒感染导致的精液参数改变，并为体外阻遏HBV父婴垂直传播提供理论依据。方法：收集IVF周期中乙肝病毒阴性的男性精液标本与HBV阳性患者血清及去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor monoclonal antibody,ASGPR Mab）共培养，根据不同的处理分为以下四组：A组，正常人精液;B组，HBV阴性血清与精液标本共培养;C组，HBV阳性血清与人精子共培养;D组，ASGPR MAb和HBV阳性血清与精液共培养。每小时观察记录精子活率（a+b）变化，培养24小时后，流式细胞检测C和D组标本精子膜表面HBsAg、HBcAg。结果：1h精子活率A>D组、C>B组、C>D组统计结果有显著性差异。2h精液活率A>C组、B>C组、D>C组统计结果有显著性差异。3h精液活动率四组均有统计学差异。4-6h精液活动率除B组与D组无统计学差异外其余各组均有统计学差异。7h活动率A>B组、A>C组、B>C组、D>C组统计结果有显著性差异（P均<0.05）。培养24小时后，流式细胞检测C和D组标本精子膜表面HBcAg蛋白两组无差异，HBsAg蛋白C组明显高于D组。结论：***感染可能精子导致精液活率下降，ASGPR Mab能有效防止HBV感染精子引起的精液参数的改变。***可能是HBV与精子细胞膜结合的关键蛋白之一，阻遏ASGPR可能有效降低HBV感染人精子。

关键词：精子去唾液酸糖蛋白受体乙肝病毒父婴垂直传播

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去唾液酸糖蛋白受体在人睾丸组织内的表达

去唾液酸糖蛋白受体在人睾丸组织内的表达

作者：彭芳昕华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探讨去唾液酸糖蛋白受体ASGPR在男性睾丸生殖细胞内的表达及定位,为阻断乙肝病毒父婴传播的研究提供理论依据及新思路。对象:2010年3月-2010年9月因“梗阻性无精症”于华中科技大学同济医学院同济医院细胞学室行睾丸穿刺检查... 详细信息

目的:探讨去唾液酸糖蛋白受体ASGPR在男性睾丸生殖细胞内的表达及定位,为阻断乙肝病毒父婴传播的研究提供理论依据及新思路。对象:2010年3月-2010年9月因“梗阻性无精症”于华中科技大学同济医学院同济医院细胞学室行睾丸穿刺检查患者的睾丸标本25例,每位患者穿刺前均行乙肝两对半及HBV DNA检测。其中HBs Ag阳性者6例,HBsAg阴性者19例。方法:将实验组25例睾丸标本按照HBsAg检查结果分为,HBsAg阳性组和HBsAg阴性组。并设置用PBS缓冲液代替一抗的阴性对照,及小鼠肝脏切片的阳性对照。用免疫组织化学方法检测所有切片中去唾液酸糖蛋白受体ASGPR的表达。结果:ASGPR在睾丸组织内各级生精细胞及支持细胞的细胞膜细胞质细胞核中均有表达。HbsAg阳性组ASGPR阳性细胞表达率为72.8250%±11.2992%,HbsAg阴性组ASGPR阳性细胞表达率为63.9358%±8.4071%。两者比较,差异有统计学意义。结论:去唾液酸糖蛋白受体ASGPR存在于各级生精细胞中。其可能为HBV感染生殖细胞的关键蛋白。乙肝病毒可上调睾丸组织内去唾液酸糖蛋白ASGPR的表达。

关键词：乙肝病毒去唾液酸糖蛋白受体睾丸组织免疫组化

腹腔镜下输卵管积水预处理方式对卵巢储备功能的影响

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腹腔镜下输卵管积水预处理方式对卵巢储备功能的影响

作者：李贺梅华中科技大学

学位级别：硕士

目的:业已证实,输卵管积水对IVF结局及卵巢功能存在明显的不良影响,因此,IVF前对输卵管积水的预处理势成必然。通过腹腔镜处理输卵管积水是临床最常用的方法。由于其手术方式的差异,各种手术方式本身是否会进一步影响卵巢功能,目前... 详细信息

目的:业已证实,输卵管积水对IVF结局及卵巢功能存在明显的不良影响,因此,IVF前对输卵管积水的预处理势成必然。通过腹腔镜处理输卵管积水是临床最常用的方法。由于其手术方式的差异,各种手术方式本身是否会进一步影响卵巢功能,目前尚存在争议。本研究探讨了腹腔镜下预处理输卵管积水不同的手术方式对卵巢储备功能的影响及其可能机制。方法:从2009年3月至11月在同济医院计划生育病区行腹腔镜下处理输卵管积水的患者中,选取符合纳入标准的患者共111例,综合考虑术前子宫输卵管造影（HSG）和/或超声检查下输卵管积水的程度,术中评估输卵管受损程度及残存功能、与周围组织的粘连,以及患者及其家属意愿等因素,选择不同的手术方式处理输卵管积水。根据手术方式,将患者分为3个研究组:输卵管单纯造口组（A组,48例）、输卵管近端离断远端造口组（B组,33例）、输卵管切除组（C组,30例）;选取同时期20例因疑似不明原因不孕而行腹腔镜检查术、并在腹腔镜术下证实无输卵管积水的患者设为对照组（D组）。积水组（A组、B组、C组）与对照组（D组）患者的年龄、不孕年限、BMI等一般情况无统计学差异（P＞0.05）。分析比较积水组（A组、B组、C组）及对照组（D组）在腹腔镜处理前的卵巢储备情况,以及各组在腹腔镜手术后的卵巢储备变化。观察指标包括月经周期第3天晨采静脉血,采用免疫化学发光法（ICMA）测定卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）水平;同日采用Aloka SSD-3500彩色多普勒超声仪进行阴道超声检查:记录卵巢体积（ovarian volume, OVVOL）、大小介于2-10mm内所有窦卵泡数目（antral follicle count, AFC）,及大小介于2-6mm的AFC。引入脉冲多普勒,测量卵巢动脉收缩期流速（Vs）,舒张末期流速（Vd）,计算出阻力指数（RI）。结果:①积水组与对照组两组间的基础FSH、E2、AFC、2-6mmAFC、卵巢动脉RI值有统计学差异（P＜0.05）。②在经腹腔镜手术处理的各组患者中, A组、B组、C组患者术后第三个月月经周期第三天2-6mm AFC均较术前升高（P＜0.05）,有统计学差异;同时,B组患者术后第三个月月经周期第三天卵巢动脉RI高于术前（P＜0.05）,有统计学差异;D组患者手术前后基础性激素水平、OVVOL、AFC、2-6mmAFC、卵巢动脉RI值均无统计学差异。③经腹腔镜手术处理的输卵管积水患者,术前A组、B组、C组患者各项指标组间比较无统计学差异（P＞0.05）;术后第三个月卵巢动脉RI的比较,A组与B组、A组与C组、B组与C组的组间比较均有差异（P＜0.05）,其中,B组患者的均值最低。余各指标无统计学差异。结论:输卵管积水会导致卵巢功能下降,在避免损伤输卵管系膜内血管、保持卵巢良好血供前提下,腹腔镜下处理输卵管积水的三种不同术式均可在一定程度上改善卵巢储备功能。同时,在输卵管单纯造口术、输卵管近端离断远端造口术以及输卵管切除术这三种术式中,输卵管近端离断远端造口术可能是最有利于术后近期卵巢储备功能改善的术式。

关键词：腹腔镜输卵管积水卵巢储备 RI

白细胞介素18和白细胞介素10参与多囊卵巢综合征发病的初步研究

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白细胞介素18和白细胞介素10参与多囊卵巢综合征发病的初步研究

作者：倪莉莉华中科技大学

学位级别：硕士

目的:研究多囊卵巢综合症（PCOS）患者血清白细胞介素18（IL-18）、白细胞介素10（IL-10）与PCOS发病及其胰岛素敏感性的关系,以初步探讨IL-18、IL-10在PCOS发病机制中的作用。方法:选取48例PCOS患者和32例对照,分为肥胖组（BMI≥25... 详细信息

目的:研究多囊卵巢综合症（PCOS）患者血清白细胞介素18（IL-18）、白细胞介素10（IL-10）与PCOS发病及其胰岛素敏感性的关系,以初步探讨IL-18、IL-10在PCOS发病机制中的作用。方法:选取48例PCOS患者和32例对照,分为肥胖组（BMI≥25㎏/㎡）与非肥胖组（25＜㎏/㎡）。测定血清空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和睾酮（T）;行口服75克葡萄糖耐量试验（OGTT）及胰岛素释放试验（IRT）,计算稳态模型评估法——胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清IL-18、IL-10。结果:PCOS组血清IL-18水平高于对照组,IL-10水平低于对照组,差异有显著性;PCOS肥胖组与非肥胖组相比,IL-18水平升高,IL-10水平下降,差异有显著性;肥胖对照组与非肥胖对照组相比,IL-18水平升高,差异有显著性,而IL-10水平下降,差异无显著性;两PCOS组与各自对照组相比,IL-18水平升高,IL-10水平下降,差异有显著性。PCOS组患者血清IL-18与BMI、WHR、FINS及HOMA-IR呈显著正相关,血清IL-10与WHR、FINS及HOMA-IR呈显著负相关。结论:PCOS患者血清中IL-18水平明显升高,IL-10水平明显下降,并且在肥胖的PCOS患者中升高和下降的更明显。上述因子的变化伴随的慢性炎症可能参与PCOS的发病,并且与胰岛素抵抗和肥胖有关。

关键词：多囊卵巢综合征白细胞介素18 白细胞介素10 胰岛素抵抗

反复妊娠失败女性子宫蜕膜组织异常表达的基因及其机制初步探究

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反复妊娠失败女性子宫蜕膜组织异常表达的基因及其机制初步探究

作者：李悦含华中科技大学

学位级别：硕士

反复妊娠失败（Recurrent pregnancy loss,RPL）在育龄期女性中发生率约为5%,每年影响我国超过130万女性。目前临床上有超过50%的RPL无法确定明确病因,这对于处于育龄期、渴望拥有健康后代的女性患者来说会产生极大的心理负担。正常妊... 详细信息

反复妊娠失败（Recurrent pregnancy loss,RPL）在育龄期女性中发生率约为5%,每年影响我国超过130万女性。目前临床上有超过50%的RPL无法确定明确病因,这对于处于育龄期、渴望拥有健康后代的女性患者来说会产生极大的心理负担。正常妊娠的建立和维持,要求母体子宫内局部环境维持稳态,而母体蜕膜功能障碍可能造成RPL。值得注意的是,在RPL发生时,母体的蜕膜组织在分子水平上发生了哪些变化,尚缺乏相关研究。在本研究中,我们首先利用高通量测速技术（RNA-seq）,探究了RPL女性的蜕膜组织的差异表达基因。我们发现RPL女性的蜕膜组织中,有153个基因的表达水平和正常妊娠的女性不同,其中包括69个表达增高的基因和84个表达降低的基因。我们对这些差异表达的基因进行了生物信息学分析,以识别可能与RPL相关的生物学进程。我们发现,RPL患者蜕膜组织中Ⅰ型干扰素信号传导途径和TNF信号传导通路明显被激活。通过实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）,对15例RPL患者和12例对照女性进行了扩大样本验证,证实了Ⅰ型干扰素信号通路中的下游基因MX1,IFI27和ISG15在RPL女性中表达上调,而TNF信号通路中的TNFRSF21表达上调。我们进而在正常的人原代子宫内膜基质细胞上验证TNFRSF21基因的作用以及Ⅰ型干扰素信号通路激活可能对子宫内膜基质细胞造成的影响。我们发现,Ⅰ型干扰素信号通路激活、TNFRSF21基因表达增高可增加子宫内膜基质细胞凋亡水平。由于Ⅰ型干扰素信号通路激活往往意味着存在宫腔内细菌/病毒感染,这提示对于反复妊娠失败的患者,宫腔内感染可以作为一个致病因素加以考虑。

关键词：反复妊娠失败蜕膜 RNA-seq Ⅰ型干扰素通路 TNFRSF21