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作者：陆静安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:糖尿病是一种以高血糖水平、高患病率和高死亡率为特征的疾病。糖尿病患者的高血糖可导致内皮功能障碍的出现,通常表现为血管收缩因子分泌增加,细胞活力下降,内皮通透性升高,血栓形成。生酮饮食（KD）是一种高脂肪、低碳水化合物... 详细信息

背景:糖尿病是一种以高血糖水平、高患病率和高死亡率为特征的疾病。糖尿病患者的高血糖可导致内皮功能障碍的出现,通常表现为血管收缩因子分泌增加,细胞活力下降,内皮通透性升高,血栓形成。生酮饮食（KD）是一种高脂肪、低碳水化合物、适量蛋白质的饮食模式。饮食中55%-60%的热量来自脂肪、30%-35%的热量来自蛋白质和5%-10%的热量来自碳水化合物。以往的报道表明生酮饮食与血管通透性之间可能存在联系。我们前期工作发现Pescadillo 1（PES1）在2型糖尿病小鼠肝脏中的表达显著增加,以及生酮饮食可以通过下调肝脏中的PES1来改善Ⅱ型糖尿病小鼠的脂质失调。然而,生酮饮食对T2DM相关血管通透性的调节作用以及是否通过PES1来发挥作用的尚未见报道。本研究旨在探讨PES1在KD对糖尿病小鼠血管通透性影响中的作用及其介导的分子机制。方法:每组8只雄性八周龄C57BL/6J和db/db小鼠分别饲喂标准饲料（SD）和KD,连续喂养12周,每周记录空腹血糖及体重,干预结束后,麻醉取血,处死取材,取小鼠腹主动脉进行蛋白质检测并进行小鼠伊文思蓝血管通透性实验（miles）。同时分别用β-羟基丁酸（β-HB）处理小鼠血管内皮细胞（MVEC）,提取蛋白质进行western blotting检测,并进行体外细胞通透性实验（transwell）。此外,在体内实验中还应用了PES1的全身性敲除（KO）小鼠,标准饲料喂养12周后,麻醉取血,处死取材,取小鼠腹主动脉进行蛋白质检测及相关生物学功能检测。结果:糖尿病小鼠血管PES1表达明显升高,KD喂养可抑制血管PES1表达。在Pes1基因全身敲除小鼠中,VE-cadherin、Angiopoietin-1和Occludin蛋白水平上调,而VEGF水平则相反。在β-HB处理的细胞和Pes1敲除小鼠的血管中也观察到类似的结果。体外和体内通透性试验表明,β-HB和生酮饮食干预后血管异常通透性降低。结论:KD可通过下调全身PES1表达降低2型糖尿病小鼠异常高血管通透性。

关键词：生酮饮食糖尿病 PES1 血管通透性 β-羟基丁酸

二甲双胍对2型糖尿病小鼠肝脏脂代谢紊乱的调节作用及其机制研究

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二甲双胍对2型糖尿病小鼠肝脏脂代谢紊乱的调节作用及其机制研究

作者：贾亚婧安徽医科大学

学位级别：硕士

目的脂质代谢异常引起的心血管疾病已成为2型糖尿病(T2DM)患者死亡的主要因素。因此,在临床上针对T2DM患者的药物治疗除了关注降糖效果外,还要同时考虑药物对脂代谢的调节。稳居一线治疗地位的二甲双胍,经过多年的临床应用,已被证实其对... 详细信息

目的脂质代谢异常引起的心血管疾病已成为2型糖尿病(T2DM)患者死亡的主要因素。因此,在临床上针对T2DM患者的药物治疗除了关注降糖效果外,还要同时考虑药物对脂代谢的调节。稳居一线治疗地位的二甲双胍,经过多年的临床应用,已被证实其对T2DM患者的血脂、肝脂等有一定的益处。但目前二甲双胍降脂机制仍无确切定论。因此,本文旨在探索二甲双胍调节脂质代谢的可能机制,为其在临床上的应用提供有力的依据。方法本课题在T2DM模型鼠-db/db小鼠体内和大鼠肝癌细胞中探讨了二甲双胍对肝脏脂代谢的调节作用及可能的分子机制。研究方法如下:(1)二甲双胍在体内对肝脏脂代谢的调节作用。分组:对照组,处理组(Met)。对照组包括正常对照组(NC),糖尿病对照组(DM)。处理组中二甲双胍剂量为280㎎/㎏·day,干预时间12周,对照组给予生理盐水。干预期间,对小鼠的血糖、体重变化进行测量记录。干预结束后,收集血清、肝脏样本,称量各组小鼠的肝脏重量。利用肝脏切片进行H&E、油红O染色,观察肝脏病理学改变,利用生化检测试剂盒对血脂、肝脂进行检测,WB检测肝脏中脂代谢相关蛋白和WDR12的表达。(2)二甲双胍在Mc A-Rh7777细胞中对脂代谢的影响。选用Mc A-Rh7777细胞,使用高糖培养基进行培养,利用不同浓度(0,0.5,1,1.5,2,3m M)的二甲双胍干预刺激细胞24h。利用试剂盒检测细胞、培养基中TC、TG的含量,Western blot检测脂质合成相关蛋白的表达水平。(3)WDR12在体内外的表达情况及二甲双胍对其表达的影响。利用WB技术检测二甲双胍处理后肝脏、细胞中WDR12的表达变化。(4)WDR12调控脂质合成的可能机制及其对AMPK活性的影响。在Mc A-Rh7777细胞细胞中,分别转染WDR12 si RNA和WDR12质粒,然后在沉默和过表达WDR12的状态下检测及脂质合成相关蛋白的表达水平,从细胞水平证明WDR12的降脂作用并探索其降脂机制。结果动物实验结果显示,db/db小鼠血脂、肝脂水平要明显高于正常小鼠,同时肝脏病理切片中有明显的脂肪空泡和脂质沉积,与SREBP1c、SREBP2、HMGCR、FAS等与脂代谢相关蛋白的表达水平也显著升高,在经过二甲双胍处理后,小鼠血脂、肝脂水平下降,肝脏病理状态缓解,与DM组相比,脂代谢相关蛋白的表达量显著下降。细胞实验结果也显示,二甲双胍可降低细胞、培养基中TC、TG的含量及细胞中脂质合成相关蛋白的表达量。同时,体内体外实验结果均证明二甲双胍可降低WDR12的表达。在细胞内的分子机制研究表明,沉默WDR12可使AMPK磷酸化水平升高,抑制脂质合成相关蛋白的表达;过表达WDR12会抑制AMPK的活化,促进脂质合成相关蛋白的表达。结论二甲双胍可通过下调WDR12激活AMPK通路从而抑制与脂质合成相关蛋白的表达,进而缓解T2DM脂代谢紊乱。

关键词：二甲双胍二型糖尿病脂质合成 WDR12 AMPK

生酮饮食干预对糖尿病肾病小鼠脂质代谢紊乱的影响研究

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生酮饮食干预对糖尿病肾病小鼠脂质代谢紊乱的影响研究

作者：李程程安徽医科大学

学位级别：硕士

二甲双胍降低2型糖尿病小鼠肠道乳糜微粒组装的机制研究

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二甲双胍降低2型糖尿病小鼠肠道乳糜微粒组装的机制研究

作者：刘鹃安徽医科大学

学位级别：硕士

目的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种日益普遍的代谢性疾病,随着人们的生活水平的不断提高,被确诊为T2DM的患者越来越多,这是个非常重要的公共卫生问题。T2DM通常会导致血脂水平升高,特别是甘油三酯(triglyceride,TG)... 详细信息

目的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种日益普遍的代谢性疾病,随着人们的生活水平的不断提高,被确诊为T2DM的患者越来越多,这是个非常重要的公共卫生问题。T2DM通常会导致血脂水平升高,特别是甘油三酯(triglyceride,TG)水平升高,这种血脂异常状态会因餐后分泌富含甘油三酯的乳糜微粒(chylomicron,CM)而进一步加剧。目前就T2DM的血脂异常主要研究都是集中在肝脏脂代谢,而很少研究小肠乳糜微粒的代谢。同时,二甲双胍(metformin,Met)经众多研究发现也确实对血脂异常有积极作用。因此,本课题主要是探究二甲双胍对2型糖尿病小鼠的小肠乳糜微粒的组装的影响和对其相关机制的初步探索。方法(1)本实验课题所用的小鼠为C57BL/6J和C57BLKS/J-db/db品种,选用8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(C57),16只C57BLKS/J-db/db随机分为2组,每组8只,分别为2型糖尿病对照组(db/db)和二甲双胍干预组(db/db-met)。参考Foretz M等人的文献,每只小鼠的二甲双胍用量为250 mg/(kg·d),干预时间为12个星期。在这12个星期中,每个星期都对小鼠的空腹血糖、体重、饮食饮水进行测量记录直至实验结束。待二甲双胍干预结束,对小鼠禁食10至12小时,再对小鼠进行剖杀留取相应样本,采集血清样本,检测相关血指标,收集小肠组织,利用Western blotting技术检测影响乳糜微粒组装的相关蛋白的表达。(2)采用HIEC-6人肠道上皮细胞,二甲双胍的干预浓度分别为0.5,1,1.5,2和3 m M,对人肠道上皮细胞HIEC-6干预一天。等到药物干预24小时结束时收集样本检测细胞中、培养基中的总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯TG、载脂蛋白B48(apolipoprotein B,Apo B48)和游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)的含量,利用Western blotting技术检测影响乳糜微粒组装的相关蛋白的表达。(3)体外HIEC-6人肠道上皮细胞转染WDR12 si RNA,WDR12(WD repeat12,WDR12)敲低后,Western blotting检测WDR12敲低后对乳糜微粒组装相关的蛋白的影响。(4)在体外HIEC-6人肠道上皮细胞转染过表达WDR12质粒,同时也在这个基础上用二甲双胍处理过表达细胞24小时,然后进行取材,用Western blotting检测转染WDR12过表达质粒和在WDR12过表达质粒后加二甲双胍处理这两个情况下和乳糜微粒组装相关的蛋白的表达水平。结果(1)根据动物实验结果显示,经过二甲双胍加药干预处理12周后,2型糖尿病小鼠的体重和空腹血糖,血清以及小肠中的TG,TC,NEFA,Apo B48水平均有明显的降低。Western blotting实验显示二甲双胍能够明显降低2型糖尿病小鼠小肠中脂肪酸转运蛋白CD36(Fatty acid transporter CD36,CD36)、微粒体甘油三酯转运蛋白(Microsomal Triglyceride Transfer Protein,MTTP)、尼曼匹克C1型类似蛋白1(Niemannpick C1-like 1,NPC1L1)、Apo B48的蛋白水平。(2)二甲双胍干预HIEC-6人肠道上皮细胞后,细胞和培养基中的TG,TC,NEFA,Apo B48水平明显降低,Western blotting实验显示经过二甲双胍干预,会降低细胞中CD36,MTTP,NPC1L1,Apo B48的蛋白水平。(3)体外HIEC-6人肠道上皮细胞转染WDR12 si RNA,经过Western blotting检测显示WDR12,CD36,MTTP,NPC1L1,Apo B48的蛋白水平均降低。(4)体外HIEC-6人肠道上皮细胞中转染过表达WDR12质粒,经过Western blotting检测显示WDR12,CD36,MTTP,NPC1L1,Apo B48的蛋白水平均升高,而在过表达WDR12的基础上再用二甲双胍处理,这些蛋白的升高水平会被明显削弱。结论(1)二甲双胍可以有效的降低2型糖尿病小鼠的小肠乳糜微粒的组装。(2)二甲双胍可能通过下调WDR12而降低CD36,MTTP,NPC1L1,Apo B48等蛋白的表达,最终降低2型糖尿病小鼠的乳糜微粒的组装。

关键词：二甲双胍 2型糖尿病乳糜微粒

慢性牙周炎导致肠道菌群紊乱通过SCD1/AMPK信号通路引起肝脏损伤的研究

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慢性牙周炎导致肠道菌群紊乱通过SCD1/AMPK信号通路引起肝脏损伤...

作者：刘雅静安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:慢性牙周炎(Chronic Periodontitis,CP)是常见的慢性非特异性细菌感染性疾病,主要特征包括局部牙龈炎症、牙周袋形成及牙槽骨丧失,严重时可导致牙齿松动脱落,已成为成人牙齿缺失的主要原因之一。长期持续性的炎症破坏使得微生物及... 详细信息

背景:慢性牙周炎(Chronic Periodontitis,CP)是常见的慢性非特异性细菌感染性疾病,主要特征包括局部牙龈炎症、牙周袋形成及牙槽骨丧失,严重时可导致牙齿松动脱落,已成为成人牙齿缺失的主要原因之一。长期持续性的炎症破坏使得微生物及炎性介质逐步扩散至全身系统,多种研究表明,慢性牙周炎与多种全身性疾病如肥胖,糖尿病,呼吸消化系统疾病的发生发展密切相关,特别是对于肝脏组织的影响。口腔疾病如何对远端器官产生影响,其中与口腔联系最为密切的肠道引起了我们的关注,人体肠道菌群的动态平衡参与维持机体健康,同时,一些研究表明肠道菌群的失调与全身系统性疾病的发生发展密切相关,在本研究中,我们通过牙齿丝结扎成功构建了大鼠CP模型,在肝脏中观察到相应的炎症反应和脂肪病变,并初步探讨了慢性牙周炎影响肝脏的潜在分子机制。目的:探究慢性牙周炎和肝脏损伤之间的内在联系,为慢性牙周炎对全身系统性疾病的影响提供理论依据,并阐释其潜在的分子机制。方法:6周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(n=6),随机分为正常对照组(Control每组6只)和慢性牙周炎组(CP每组六只),通过丝线结扎法构建CP模型并于相同实验环境下饲养两组大鼠8周,10%水合氯醛麻醉后处死。禁食8小时,并于剖杀前留存大鼠粪便样本,取全血分离血清,同时取大鼠牙槽骨,牙龈,肝脏,肠道等样本以备后续检测。采用肝脏转录组测序和粪便16S rRNA测序法处理分析样本,确定CP参与诱导肝脏疾病的分子机制。同时比较两组肝脏组织病理学和炎症反应相关的指标。结果:肝脏组织转录组测序结果显示,与对照组相比,CP大鼠SCD1表达显著增加。通过KEGG富集分析结果提示,AMPK信号通路可能参与了肝脂肪变性的进程。采用16S rRNA测序的方法对大鼠粪便样本的肠道菌群进行分析,结果显示CP组的肠道菌群出现紊乱,且CP模型大鼠肠道紧密连接蛋白(ZO-1、occludin和claudin-1)的表达水平明显降低。同时,CP大鼠肝脏组织病理学结果和AST、ALT指标提示肝脏损伤出现,同时肝脏脂质合成增加,血清IL-1β和LPS的增加提示全身炎症反应。结论:单纯丝线结扎诱导大鼠慢性牙周炎,CP可能参与了肝损伤和肝脂肪变性的发生发展,其机制可能与口-肠-肝轴和SCD1/AMPK信号的激活有关。

关键词：牙周炎肝脏脂肪变性肠道菌群 SCD1/AMPK信号通路

核黄素光化学法对病原体核酸的作用及其机制初步研究

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核黄素光化学法对病原体核酸的作用及其机制初步研究

作者：何缘圆安徽医科大学

学位级别：硕士

背景：　　输血是现代医学治疗中不可或缺的手段，但新发、再发经血传播病原体依然威胁着输血安全。血液病原体灭活技术是一种有希望进一步降低输血感染风险的方法，它可以作为保障血液安全的最后一道屏障。核黄素作为一种常用的光敏剂... 详细信息

背景：　　输血是现代医学治疗中不可或缺的手段，但新发、再发经血传播病原体依然威胁着输血安全。血液病原体灭活技术是一种有希望进一步降低输血感染风险的方法，它可以作为保障血液安全的最后一道屏障。核黄素作为一种常用的光敏剂，其安全性已经被充分证实，与其它的病原体灭活技术相比，核黄素光化学技术并不需要去除多余的核黄素，从而简化了加工过程，降低了血液制品的损耗。因此可通过进一步的研究和发展来实现核黄素光化学病原体灭活法更大的潜力。　　研究已经发现核黄素是一个3环的平面结构，它与核酸结合并插在DNA和RNA碱基之间。紫外或可见光激活交联核黄素时，鸟苷碱基被氧化。在此过程中对核酸的损伤机制有3个方面:(1)鸟苷氧化的直接电子转移反应，(2)产生氧自由基，(3)产生过氧化氢自由基和羟基自由基。核黄素的3个吸收峰分别在紫外光区域的221nm、265nm和375nm，有1个446nm的可见光区域吸收峰，因此，可见光和紫外光均能使其活化。　　其中核黄素作用的第二种损伤机制产生氧自由基是本课题研究重点。已经知道核黄素经过紫外光照可以产生大量的单线态氧，在光动力学中发现单线态氧的光动力作用能达到杀死细胞的作用，于是在光化学反应中也可以尝试将核黄素及其产生的单线态氧联系到一起，对其展开更加深入的研究。本实验平台已在前期的工作中建立了核黄素光化学法实验条件的摸索，本课题将在此基础上优化建立血浆核黄素光化学病原体灭活系统的条件，对核黄素光化学法作用于病毒核酸的作用机制展开初步探索。　　目的：　　初步探索核黄素光化学法灭活血浆病原体的作用及其机制。　　方法：　　1.通过改变核黄素光化学法的实验条件，优化建立灭活的最佳条件，主要针对温度、核黄素浓度以及紫外光照时间对效果的影响;2.利用Qsep100核酸蛋白分析仪检测RNA的完整性，通过大片段逐步步移PCR检测核黄素光化学法对病毒全基因的损伤，对病毒可能损伤部位初步定位，并对核酸碱基序列进行分析;3.改变条件检测单线态氧含量是否改变，再使用单线态氧清除剂清除实验所产生单线态氧的后进行实验灭活效果的对比，探索单线态氧是否可能参与病原体灭活。　　结果：　　1.可建立优化条件：核黄素浓度为50μmol/L、光照时间20min、温度20℃的UVB光源核黄素病原体灭活系统;2.通过Qsep100核酸蛋白分析仪发现灭活后病毒核酸断裂程度远高于未灭活病毒核酸，灭活后病毒核酸碎片化程度提高，破坏位点无序列特异性但具有碱基占比有关。PCR结果显示片段条带呈现逐渐减弱趋势，在第四片段全基因组序列第2726-3697bp处的条带明显减弱，其次是第七片段全基因组序列第5449-6236bp处，表明核黄素介导核酸断裂是一个连续的过程，与各基因片段敏感性有关;3.在对单线态氧含量的检测中显示光照时间越长、温度越高，单线态氧产生量越多，灭活效果越好，与核黄素光化学法病原体灭活条件呈正相关，且使用活性氧清除过后灭活效果大大下降，研究表明单线态氧参与灭活过程影响灭活效果。　　结论：　　1.本课题实验建立优化了核黄素光化学法灭活病原体的优化条件为：核黄素浓度50μmol/L、光照时间20min、温度25℃。　　2.核黄素光化学法灭活病毒的作用机制无核酸序列特异性但存在碱基特异性的倾向，与嘌呤含量占比有关特异性地介导核酸序列使其断裂，阻止后续的复制。　　3.核黄素光化学法产生的单线态氧是影响灭活效果的关键因素之一，且实验验证单线态氧的产生含量与灭活效果呈正相关。

关键词：血液病原体核黄素光化学法单线态氧灭活效果

二甲双胍通过下调Pescadillo1改善高脂饮食所诱导的肝脏脂质堆积的机制研究

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二甲双胍通过下调Pescadillo1改善高脂饮食所诱导的肝脏脂质堆积...

作者：林雁安徽医科大学

学位级别：硕士

2型糖尿病小鼠肝脏中FLOT1表达下调通过Syndecan-1抑制乳糜微粒残余脂蛋白的吸收降解代谢

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2型糖尿病小鼠肝脏中FLOT1表达下调通过Syndecan-1抑制乳糜微粒残...

作者：吴学飞安徽医科大学

学位级别：硕士

目的2型糖尿病(T2DM)和动脉粥样硬化代谢综合征表现出的血脂蛋白异常部分是肝脏处理C-TRLs(富含胆固醇和甘油三酯的脂蛋白)受损造成的。之前的研究证明Syndecan-1作为C-TRLs清除的受体,其介导C-TRLs的细胞内吞作用不是通过形成有被小窝... 详细信息

目的2型糖尿病(T2DM)和动脉粥样硬化代谢综合征表现出的血脂蛋白异常部分是肝脏处理C-TRLs(富含胆固醇和甘油三酯的脂蛋白)受损造成的。之前的研究证明Syndecan-1作为C-TRLs清除的受体,其介导C-TRLs的细胞内吞作用不是通过形成有被小窝而是通过脂筏直接介导的。Caveolins家族和flotillins家族的蛋白都可以形成脂筏,但促进不同的内吞途径。本次研究的目的是确定他们是否参与Syndecan-1介导的C-TRLs的细胞内吞作用及其在2型糖尿病状态下小鼠肝脏中的表达情况。方法和结果在培养的肝细胞和非糖尿病小鼠肝脏中,我们发现Syndecan-1与flotillin-1(FLOT1)进行结合,而不与caveolin-1(CAV1)结合。C-TRLs与肝细胞表面的Syndecan-1结合增强了Syndecan-1与FLOT1关联。这两个分子结合在一起后一同转运到溶酶体,并可能在溶酶体中进行降解。Syndecan-1和FLOT1的相互作用需要Syndecan-1特异性识别FLOT1的N-端疏水结构域。在培养的肝细胞中敲低FLOT1基本上可以抑制Syndecan-1的内吞作用。与非糖尿病KK小鼠相比,来自肥胖T2DM模型KKA小鼠的肝脏中FLOT1蛋白和其mRNA表达减少60%到70%。用腺病毒恢复T2DM模型KKA小鼠肝脏中野生型FLOT1表达,可以明显降低小鼠血浆中的甘油三酯水平,与非糖尿病KK小鼠相比没有差异,而缺少其N-端疏水结构域的突变体FLOT1没有这种效果。此外,玉米油灌胃后,恢复表达野生型FLOT1的T2DM模型KKA小鼠改善了其餐后甘油三酯耐量。结论FLOT1是协助Syndecan-1处理有害C-TRLs的新蛋白因子,2型糖尿病肝脏中FLOT1的低表达可能会导致异常脂蛋白血症。

关键词：血脂紊乱胞吞作用脂筏蛋白高甘油三酯血症多配体蛋白

母鼠妊娠期甲状腺功能减退诱导雌性子代生命早期糖脂代谢紊乱的研究

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母鼠妊娠期甲状腺功能减退诱导雌性子代生命早期糖脂代谢紊乱的研...

作者：梁玉婉安徽医科大学

学位级别：硕士

目的妊娠期甲状激素水平的改变会对胎儿的宫内发育产生影响,同时对脂质和葡萄糖的代谢都具有一定的调节作用。目前的研究多集中在妊娠期甲状腺功能减退对妊娠结局以及子代神经发育的影响上,而对子代代谢影响的研究较少。因此本研究旨在... 详细信息

目的妊娠期甲状激素水平的改变会对胎儿的宫内发育产生影响,同时对脂质和葡萄糖的代谢都具有一定的调节作用。目前的研究多集中在妊娠期甲状腺功能减退对妊娠结局以及子代神经发育的影响上,而对子代代谢影响的研究较少。因此本研究旨在通过构建母鼠妊娠期甲减模型,评估对雌性子代生命早期甲状腺功能及糖脂代谢的影响,为临床治疗和药物研发提供新思路。方法将雌性小鼠（C56BL/6J）随机分为正常对照组（NC0）、甲状腺功能减退合并妊娠组（PH0）、妊娠伴发甲状腺功能减退组（GH0）。首先对PH0组进行干预,给予含0.15%丙基硫氧嘧啶的动物饲料（IDP饮食）和正常饮水28天,同时给予NC0组和GH0组正常的饮食和饮用水。28天后,对各组进行取血（n=6/组）,测血清游离甲状腺素（FT4）、游离三碘甲腺原氨酸（FT3）以及促甲状腺激素（TSH）的水平,以评估PH0组甲减造模是否成功。而后将各组雌鼠与雄鼠按照2:1的比例进行合笼,从确认检查到雌鼠白色阴栓到分娩结束期间,给予GH0和PH0组雌鼠IDP饮食和正常饮水,NC0组提供正常的饮食饮水。分娩后,对各组母鼠FT3、FT4、TSH的水平进行检测,以确认在分娩时GH0和PH0组母鼠是否处于甲减状态。各组雌性子代分组为:正常对照组雌性子代（NC1）、甲状腺功能减退合并妊娠组雌性子代（PH1）、妊娠伴发甲状腺功能减退组雌性子代（GH1）。断奶后（3周龄）,进行血糖和体重的测量和糖耐量测试。禁食8h后取材,血清用于检测FT3、FT4、TSH、Insulin和血脂的水平;甲状腺、肝脏、胰腺组织进行包埋切片,观察病理改变;通过Western Blotting检测与脂肪酸、胆固醇代谢相关的蛋白表达水平。结果与NC1组相比,GH1和PH1组TSH水平升高,T4和T3的水平下降;两组妊娠期甲减鼠的雌性子代体重均低于NC1组、血糖水平高于NC1组且空腹糖耐量受损,通过苏木精-伊红染色（HE）对胰腺染色发现,胰岛结构受损形态缩小;GH1和PH1组的血清TC、TG和肝脏TG水平升高,通过HE染色发现这两组子代肝脏存在脂质沉积的现象。并且肝脏中与脂质代谢相关蛋白:SREBP1c、FAS、CD36的表达水平的升高,程度在PH1组中更为明显;CPT1A、LDL-R的表达发生了下调。此外,与NC 1相比,GH1和PH1组肝脏TC和胆固醇合成关键酶HMGCR水平均升高。结论母鼠妊娠期甲状腺功能减退能够导致雌性子代小鼠生命早期的糖脂代谢的紊乱,出现肝脏脂质沉积、血脂升高、糖耐量受损、胰岛素抵抗,同时甲状腺、胰腺、肝脏组织受到不同程度的病理损伤,并且妊娠期甲减子代雌鼠存在发育迟缓的现象;甲状腺功能减退合并妊娠组的雌性子代比妊娠伴发甲状腺功能减退组的雌性子代更容易引起脂质代谢的紊乱。

关键词：甲状腺功能减退脂质代谢葡萄糖代谢

胰岛素、格列本脲和二甲双胍对妊娠期糖尿病小鼠分别干预改善子代糖脂代谢

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胰岛素、格列本脲和二甲双胍对妊娠期糖尿病小鼠分别干预改善子代...

作者：汪洋安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitu,GDM)是指妊娠首次发生或发现的引起不同程度糖代谢异常的疾病,指孕妇怀孕前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退、妊娠期才出现或确诊的糖尿病。本课题拟应用GDM小鼠模型,研究孕期进行胰岛素... 详细信息

目的:妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitu,GDM)是指妊娠首次发生或发现的引起不同程度糖代谢异常的疾病,指孕妇怀孕前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退、妊娠期才出现或确诊的糖尿病。本课题拟应用GDM小鼠模型,研究孕期进行胰岛素,二甲双胍和格列本脲干预对子代的葡萄糖和脂质代谢的影响。方法:实验前动物自由进食标准饲料,维持12 h光照和12 h黑暗的昼夜节律。实验室温度:23±2℃,湿度:50±5%,自由饮水。在上述环境适应1 w后,受试动物按2:1雌雄合笼,次日早晨7:00检查阴栓,查到阴栓定为交配成功,并定为GD0。在GD6,GD7,GD8连续3天腹腔内注射低剂量链脲佐菌素(STZ)40mg/kg诱导C57BL/6J小鼠成为GDM母鼠。尾静脉采血测血糖,72 h内空腹血糖≥11.1 mmol/L即为成功模型,正常对照组孕鼠腹腔注射等量生理盐水。怀孕母鼠随机分成4组(10只/组):妊娠糖尿病组(G组),妊娠糖尿病胰岛素干预组(GI组),妊娠糖尿病格列苯脲干预组(GG组),妊娠糖尿病二甲双胍干预组(GM组)。三个药物干预组从确诊为GDM母鼠那天起,每天接受单一种类药物治疗直至分娩。子代分别在第4周和第8周进行胰岛素耐量实验(ITT),葡萄糖耐量实验(GTT)。使用ELISA试剂盒分析子代小鼠血浆胰岛素含量。通过酶试剂盒分别测定子代小鼠血清和肝脏中的总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)的水平。进行蛋白质印迹实验检测子代小鼠肝脏中的胰岛素信号通路,葡萄糖和脂质代谢相关蛋白。结果:妊娠期间GDM母鼠通过胰岛素、格列本脲和二甲双胍分别干预能改善雄性子代小鼠血脂异常,肝脏脂质异常和胰岛素敏感性异常的情况,直至它们8周龄。具体而言,胰岛素,格列本脲和二甲双胍对GDM母鼠妊娠期的干预可改善4至8周龄雄性子代血浆TC,TG,LDL-C水平升高(P<0.05),肝脏脂质含量增加,可降低糖异生关键酶:葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase),磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK),三羟基三甲基辅酶A合成酶1(HMGCS1)水平(P<0.05),并显著改善蛋白激酶B(AKT)肝磷酸化水平降低,肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1A)水平降低的情况(P<0.05)。对雌性子代小鼠,这些特征数值恢复仅在4周龄时发现,在成年期已恢复如常。结论:GDM小鼠妊娠期间用胰岛素、格列本脲和二甲双胍干预对雄性子代小鼠增强胰岛素敏感性,降低血脂水平以及改善葡萄糖代谢至关重要,即使它们已经到了成年期。研究结果为GDM临床实践提供新的视角。

关键词：妊娠期糖尿病糖代谢脂代谢胰岛素二甲双胍格列本脲