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作者：孙翔南方医科大学

学位级别：硕士

颌面部骨缺损主要由外伤、肿瘤、先天畸形等引起,它不仅会造成颜面畸形,还可引起语言、咀嚼、呼吸等功能障碍,对患者的生理和心理等各方面都会造成不良的影响。因此如何在修复骨缺损的同时兼顾功能与美观,是人们不断研究改进的目标。传... 详细信息

颌面部骨缺损主要由外伤、肿瘤、先天畸形等引起,它不仅会造成颜面畸形,还可引起语言、咀嚼、呼吸等功能障碍,对患者的生理和心理等各方面都会造成不良的影响。因此如何在修复骨缺损的同时兼顾功能与美观,是人们不断研究改进的目标。传统的骨缺损修复方法有人工骨移植、自体骨移植、同种异体骨移植等,然而这些方法都有各自的弊端。为克服这些弊端而构建的组织工程骨为骨缺损的修复提供了一个新的方法。骨组织工程主要由种子细胞、细胞外基质材料以及生长和分化因子这三个基本的生物学因素构成,其中最基本、最核心的就是种子细胞的选择,它是组织工程活性成分的主要来源。骨组织工程中理想的种子细胞必须具备可以定向分化为成骨细胞的能力,而且应来源广泛,取材方便,对机体损伤小并且移植后免疫排斥反应轻。目前,应用最广泛的是人骨髓间充质干细胞（human marrow-derived mesenchymal stem cells, hMSCs）,其具有较强的成骨分化潜能,源于自体,取材方便,自我更新能力强,而且进行移植时不存在免疫排斥反应。因此,进一步研究MSCs的成骨分化机制将有助于hMSCs在骨组织工程中的临床应用。目前,对间充质干细胞成骨分化的分子调控机制的研究已经有了显著的进展,其受多种因素调控,如生长因子（Wnt家族、骨形态发生蛋白家族）、转录因子（β-catenin、Runx2）和miRNA等。而最近的研究发现一种新的DNA序列以外的调控机制即长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）也影响间充质干细胞的成骨分化。lncRNA是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们并不直接参与蛋白质的编码,起初一直被认为是基因组转录的”噪音”,是转录过程中产生的副产物,并不具备生物学功能。但是近年来,随着基因芯片技术及RNA测序技术的广泛应用,越来越多的lncRNA被鉴定出来,并通过研究证实其具有复杂的生物学功能,在多个层面上参与细胞分化和个体发育等重要生命过程的调控。如研究显示lncRNA与神经元分化、肌分化、表皮分化、成脂分化等相关。虽然近年来对于lncRNA调控间充质干细胞成骨分化的研究也有少量报道,但是截至目前,对于hMSCs成骨分化过程中lncRNA的表达谱特征尚无文献报道。因此,本研究将首次采用人类lncRNA表达谱芯片检测技术对在hMSCs成骨分化前后发生差异表达的lncRNA进行筛选,并对其进行分析研究,为hMSCs成骨分化机制研究提供新的lncRNA靶点,从而为构建更理想的组织工程骨移植物提供新的理论基础。本实验将分为以下3个部分：第一章入骨髓间充质干细胞与成骨诱导分化细胞的培养及鉴定研究目的：人骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞,在体外分裂增殖能力强,可以在不同的诱导条件下分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌肉细胞、神经细胞、心肌细胞等,被认为是骨组织工程中重要的种子细胞。本实验通过体外培养人骨髓间充质干细胞,并利用间充质干细胞成骨分化培养基使其向成骨细胞方向分化后进行成骨分化鉴定,为后续lncRNA表达谱芯片检测实验做准备。研究方法：1.将购买的原代hMSCs进行扩增培养至P2代,并将P2代hMSCs在间充质干细胞成骨分化培养基中培养7、14、21天后,对其细胞形态进行观察。2.以hMSCs成骨诱导分化7天、14天、21天后的细胞作为实验组（分别记为D7、D14和D21）,以成骨诱导分化前的hMSCs作为对照组（记为DO）。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及茜素红染色进行成骨分化的鉴定。3.对D0、D7、D14及D21组细胞样本进行细胞总RNA提取,然后对样本RNA进行质量鉴定。4.利用实时荧光定量PCR （RT-PCR）检测成骨特异性转录因子（Osterix、ALP、 OPN）表达情况来进行成骨分化的鉴定。研究结果：1.原代hMSCs传代培养至P2代,细胞生长状态良好,呈形态均一的长梭形。经成骨诱导培养后细胞形态由长梭形变为多角形,随着培养时间延长,细胞增殖加快,7天时可见细胞聚集成团,诱导14天及21天时可见到棕黑色的钙结节。2.P2代hMSCs进行ALP染色及茜素红染色,结果均为阴性。将成骨诱导7、14、21天后的细胞行ALP染色,胞质中呈现红色,提示ALP染色结果为阳性;行茜素红染色,可见红色的钙盐沉积,提示茜素红染色结果为阳性。3.D0、D7、D14、D21样本RNA的A260/A280值均为1.8-2.0,说明总RNA具有较高的纯度;RNA完整性：经甲醛变性胶电泳检测,RNA样品电泳条带清晰,28S：18S rRNA条带亮度大于或接近2：1,质量符合进一步RT-PCR实验及后续表达谱芯片实验要求。***-PCR检测hMSCs成骨诱导分化前后Osterix、AL

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趋化因子受体CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鳞癌细胞株的表达及其配体MIP-1β、MIP-3α、IP-10对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡及侵袭作用的影响

趋化因子受体CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鳞癌细胞株的表达及其...

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作者：褚洪星南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景：口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是一种常见的头颈部恶性肿瘤,其中舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)发病率最高(约占OSCC的25%-40%),具有高侵袭性的生长方式和淋巴结转移的特征。尽管... 详细信息

研究背景：口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是一种常见的头颈部恶性肿瘤,其中舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)发病率最高(约占OSCC的25%-40%),具有高侵袭性的生长方式和淋巴结转移的特征。尽管癌症的治疗已经取得了重大进展,但从20世纪60年代至今,OSCC的死亡率基本保持不变,5年生存率徘徊在50%左右,复发和转移仍是影响预后的重要因素。然而肿瘤的复发和转移是个复杂的过程,这不仅依赖于肿瘤细胞内在的特征,还依赖于肿瘤所处微环境的一些因素。早在1979年,Lord就提出了肿瘤微环境的概念,即指肿瘤在其发生过程中的内环境,由肿瘤细胞本身、间质细胞、微血管、组织液及少量浸润细胞共同组成的一个复杂的集合系统。间质细胞和癌细胞之间可以相互诱导、相互作用,以利于肿瘤的增殖和侵袭。然而,在肿瘤微环境中常常存在着慢性炎症,这种炎症多数是由感染、低氧、低PH、高压等特性引起。存在大量的生长因子、细胞趋化因子和多种蛋白水解酶,所产生的免疫炎性反应有利于肿瘤的增殖、侵袭、粘附、血管生成以及对放、化疗的抵抗,促使恶性肿瘤产生和发展。不难发现,在对肿瘤微环境研究的很多方面都渗透着肿瘤与炎症的联系,肿瘤与炎症的关系已经成为肿瘤研究的新方向,肿瘤炎症微环境的研究已经成为当今肿瘤研究的热点。我们在前期实验中利用高通量、精确的蛋白质芯片技术(抗炎症因子芯片)对3种不同侵袭能力的人舌鳞癌细胞(UM-1、CAL-27、 Tca-8113)和人正常口腔黏膜上皮细胞培养上清中的炎症因子进行了初步筛选后发现,与侵袭性相对较低肿瘤细胞(Tca-8113)和正常口腔黏膜细胞相比,巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-3α (MIP-3α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)在侵袭性相对较高的肿瘤细胞株(UM-1、CAL-27)中高表达。然而,在人舌鳞癌肿瘤细胞中MIP-1β、MIP-3α、IP-10相关受体CCR5、 CCR6、CXCR3的表达国内外尚未见文献报道,MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、 IP-10/CXCR3轴在肿瘤的发生、发展过程中的具体机制还不清楚。MIP-1β、MIP-3α、IP-10都是趋化因子超家族成员,能够趋化细胞的定向运动。现在越来越多的研究发现,肿瘤细胞可以自分泌某些趋化因子,通过促进肿瘤细胞增殖,瘤内新生血管的生成,细胞外基质蛋白酶的分泌,或者抑制机体的抗肿瘤免疫,促进肿瘤生长、侵袭和转移。趋化因子和其相应的受体相互作用,在抗肿瘤的免疫、肿瘤的形成和转移等方面发挥着广泛的生理和病理作用。而在舌鳞癌中关于MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、IP-10/CXCR3的相关研究较少,其各自在肿瘤的发生、发展过程中的具体机制还不清楚。本实验通过Western Blot和免疫荧光染色技术检测CCR5、CCR6、CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的表达情况;通过CCK-8法分别检测MIP-1β、MIP-3α、IP-10对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖的影响;通过Annexin V/PI双染流式细胞仪分别检测其对CAL-27细胞凋亡的影响;通过Transwell侵袭实验及明胶酶谱实验检测其对CAL-27细胞侵袭性的影响,初步探讨MIP-1β、MIP-3α、IP-10在舌鳞癌发生发展过程中的作用。研究内容共分三章：第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的表达;第二章MIP-1β、MIP-3α、IP-10对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡影响的研究;第三章MIP-1β、MIP-3α、IP-10对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭性影响的研究。第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的表达1.目的：检测在3种人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、 CXCR3蛋白的表达及定位。为体外探讨MIP-1β、MIP-3α、IP-10对肿瘤细胞生物学行为的研究奠定基础。2.方法：取对数期生长良好的细胞用于实验,分别采用Western blot和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、CXCR3的表达进行检测。3.结果：Western blot结果显示CCR5、CCR6、CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,分别在40.524k D、42.494k D、40.660k D处均可见蛋白表达条带。免疫荧光染色结果显示CCR5、CCR6、CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的细胞膜及胞质内均有表达。第二章：M

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作者：古文丽南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景超级增强子相关的 lncRNAs(Super enhancer-associated long non-coding RNAs,SE-lncRNAs)通常转录自超级增强子(Super-enhancers,SEs)区域或其邻近区域或与SEs相互作用,这些区域含有激活增强子H3K4me1、H3K27ac和相关辅助因子(... 详细信息

研究背景超级增强子相关的 lncRNAs(Super enhancer-associated long non-coding RNAs,SE-lncRNAs)通常转录自超级增强子(Super-enhancers,SEs)区域或其邻近区域或与SEs相互作用,这些区域含有激活增强子H3K4me1、H3K27ac和相关辅助因子(如P300等)的特定染色质状态。SE-lncRNAs可通过结合SEs,与SEs一起调控相关的信号通路及靶基因的表达。随着SE-lncRNAs研究的深入,学者们发现SE-lncRNAs通过复杂的信号网络在细胞的发育分化和肿瘤的发生发展中发挥重要作用。然而,SE-lncRNAs在成骨分化中的作用及调控机制尚未明确。因此,在课题组前期通过染色质免疫共沉淀测序(Chromatin Immunoprecipitation-sequencing,ChIP-seq)鉴定的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)成骨分化后特异性 SEs 的基础上,本课题探讨成骨分化后特异性SEs相关的lncRNA LINC01485在hBMSCs成骨分化中的作用及分子机制。方法购买hBMSCs细胞扩增传代培养,进行成骨诱导分化,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、Western blot、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性测定、茜素红染色鉴定成骨分化,同时qRT-PCR检测LINC01485、miR-619-5p在成骨诱导过程中的动态表达,分析LINC01485和成骨分化因子及miR-619-5p的表达相关性。构建LINC01485过表达和LINC01485干扰慢病毒载体转染hBMSCs,用qRT-PCR、Western blot、ALP染色、ALP活性测定、茜素红染色检测LINC01485对成骨分化的影响。然后,用荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)明确LINC01485的细胞定位。通过生物信息学数据库预测与LINC01485结合的miRNA,在预测结果中选择靶基因为成骨相关基因且预测得分较高的miRNA 进行 RNA 反义纯化(RNA antisense purification,RAP)实验,挑选出与LINC01485结合的miR-619-5p,双荧光素酶实验再次验证两者的结合。用生物信息学数据库预测与miRNA结合的靶基因RUNX2,进行实验验证。合成miR-619-5p mimic 和 miR-619-5p inhibitor 转染人骨髓间充质干细胞,qRT-PCR和Western blot实验检测RUNX2的表达水平,Western blot和ALP染色检验miR-619-5p对hBMSCs成骨分化的作用,双荧光素酶实验验证miR-619-5p和RUNX2的结合。最后,采用功能回复实验,即设计合成miR-619-5p inhibitor及miRNA inhibitor NC组转染LINC01485干扰组和干扰对照组hBMSCs细胞,Western blot和ALP染色检测人骨髓间充质干细胞的成骨分化情况,以鉴定LINC0 1485/miR-619-5p/RUNX2 之间的竞争性内源性 RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络。结果与成骨诱导分化前相比,hBMSCs成骨诱导后的成骨相关因子RUNX2、COL1A1、Osterix(OSX)、OPN、OCN均表达上调,诱导后的ALP染色和茜素红染色为阳性,说明人骨髓间充质干细胞发生成骨向分化。在此过程中,LINC01485 与 RUNX2 逐渐上调,miR-619-5p 逐渐降低,miR-619-5p 与LINC01485和RUNX2的表达呈负相关。此外,LINC01485的表达趋势与RUNX2、OCN、OPN一致,提示LINC01485可能与这些基因的功能密切相关。细胞功能实验表明过表达LINC01485促进hBMSCs成骨分化,上调成骨因子RUNX2、COL1A1、OSX、OPN、OCN 的表达,提高 ALP 活性,ALP 染色加深,茜素红染色显示钙盐沉积增加。反之,干扰LINC01485产生相反的结果。为了探讨LINC01485发挥作用的机制,FISH结果表明LINC01485主要在细胞质中表达。结合生物信息学预测结果、RAP和双荧光素酶实验,LINC01485与miR-619-5p 有效结合,确定 miR-619-5p 为 LINC01485 靶标。miR-6

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量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bcl-2、bax蛋白的应用研究

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作者：盘杰南方医科大学

学位级别：硕士

癌症是影响人类生存的重大疾病之一,口腔癌是头颈部较常见的恶性肿瘤之一,它的发生发展是多因素、多阶段的过程。研究表明,细胞的凋亡在口腔癌发生发展过程中起着十分重要的作用。bcl-2、bax蛋白是该领域研究较多的凋亡相关蛋白,国内外... 详细信息

癌症是影响人类生存的重大疾病之一,口腔癌是头颈部较常见的恶性肿瘤之一,它的发生发展是多因素、多阶段的过程。研究表明,细胞的凋亡在口腔癌发生发展过程中起着十分重要的作用。bcl-2、bax蛋白是该领域研究较多的凋亡相关蛋白,国内外学者证实bcl-2、bax等凋亡相关蛋白在口腔鳞癌中都有异常表达。长期以来,有机荧光一直被用来标记生物大分子以研究各种蛋白质之间的相互作用及对细胞的功能的影响。但是由于有机荧光的一些缺点,例如激发光谱较窄,光稳定性差,荧光寿命短等,限制了其作为标记物在生物分子、细胞、体内生物成像研究中的应用。近年来半导体量子点(Quantum dot,QD)由于其独特的光学性质:激发波长的范围宽且连续分布,而发射波长的范围窄且对称分布,并且发光度强,有持久的光化学稳定性等使其在生物医学领域的分子、细胞及体内的成像,尤其在肿瘤学的生物成像技术研究中,前景非常广阔。国内外未见利用量子点对口腔鳞癌细胞bcl-2、bax蛋白进行研究报道。第一章两种粒径量子点分别对口腔鳞癌固定细胞中bcl-2、bax的免疫荧光成像研究目的研究利用量子点优良的光学性质对人口腔鳞癌细胞内bcl-2、bax蛋白进行特异性荧光标记,并与异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)标记进行光稳定性比较。方法 1.用激光共聚焦显微镜对量子点(QD605和QD545)的荧光和形态进行观察。 2.细胞培养:选用人舌癌Tca8113细胞。 3.分别利用量子点QD605和QD545通过间接免疫荧光法,对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2、bax蛋白进行标记,并在激光共聚焦显微镜下进行观察识别。 4.利用异硫氰酸荧光素(FITC),通过间接免疫荧光法,对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2蛋白进行标记,激光共聚焦显微镜下进行观察识别并对QD605和FITC光稳定性比较。 5.激光共聚焦显微镜观察时的参数设置:QD605激发光谱波长488nm,激光强度100mW,QD605所用发射光滤光片范围是590-615nm。QD545激发光谱波长456nm,激光强度100mW,QD545所用发射光滤光片范围是535-555nm。FITC激发光谱波长488nm,激光强度100mW,所用发射光滤光片范围是505-530nm。激光连续照射1h,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica ConfocalSoftware测量量子点QD605和异硫氰酸荧光素(FITC)的荧光信号强度。结果 1.量子点(QD605和QD545)的形态和荧光特点:在激光共聚焦显微镜下量子点(QD605)为接近圆形的红色荧光,最大发射波长为605nm。量子点(QD545)为近圆形的绿色荧光,最大发射波长为545nm。 2.激光共聚焦显微镜下可见QD605对存在于人舌癌Tca8113细胞胞浆和核膜中的bcl-2蛋白均标记明显,胞浆和核膜均呈红色荧光。QD545特异性标记的bax主要分布在细胞的胞浆,表现为绿色荧光。 ***对存在于人舌癌Tca8113细胞胞浆的bcl-2蛋白标记明显,表现为绿色荧光,对核膜的bcl-2蛋白标记不明显。 4.量子点QD605标记的荧光信号比FITC更具特异性,激光连续照射1h,QD605标记的荧光未见明显衰减,而FITC标记的荧光1h内已基本淬灭。第二章口腔鳞癌细胞中bcl-2、bax的量子点双标免疫荧光成像研究目的利用量子点对口腔鳞癌细胞内bcl-2、bax蛋白进行双标免疫荧光成像研究。方法 1.细胞培养:选用人舌癌Tca8113细胞。 2.利用量子点QD605和QD545通过双标免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下同时对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2、bax蛋白进行观察识别。激光共聚焦显微镜下观察方法同第一章。结果不同粒径量子点同时对舌癌细胞bcl-2、bax蛋白的特异性识别,在激光共聚焦显微镜下观察到舌癌细胞bcl-2、bax蛋白均呈高表达。QD605标记的bcl-2蛋白表现为红色荧光,QD545标记的bax蛋白表现为绿色荧光,两种蛋白在细胞内同一位置重叠的部分呈现黄色荧光。激光连续照射1h,3种颜色的荧光均未出现明显衰减。第三章量子点对口腔鳞癌Tca8113细胞的活性影响及活细胞中bcl-2、bax的量子点荧光标记观察目的探讨量子点对口腔鳞癌活细胞的影响及对口腔鳞癌活细胞bcl-2、bax蛋白进行观察研究。方法 1.量子点对口腔鳞癌活细胞的影响细胞培养。实验分组:设空白对照组,量子点(QD)实验组。量子点(QD)实验组分4个剂量组,QD终浓度为20nmol/L、30nmol/L、40nmol/L和50nmol/L。每组设6个平行孔。观察分析:将QD不同浓度同步加入到实验各剂量组孔板中,37℃、5%C

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上颌后牙骨量不足单牙倾斜种植修复的研究

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作者：王险峰南方医科大学

学位级别：硕士

对于上颌窦底可利用的牙槽骨高度不足的种植修复解决方案一般有两种：改变上颌窦底的位置以增加骨量和避开上颌窦种植。改变上颌窦底的位置以增加骨量的技术包括上颌窦外提升术(The technique of sinus floor lift)和上颌窦内提升术(Ost... 详细信息

对于上颌窦底可利用的牙槽骨高度不足的种植修复解决方案一般有两种：改变上颌窦底的位置以增加骨量和避开上颌窦种植。改变上颌窦底的位置以增加骨量的技术包括上颌窦外提升术(The technique of sinus floor lift)和上颌窦内提升术(Osteotome technique)。1996年得到公认的上颌窦提升术(Sinus lift)能有效解决上颌后牙区可用骨高度不足,但这种手术方法治疗周期长,手术创伤大,费用昂贵,且存在一些重大的风险及并发症。近几年来,国内外均有学者报道在上颌窦近、远中壁倾斜植入种植体联冠桥修复上颌后牙缺失上颌窦底骨量不足的患者,避免行上颌窦内外提升术,近期疗效令人满意。倾斜种植(Tilted implant)技术近年来被越来越多地应用,主要针对上颌窦底可用骨高度不足,且上颌窦近中和／或远中有一定骨组织的病例。综合各种理论观点,在剩余牙槽嵴中使用倾斜种植体具有如下优点：1)植入较长的种植体,可增加种植体与骨的接触面积进而增加种植体初期稳定性;2)在无牙颌病例中,增大了种植体间距,可限制修复体悬臂梁的长度,使负重较合理地分布;3)避免了复杂的外科手术,例如上颌窦提升或骨增量手术。上颌窦区骨量不足采用骨增量种植外科技术效果虽然肯定,但仍存在许多不足。不论翼板区种植术、颧骨区种植术还是倾斜植入技术,目前的报道都是使用于多牙缺失时的种植,尚未见用于单牙种植修复的报道。目前国内对汉族人群上颌后牙区上颌窦腭侧骨板结构形态的研究还是空白,本研究的目的是寻找一种手术创伤小、治疗周期短和治疗费用低廉,同时又适合单牙缺失的上颌窦区骨量不足的种植修复技术,即在上颌窦腭侧骨板位置微创植入种植体,了解汉族人群上颌后牙区上颌窦腭侧骨板结构形态是开展该技术的基础,本研究希望因此得出汉族人群中上颌窦腭侧骨板可容纳标准直径种植体(3.5-4.5mm)比例以及模拟植入种植体后的倾斜角度。第一部分基于CBCT的上颌窦腭侧壁解剖形态的研究目的： 1.通过CBCT影像学资料分析研究汉族成年人群上颌窦的解剖形态差异及其变化规律。 2.通过CT断层影像学资料分析研究汉族成年人群上颌窦腭侧壁适合植入标准种植体的比例及植入种植体后的倾斜角度(种植体与牙长轴之夹角)。方法： 1.对广东省口腔医院特诊中心拟行CBCT检查的患者,在接受头颅锥形束CT对颌面部进行扫描前,在知情同意的情况下接受问卷调查。问卷调查内容包括：患者基本资料、全身健康状况、口腔卫生习惯、口腔健康状况、个人习惯以及社会和精神状况等。 2.对获得的病例数据进行筛选,收集资料完整符合纳入条件的病例进行影像学资料分析。 3.设定基准线,进行影像学分析,观测上颌第一、第二磨牙腭侧壁骨板厚度以及虚拟在上颌第一、第二磨牙腭侧骨板位置倾斜植入种植体的角度。 4.采用SPSS16.0for Windows统计软件对所得数据进行统计学分析,对于上颌第一磨牙组(6组)和第二磨牙组(7组)间比较采用独立样本t检验(Independent-Samples Test),预先用Levene’test检验方差齐性,方差不齐数据采用Satterthwaite近似t检验,假设检验为双侧检验,检验水平为0.05,P<0.05为差异有统计学意义。对于上颌第一磨牙不缺失组(不缺6组),第一磨牙缺失组(缺6组),第二磨牙不缺失组(不缺7组),第二磨牙缺失组(缺7组),四组之间比较采用单向方差分析(One-Way ANOVA),预先用Levene’test检验方差齐性,方差齐性数据采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),组间两两比较采用LSD-t检验(Least-significant Difference, LSD检验),方差不齐采用Welch稳健方差分析,并采用DunnettT3进行组间两两多重比较,假设检验为双侧检验,检验水平为0.05,P<0.05为差异有统计学意义。结果自2011年2月到2011年12月在广东省口腔医院特诊中心共收集211份有效调查问卷及相应Dicom原始数据。在422个上颌窦中,第一磨牙缺失177个,第二磨牙缺失146个;腭侧骨壁骨厚度PBT值≥4.5mm的第一磨牙位点275个,第二磨牙位点237个;第一磨牙没有缺失位点PBT最小值为0.5mm,最大值为16.5mmm;第一磨牙缺失位点PBT最小值为0.9mm,最大值为16.8mm。在422个上颌窦中,276个第二磨牙没有缺失,146个第二磨牙缺失。第二磨牙没有缺失位点PBT最小值为0.5mm,最大值为19.1mm;第二磨牙缺失位点PBT最小值为0.6mm,最大值为13.9mmm。422个上颌窦中PBT值≥4.5mm的第一磨牙位点的腭侧骨板倾斜角度(PBA)值在第一磨牙不缺牙位点最大值为45°,最小值为18.1。;在第一磨

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口腔鳞状细胞癌铁死亡预后模型构建与相关功能研究

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作者：唐争鸣南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma;OSCC)是头颈部癌症中最普遍的类别之一,其5年生存率维持在50%左右。目前,OSCC患者常规预后评估方法是TNM分期,但由于OSCC具有高度的肿瘤异质性,单纯的TNM分期往往是不准确的。铁... 详细信息

研究背景口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma;OSCC)是头颈部癌症中最普遍的类别之一,其5年生存率维持在50%左右。目前,OSCC患者常规预后评估方法是TNM分期,但由于OSCC具有高度的肿瘤异质性,单纯的TNM分期往往是不准确的。铁死亡作为一种程序性细胞死亡形式,目前已有研究通过筛选铁死亡基因在OSCC中构建预后模型来评估患者预后,但其存在一些不足。因此,我们急需新建一个基于多平台的数据验证、结合患者临床特征的预后模型来个性化评估OSCC患者的预后并且筛选出OSCC患者特异性治疗药物与分子靶点。方法首先从TCGA及FerrDB筛选铁死亡相关差异表达基因(Ferroptosis-related differentially expressed genes;FRDEGS);然后对 FRDEGs 进行富集分析探究其潜在的生物学功能;进一步Cox与Lasso回归分析筛选并构建铁死亡风险评估模型。将铁死亡风险评估模型进行多个数据集的生存分析及验证;进一步,利用铁死亡预后模型与患者临床特征构建Nomogram模型并验证其准确性;然后,利用基因加权共表达网络分析(Weighted Gene Co-Expression Network Analysis,WGCNA)探究影响铁死亡预后模型评估的生物学机制;评估铁死亡预后模型中高、低风险组患者的药物敏感性来筛选潜在化疗药物;此外,利用单细胞测序数据集分析OSCC细胞类型与组成比例,并探究FRDEGs在OSCC微环境中分布与铁死亡评分;进一步,利用qRT-PCR与免疫组化分析FRDEGs在OSCC中的表达水平;最终利用体外功能试验探究CA9、CAV1对OSCC的调控作用。结果我们首先从TCGA与FerrDB中共同筛选出106个FRDEGs;富集分析发现FRDEGs主要富集于铁死亡、氧化还原等过程。Cox回归分析与Lasso回归分析筛选并构建铁死亡预后评估模型且多方面验证其具有较高准确性。利用铁死亡预后评估模型与患者临床病理特征构建预后列线图且具有较高准确性。随后WGCNA分析发现影响铁死亡预后模型评估主要的生物学过程为:表皮发展、中性粒细胞脱颗粒等。随即,利用铁死亡预后评估模型筛选出3种OSCC潜在化疗药物:5Z)-7-Oxozeaenol,AT-7519,KIN001-266;单细胞测序显示 FRDEGs主要富集在OSCC的上皮细胞与G1期细胞中;qRT-PCR与免疫组化证明TRIB3、CAV1、CA9、EGFR、AURKA在OSCC中高表达;GOT1、GRIA3在正常组织中高表达;最后CA9、CAV1可以调控OSCC增殖、迁移与铁死亡。结论本研究通过公共数据库构建的铁死亡预后模型与Nomogram列线图可以较精确的预测OSCC患者的预后,其中影响模型评估的主要生物学过程是:表皮发展、中性粒细胞脱颗粒等;5Z)-7-Oxozeaenol,AT-7519,KIN001-266 是 OSCC高风险组患者潜在化疗药物。FRDEGs在OSCC微环境中主要分布在上皮细胞与G1期细胞中。FRDEGs在OSCC与正常组织中的RNA及蛋白水平存在表达差异;最后CA9、CAV1可以调控OSCC的生物学行为。

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舌鳞癌患者长链非编码RNA分子鉴定及其表达谱分析研究

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作者：贾搏南方医科大学

学位级别：硕士

口腔颌面部头颈癌是我国主要的恶性肿瘤之一,发病率位居全身癌的第六位,舌鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,其中局部的浸润复发、颈部淋巴结的转移扩散是舌鳞癌预后不良的首要原因。尽管舌鳞癌的综合治疗措施在不断的发展完善,但一旦... 详细信息

口腔颌面部头颈癌是我国主要的恶性肿瘤之一,发病率位居全身癌的第六位,舌鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,其中局部的浸润复发、颈部淋巴结的转移扩散是舌鳞癌预后不良的首要原因。尽管舌鳞癌的综合治疗措施在不断的发展完善,但一旦出现转移,其治疗仍不能获得满意效果,早期舌鳞癌5年生存率可达70%,而晚期舌鳞癌5年生存率仅为30%。因此,加强对舌鳞癌发生发展病因、机制的基础研究,阐明舌鳞癌侵袭转移的分子机制,对舌鳞癌发生发展进行预测、早期诊断和预后判断是舌鳞癌研究的前沿课题,对于提高舌鳞癌治愈率、减少死亡率具有重要的科学意义。研究表明在癌细胞侵袭转移的过程中,发挥作用的除了行使执行功能的蛋白分子外,RNA也在其中发挥重要功能,最近的研究识别了一些与癌侵袭转移及预后相关的标志分子包括蛋白编码基因和miRNAs。 RNA不仅仅是DNA和蛋白质之间的信息桥梁,而且在机体的多种生命活动中发挥着重要作用。其中非编码RNA在生命过程中扮演着不同的重要角色,如功能已被广泛认可的tRNA、miRNA等。最近的研究显示在许多组织异常表达的长链非编码RNAs (long noncoding RNAs, IncRNAs)通过特定的癌基因或抑癌基因在肿瘤发生发展过程中起着非常重要的作用。长链非编码RNA (lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们并不直接参与蛋白质的编码,起初一直被认为是基因组转录的γ噪音”,是转录的副产物,并不具备生物学功能。但由于哺乳动物染色体转录的RNA数量庞大,而编码蛋白质的mRNA只有2%左右,另外剩余大量的非编码RNA除了我们所熟悉的miRNA,siRNA等外,还存在着大量的尚未被认知的lncRNAs,在肿瘤学研究中,lncRNA异常表达主要表现以下三个方面：一是一些lncRNA可能仅仅在某些肿瘤中呈特异性表达,如DD3在前列腺癌中的特异性表达;二是很多IncRNA不仅仅在一种肿瘤中呈过表达(如MALAT1在肺癌、肠癌、神经母细胞瘤中均存在过表达);三是一些肿瘤中可能不止一种lncRNA呈过表达[例如在前列腺癌中PCGEM1, DD3(PCA3), PCAF1均发现表达异常]。另外,研究发现IncRNAs与肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等多种肿瘤的发生发展密切相关,如MALAT1促进肺癌细胞的侵袭转移,HOTAIR在乳腺癌侵袭转移过程中的作用。愈来愈多的研究证实IncRNAs在肿瘤发生发展的过程中发挥着重要作用。目前lncRNA的研究仍处于起步阶段,由于lncRNA功能复杂多样,既存在促进肿瘤发生发展的促癌因子,也存在抑制肿瘤生长的抑癌因子,目前对IncRNA在肿瘤发生发展过程中所扮演的角色和功能作用等仍不明确。我们对lncRNA功能的深入研究将为其在肿瘤发生发展及侵袭转移过程中的作用带来全新的认识。随着人类基因组内越来越多的lncRNA被鉴定出来,人们发现lncRNA所介导的复杂网络调控着数量众多的编码基因,因此lncRNA在肿瘤学研究中具有重要价值,寻找IncRNA分子及其靶基因的研究已成为基因调控和肿瘤学研究领域的重要分支和热点。因此lncRNA在恶性肿瘤中的特征性表达谱使其有望成为新的肿瘤诊断及预后评估的生物学指标,而异常表达的lncRNA也可直接或间接调控靶基因,参与肿瘤发生发展及侵袭转移等过程。截至目前,IncRNA在口腔肿瘤中的研究鲜见报道,因此,对IncRNA的表达谱及其对基因调控的作用机制研究也为舌鳞癌的相关研究增添了一个新的切入点。本实验分为以下三部分：第一章舌鳞癌组织与正常舌组织差异表达IncRNAs的筛选研究目的：本研究利用微矩阵基因芯片技术,研究IncRNA在舌鳞癌组织和正常舌组织之间表达谱的差异,探讨IncRNA在基因调控中可能存在的作用,并初步探讨IncRNA和舌鳞癌之间的关系。研究方法： 1.随机选取3例舌鳞癌组织和3例正常舌组织分别设定为实验组(舌鳞癌组织组)和对照组(正常舌组织组)。随后对选取的6例组织标本进行处理,抽提总RNA,然后对提取所得的RNA进行质量检测;2.对质量检测符合纳入标准的组织样本,合成cDNA,完成基因芯片杂交,对杂交芯片采取Agilent Microarray Scanner软件进行扫描,然后用Feature Extraction software10.7软件对扫描所得数据进行分析,再用Gene Spring Software11.0软件对前述结果进行归一化处理,最后得到mRNA和IncRNA数据;3.采用折叠倍率(Fold Change)法进行差异基因筛选。首先设定差异基因筛选标准,以Fold Change>2,p<0.05作为差异基因纳入标准,获得差异mRNAs和IncRNAs表达谱,并通过散点图(Scatter Plot)和

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超级增强子在人骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的潜在功能研究

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作者：黄智杰南方医科大学

学位级别：硕士

目的超级增强子（Super-enhancers,SEs）是具有转录活性增强子的一个大簇,不仅可以驱动控制细胞身份基因的表达,还可以用来解释细胞类型特异的表达模式,在发育生物学、癌症等疾病致病机理研究中有着巨大的应用潜力。然而,其在人骨髓间... 详细信息

目的超级增强子（Super-enhancers,SEs）是具有转录活性增强子的一个大簇,不仅可以驱动控制细胞身份基因的表达,还可以用来解释细胞类型特异的表达模式,在发育生物学、癌症等疾病致病机理研究中有着巨大的应用潜力。然而,其在人骨髓间充质干细胞成骨（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）分化过程中的潜在功能及调控机制尚未见研究。本研究旨在研究参与人骨髓间充质干细胞成骨分化的超级增强子及其调控的靶基因的潜在功能。方法购买三组原代hBMSCs并进行扩增培养。用成骨培养基对hBMSCs成骨诱导分化14天后的细胞作为实验组（记为D14组）,而成骨诱导分化前的细胞则作为对照组（记为DO组）。通过茜素红染色进行成骨分化鉴定。提取D14组和DO组细胞的总RNA,利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测成骨特异性转录因子RUNX2、OPN、COL1A1的表达情况。从D14组和DO组中分别提取DNA,通过染色质免疫共沉淀测序（Chromatin Immunoprecipitation-sequencing,ChIP-seq）,针对组蛋白乙酰化赖氨酸27（H3K27ac）细胞标记对提取的DNA进行高通量测序,对测序得到的数据进行ROSE（Rank Ordering of super-enhancers）算法分析,从而鉴定出D14组和DO组的超级增强子,并通过数据库获得其靶基因的信息。此外,从D14组和DO组的细胞中分别选择2个超级增强子靶基因进行Real-Time qPCR来验证测序结果的准确性。对所筛选出的超级增强子靶基因进行生物信息学分析。结果对DO组细胞行茜素红染色,结果均为阴性。而D14组细胞行茜素红染色后可见明显的红色钙盐沉积,提示茜素红染色结果为阳性。利用Real-Time qPCR检测到RUNX2、OPN、COLIA1在DO组和D14组中的表达水平具有显著的差异,在D14组中表达显著增加。ChIP-seq结果提示DO组SEs有1680个。D14组中SEs为342个。其中D0组独有的SEs有1380个,D14组独有的SEs有42个,两组共有的SEs有300个。D0组的SEs所调控的基因有1680个,其中具有蛋白编码功能的有1094个,非编码蛋白的基因有551个。D14组的SEs所调控的基因有342个,其中具有蛋白编码功能的有223个,非编码蛋白的基因有116个。对D0组和D14组的超级增强子靶基因行KEGG分析,结果示TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路以及ECM受体信号通路的均为高富集,且与成骨分化密切相关,尤其是TGF-β信号通路。对所选的4个靶基因行RT-qPCR的结果证实了测序的结果。结论hBMSCs成骨分化过程中涉及了多个细胞因子及细胞通路的变化,SEs可能通过调控其靶基因的表达来调控hBMSCs的成骨分化。

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FRMD4A在舌鳞癌中的表达和作用机制的研究

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作者：郑相淮南方医科大学

学位级别：硕士

口腔鳞状细胞癌是最常见的口腔颌面部恶性肿瘤,其中又以舌鳞癌最为常见。舌鳞癌恶性程度高,易复发转移。肿瘤的复发和转移是肿瘤患者预后不佳的重要因素,因此对肿瘤侵袭转移机制的研究将会为肿瘤的治疗及改善患者预后提供重要的依据。 ... 详细信息

口腔鳞状细胞癌是最常见的口腔颌面部恶性肿瘤,其中又以舌鳞癌最为常见。舌鳞癌恶性程度高,易复发转移。肿瘤的复发和转移是肿瘤患者预后不佳的重要因素,因此对肿瘤侵袭转移机制的研究将会为肿瘤的治疗及改善患者预后提供重要的依据。分子生物学和基因工程技术的进步为肿瘤的生物治疗创造了良好的基础,生物治疗有望成为继手术、化疗、放疗后的第四种治疗方向。肿瘤免疫治疗和肿瘤基因治疗是肿瘤生物治疗的主要手段。基因治疗是随着DNA重组技术的成熟而发展起来的,是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗技术,它是通过一定方式将人正常基因或有治疗作用的DNA序列导入人体靶细胞去纠正基因缺陷以发挥治疗作用。虽然现在己经发现了与口腔鳞癌发生、发展有关的多种基因,但人们仍在继续找寻与口腔鳞癌相关的新基因,尝试建立与口腔鳞癌相关的特异性基因谱学,寻找基因治疗的靶点,为口腔鳞癌的治疗提供科学的理论和实验依据。口腔鳞癌的复发转移是一个多步骤且复杂的过程。肿瘤细胞从原发部位游离是转移的最初始步骤,也是发生转移的先决条件。因此,如果能制止这一过程的发生,将有可能从源头上控制肿瘤的转移。 2012年,Stephen等研究发现一种名为FRMD4A（FERM domain-containing protein4A）的蛋白在头颈癌中起着关键作用,FRMD4A蛋白能促进癌细胞生长,并且FRMD4A蛋白的高表达与头颈部鳞状细胞癌复发转移风险高度相关。因而,我们推测FRMD4A蛋白也可能在口腔鳞癌侵袭转移中发挥重要作用,FRMD4A蛋白极有可能成为口腔鳞癌新的治疗靶点。长期以来,有关FRMD4A的研究鲜见报道,因而对其结构、功能等方面的了解甚少,但近年来随着研究的深入,FRMD4A逐渐得到广泛关注,FRMD4A基因是近年来被克隆鉴定的新基因,位于人类染色体10p13。FRMD4A基因表达产物FRMD4A蛋白与小鼠EpH4上皮细胞同源,属FERM超家族成员,含1039个氨基酸,是一类具有FERM结构域的蛋白。FERM结构域的命名即来源于红细胞中的Band4.1（简称4.1R、four point one）、埃兹蛋白（ezrin）、根蛋白（radixin）与膜突蛋白（moesin）这4种蛋白的首字母。Band4.1是最先被确定的含FERM结构域蛋白,发挥连接细胞质膜与细胞骨架,协助维持细胞形态和膜稳定性的作用。而其他3个成员主要存在于上皮细胞富含肌动蛋白的皮层区域和细胞的外膜,参与细胞形态构建、细胞黏附和迁移,调节膜蛋白的定位及其相关功能,调控细胞骨架排布,并参与肿瘤侵袭与转移。FERM结构域广泛存在于动物细胞多种蛋白中,可作为上游信号,被激活后释放FERM蛋白活性位点,通过FERM结合不同配体或调节蛋白其他结构域结合下游信号分子,参与多种细胞形态调节和信息传递;或只依赖自身作用于下游因子,积极广泛地影响多种细胞生理和病理进程,含FERM结构域蛋白在参与结构组成、蛋白转移和信号转导等功能调控中发挥着重要作用,与肿瘤的发生发展及侵袭转移密切相关。2008年的全基因组关联性研究以及2012年在亚洲人群中大规模的全基因组关联研究均发现FRMD4A基因在人体对药物依赖性方面发挥着重要作用。2010年Ikenouchi证实FRMD4A基因能编码骨架蛋白,并调节乳腺上皮细胞粘着连接[8]。降低含FERM结构域蛋白活性的研究已有报道,如应用siRNA干扰FAK基因表达可降低乳腺癌AU-565细胞的迁移能力[9];应用JAK抑制剂CP690、550可减少免疫抑制治疗常见的副作用[m]。RNA干扰是一种内源基因沉默机制,由双链RNA介导,能特异性地抑制同源基因的表达,最终致使基因沉默。RNA干扰具有高效、稳定、特异性强等特点,已成为目前生物医学研究领域最活跃的热点之一。目前,关于FRMD4A在舌鳞癌中的表达情况和作用在国内外尚未见报道。本实验首次运用qRT-PCR和免疫组化检测FRMD4A与舌鳞癌的关系,并通过基因沉默逆向验证FRMD4A与舌鳞癌恶性程度的关系,以探讨FRMD4A在舌鳞癌发生发展中所起的作用,为控制舌鳞癌提供新的靶点,并为进一步研究提供实验依据。本研究包括以下三章：第一章FRMD4A在舌鳞癌组织中的表达及意义目的： 1.探讨FRMD4A基因和蛋白在舌鳞癌组织中的表达情况及意义。材料和方法： 1.收集广东省口腔医院病理科2010年6月至2013年6月石蜡标本108例,其中舌鳞癌组织78例,白斑15例,癌旁正常舌组织（距病灶＞1.5cm,病理确诊为正常上皮）15例。舌鳞癌组织中高分化20例,中分化47例,低分化11例;男40例,女38例;年龄37岁～70岁;TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期31例,Ⅲ期+Ⅳ期47例;有淋巴结

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环状RNA在舌鳞状细胞癌中差异表达的分析研究

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作者：邹艾灵南方医科大学

学位级别：硕士

舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部头颈癌中最常见的恶性肿瘤之一[1],具有浸润性强、生长快、易向颈部淋巴结转移等生物学行为。对舌鳞状细胞癌的传统治疗方法主要包括手术治疗、放疗和化疗,但患者尤其是... 详细信息

舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部头颈癌中最常见的恶性肿瘤之一[1],具有浸润性强、生长快、易向颈部淋巴结转移等生物学行为。对舌鳞状细胞癌的传统治疗方法主要包括手术治疗、放疗和化疗,但患者尤其是晚期患者的预后较差,死亡率和复发率高[2]。因此,加强对舌鳞状细胞癌发生机制的研究,寻找新型临床诊断标志物,对于做到早发现、早治疗具有重要意义;增强对舌鳞状细胞癌侵袭、转移机制的研究,寻求新的治疗靶点,对于提高舌鳞状细胞癌的治愈率、降低其复发率具有科学意义。过往研究表明,恶性肿瘤的形成往往不是基因突变本身所导致的,而是与调控基因表达水平的过程密切相关[3-5]。研究舌鳞状细胞癌中相关基因的调控机制,对阐明舌鳞状细胞癌的发生机理具有重要意义。环状RNA(circularRNA,circRNA)是新近确认的一类特殊的RNA分子,多为一个以上外显子通过反向剪接形成的没有5’和3’末端的环状RNA分子,大量存在于真核细胞,具有组织、时序和疾病特异性[6]。circRNA具有微小RNA(microRNA,miRNA)“海绵”作用,可通过与miRNA结合而抑制其活性,从而调控miRNA靶标以发挥作用[7]。另外circRNA还可通过调控基因转录、调控RNA结合蛋白、参与蛋白质翻译[8-10]来调控基因表达水平。研究表明circRNA在胃癌、神经胶质瘤、肺癌[11-13]等多种肿瘤的发生过程中起到重要作用。截至目前,circRNA的研究正处于起步阶段,其与舌鳞状细胞癌之间的关系尚未见报道。本研究首次采用高通量circRNA芯片检测技术,筛选舌鳞状细胞癌中差异表达的circRNA,旨在探究与舌鳞状细胞癌相关的circRNA,为深入探讨circRNA对舌鳞状细胞癌的调控机制提供实验依据,考虑到circRNA的结构稳定性,其有巨大潜力成为新型的临床诊断标志物或治疗靶点。本研究分为以下三个部分:第一章舌鳞状细胞癌灶组织与癌旁组织间差异表达circRNA的筛选研究目的:利用高通量circRNA芯片,检测circRNA在舌鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织中表达谱的变化,筛选出舌鳞状细胞癌组织与癌旁组织间差异表达的circRNA,初步探究circRNA与舌鳞状细胞癌之间的关系。研究方法:1.随机收集10例2016年11月-2017年5月在南方医科大学口腔医院行手术治疗的舌鳞状细胞癌患者的癌灶组织和癌旁组织,随机选择其中4例进行circRNA芯片实验;2.使用Invitrogen公司的Trizol试剂盒提取所有样本的总RNA,用DU70型分光光度仪测定样品在260nm、280nm波长的光密度值A260、A280之比;使用甲醛变性胶对所有样本total RNA进行电泳检测。将质检合格的样品合成带有荧光基团的cDNA,即可用于芯片杂交;3.杂交扫描后的芯片采用Feature Extraction提数软件进行预处理分析,然后采用GeneSpring GX软件计算基因表达差异和统计学显著性p值,差异基因的标准为癌灶组织相对癌旁组织表达变化2倍以上且P值<0.05,按此标准筛选出舌鳞状细胞癌组织与癌旁组织间差异表达的circRNA。研究结果:1.从4对(8个)样本中提取的RNA总量均≥1μg,分光光度仪下A260/A280位于1.8-2.1之间,电泳条带清晰,28S:18S条带亮度大于或接近2:1,提示所有样本RNA质量符合表达谱芯片实验要求;2.对4例癌灶组织和4例癌旁组织进行高通量circRNA芯片实验,并对结果进行预处理、归一化后,按照差异circRNA的标准进行筛选,结果显示:共筛选出差异circRNA 17171条,为芯片可检测circRNA的10.8%,其中2倍以上高表达的9982条,2倍以上低表达的为7189条;5倍以上高表达的为2032条,5倍以上低表达的为849条;10倍以上高表达的为392条,10倍以上低表达的为179 条;***034026是高表达倍数最高的circRNA,上调倍数约为137.22倍,hsairc113500是低表达倍数最高的circRNA,下调倍数约为95.44倍。第二章舌鳞状细胞癌灶组织与癌旁组织间差异表达circRNA的qPCR验证研究目的:CapitalBio Technology Human CircRNA Array v2 是一种高通量 circRNA 芯片,利用该芯片,我们高效率地筛选出了舌鳞状细胞癌组织与癌旁组织间差异表达的circRNA,为了进一步验证芯片结果的准确性,我们随机从差异circRNA中选择了 4个circRNA,在10例舌鳞状细胞癌灶组织和癌旁组织中进行qPCR实验,验证这些目的circRNA的表达情况是否与芯片结果相吻合。研究方法:1.

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