检索结果-南通市图书馆

作者：司钊山西大学

学位级别：硕士

油松毛虫(Dendrolimus fabulaeformis Tsai et Liu)和日本龟蜡蚧(Ceroplastesjaponicus Green)是农林业的重大害虫,传统的化学防治手段存在农药残留,环境污染,杀伤天敌和害虫产生抗药性等问题。采用病原菌进行生物防治具有没有污染、防... 详细信息

油松毛虫(Dendrolimus fabulaeformis Tsai et Liu)和日本龟蜡蚧(Ceroplastesjaponicus Green)是农林业的重大害虫,传统的化学防治手段存在农药残留,环境污染,杀伤天敌和害虫产生抗药性等问题。采用病原菌进行生物防治具有没有污染、防治靶标害虫专一性强和致死效果好等优点,然而病原菌在侵染昆虫的过程中会受到昆虫免疫系统的抵抗,因此,研究昆虫感染病原菌后的免疫反应能对应用病原菌防治害虫提供理论依据。本论文研究了油松毛虫和日本龟蜡蚧受病原菌入侵后的免疫反应,其内容包括两部分。 1.油松毛虫抗菌物质及其抗菌活性的研究采用体内注射法,对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis 3龄幼虫注射浓度为1.0×10个/mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液,使其诱导产生抗菌物质,12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性,并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine-SDS-PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现,诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用,其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌(Escherichicha coli)和变形杆菌(Proteus species)的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴和pH值在4—9的条件下保持稳定,反复冻融1—5次其抗菌物质的活性仅降低4.3—14.9%。电泳结果显示,诱导组血淋巴提粗液在23.2KDa和15.0KDa处分别出现一条特异性条带,在60.4KDa处蛋白带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质可能是分子量为23.2KDa和15.0KDa的抗菌肽或者抗菌蛋白。 2.日本龟蜡蚧对蜡蚧轮枝菌感染的免疫反应研究研究了蚧虫病原真菌蜡蚧轮枝菌的生物学特性,结果表明温度和湿度对蜡蚧轮枝菌孢子的萌发,菌丝的生长和发育有明显的影响。蜡蚧轮枝菌孢子萌发、生长和产孢的适宜条件为:相对湿度95%、温度为25℃。蜡蚧轮枝菌菌株菌丝生长的适温范围是20—30℃。产孢量为是4.31×10—4.57×10个/mL。在温度为25±1℃,相对湿度95±5%的条件下用不同浓度的孢子悬液感染日本龟蜡蚧,相同感染时间下,孢子浓度与虫体死亡率呈正相关,侵染死亡率最高为91.2%。初步观察了蜡蚧轮枝菌感染日本龟蜡蚧的入侵特点以及日本龟蜡蚧染菌后的罹病症状,发现在阴门区菌丝较多,虫体边缘与蜡壳之间有分离的缝隙出现,内部器官和组织严重萎缩、黑化,蜡壳颜色也呈现污浊状。采用分光光度法测定了日本龟蜡蚧被蜡蚧轮枝菌感染后保护酶和抗菌物质的活性,结果表明:被蜡蚧轮枝菌感染后第1—8d,感染虫体内超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著高于未感染的虫体,并呈现出先升高后下降的变化趋势,而未感染虫体的变化不大;过氧化氢酶(CAT)及多酚氧化酶(PPO)的活性变化趋势与SOD的相似。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了日本龟蜡蚧感染蜡蚧轮枝菌后1—8d体内SOD同工酶与CAT同工酶的变化,发现SOD和CAT同工酶带宽与酶带亮暗均变化显著。测定了日本龟蜡蚧被蜡蚧轮枝菌感染后体内蛋白质含量和血淋巴抗菌物质的变化。结果表明:被蜡蚧轮枝菌感染后1—8d,虫体内总蛋白质和含量逐渐减少,而未感染的则变化不大;染菌后第2d,日本龟蜡蚧血淋巴内新产生了分子量为16.8KDa的蛋白质,说明蜡蚧轮枝菌侵染日本龟蜡蚧的过程中,能够分解其体内的蛋白质,并诱导血淋巴产生抗菌物质。

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MeJA对枣树抗虫性的诱导及其对日本龟蜡蚧的影响

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作者：巩莎山西大学

学位级别：硕士

枣树(Ziziphus jujube Mill)(鼠李科)是我国北方的一种重要经济林木,日本龟蜡蚧(Ceroplastes japonicus Green)(半翅目：蚧总科：蚧科)是枣园的一种破坏性害虫。本课题于2010.4-2011.10期间,在山西省稷山枣区试验基地,进行连续定点观察... 详细信息

枣树(Ziziphus jujube Mill)(鼠李科)是我国北方的一种重要经济林木,日本龟蜡蚧(Ceroplastes japonicus Green)(半翅目：蚧总科：蚧科)是枣园的一种破坏性害虫。本课题于2010.4-2011.10期间,在山西省稷山枣区试验基地,进行连续定点观察、采样,结合室内化验分析,研究了茉莉酸甲酯(MeJA)处理枣树后,诱导树体内抗虫性生理反应的启动,及对日本龟蜡蚧的控制效应。第一部分：研究了MeJA处理枣树后,诱导树体内抗虫性生理反应的启动,茉莉酸代谢途径中上游反应的3种关键酶即磷脂酶(PLO)、脂氧合酶(LOX)和丙二烯氧合酶(AOS)的活性变化,以及对害虫日本龟蜡蚧雌成虫蜜露排泄量、若虫在叶片上的固定数量和虫体发育大小的影响。结果显示：MeJA处理寄生枣树后,树体内的磷脂酶(PLO)提高了49.99%-105.10%,脂氧合酶(LOX)的活性提高了45.99%146.05%,丙二烯氧合酶(AOS)的活性提高了50.55%-163.34%,说明MeJA作为外源信号分子的确诱导了枣树抗虫性反应。枣树上日本龟蜡蚧雌成虫蜜露排泄量在一天的3个时间段(按面积算)分别减少62.25%、52.43%、39.54%,按重量计算分别减少39.17%、36.63%、34.65%。在连续3天试验中,排泄蜜露量逐日减少(按面积算)28.34%和42.86%,按重量计算减少21.51%和24.73%。说明在MeJA诱导的抗虫性反应作用下,蚧虫的取食和消化受到了明显抑制。其次,一龄若虫固定在叶片上的数量在对照组为145头,而处理组为65头。若虫发育90天后,对照组的虫体大,在0.5-1.0mm范围的占85.5%,而处理组虫体小,在0.1-0.5mm范围的占89.2%。进一步验证了虫的取食和消化受到了抑制作用。这是植物诱导抗虫性的新证据,为开展蚧虫生物防治提供了新思路。第二部分：研究了MeJA不同剂量和不同处理时间对枣树挥发物化学成分的影响。试验分别在5月、7月和9月进行,结果显示：在5月份,对照外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理和日本龟蜡蚧雌成虫危害后与健康枣树相比挥发物的变化。枣树挥发物的收集采用顶空收集法,并使用气相色谱／质谱联用仪(GC/MS)来分析收集到的挥发物的化学成分。结果显示：MeJA处理的和蚧虫危害的枣树挥发物的化学组分在种类和含量上与对照相比都有所改变。其中MeJA处理的枣树样本中检测到22种挥发物,总挥发量为37347ng/h;蚧虫危害的枣树样本中检测到24种挥发物,总挥发量为54292ng/h;而健康的对照枣树挥发物中只检测到14种化合物,总挥发量也仅为18611ng/h。经SPSS软件分析,MeJA处理部分和对照部分,日本龟蜡蚧危害部分和对照部分这两组之间都达到差异显著水平。在7月份比较了不同浓度MeJA处理对枣树挥发物的影响,结果显示：浓度分别为20μl、100μl和200μl3个MeJA处理组的枣树挥发物化学成分种类和含量与对照正常枣树相比都有所增加,其中,当MeJA浓度为20μl时,枣树挥发物成分的含量最高,为120497ng/h,当MeJA浓度为100μl和200μl时,枣树的挥发物含量分别为52385ng/h和41542ng/h,均高于正常枣树的挥发量32270ng/h;而3个不同浓度MeJA处理组的枣树的挥发物化学成分种类都相同,为28种,都远远高于正常枣树挥发物种类的19种。在9月份比较了茉莉酸甲酯持续处理枣树后挥发物的变化,结果显示：MeJA连续处理3天枣树的挥发物种类和含量均逐天增多,连续3天每天的枣树挥发物种类分别为20、22和25种,总挥发量分别为19315ng/h、28537ng/h和62323ng/h。在上述3个月的枣树挥发物成分中,萜烯类、醇类、酯类的增加量尤为明显,并且这些化合物在植物诱导化学防御方面具有重要意义,这些化合物通常被认为是与吸引天敌昆虫相关的组分。

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蚧虫的内部器官构造及寄生蜂在蚧虫体内发育的研究

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作者：傅晓虹山西大学

学位级别：硕士

蚧虫在分类上属昆虫纲Insecta半翅目Hemiptera蚧总科Coccoidea,全世界记录20科,7000余种,绝大多数是农林、果树和花卉的重要害虫。蚧虫的最大特点是虫体表面具有多种泌蜡腺体,能分泌大量蜡质,对虫体起保护作用,防治困难。研究蚧虫的体... 详细信息

蚧虫在分类上属昆虫纲Insecta半翅目Hemiptera蚧总科Coccoidea,全世界记录20科,7000余种,绝大多数是农林、果树和花卉的重要害虫。蚧虫的最大特点是虫体表面具有多种泌蜡腺体,能分泌大量蜡质,对虫体起保护作用,防治困难。研究蚧虫的体壁与蜡腺的构造,内部器官与生理代谢,及其与泌蜡功能的关系,对于深入理解蚧虫生物学、生理学、系统发育与进化、生物防治具有重要意义,但国内外在这方面报道较少。本论文利用显微解剖、石蜡切片和扫描电镜技术对5种蚧虫包括粉蚧科的白蜡绵粉蚧和康氏粉蚧,蚧科的日本龟蜡蚧,瘤大球坚蚧和皱大球坚蚧的体壁和内部器官的构造和细胞学特征进行了研究,同时研究了皱大球坚蚧体内纽绵蚧跳小蜂的发育过程。研究内容和结果如下: 1.体壁的构造研究蚧虫的体壁由原表皮,真皮层和基底膜三部分组成。原表皮位于体壁的最上层,包括上表皮、外表皮、内表皮、形成层。其中,上表皮、外表皮和内表皮是非细胞结构,主要成分为几丁质、蛋白质、脂肪和色素。形成层是一层细胞层,细胞小,排列规则。在形成层的下面为真皮层,真皮层是体壁最厚的一层,也是一层细胞层,包含与泌蜡相关的蜡腺细胞,刚毛的毛原细胞,刺的特化细胞和未特化细胞等。其中,蜡腺细胞通常大,呈圆形或似苹果形,分成几个小室,组成一个复合细胞,直径约20μm,细胞间紧密排列,几乎占据真皮层的全部位置。三格腺的复合细胞分三个小室,包括一个中央细胞、位于两侧的侧细胞,通向表皮外的腺管。中央细胞内包含有储藏物,这些储藏物为蜡质,通过腺管排出体外。与此类似,五格腺分五个小室,多格腺分多个小室,不同的是通向体壁外的腺管结构不同。三格腺、五格腺、多格腺都属于盘腺,通向原表皮的腺管短,其中多格腺的最短;管腺也为复合细胞,但它们的腺管长,分为内管和外管,内管位于中央细胞内,蜡质先进入内管,再通过外管排出体外。 2.消化排泄系统的研究蚧虫的消化系统由口器、咽、食道、唾液腺、前肠、中肠、胃盲囊组成。前肠较细,壁膜质;中肠粗,长,呈环状,壁较前肠的厚,肠壁细胞大,细胞核明显;咽两侧有一对发达的唾液腺,葡萄状。排泄系统由后肠、滤室、马氏管和肛门组成。后肠粗,肠壁膜状、透明。滤室包被在后肠的前端,表面有6个贝壳状突起。马氏管着生于中肠与后肠的交界处,两根,黄色念珠状,其内部为蜂窝状构造。从前肠到后肠,肠的内壁向肠腔突起,形成均匀的隆脊结构,以增加内壁的表面积,加大对营养的吸收。 3.呼吸与气管系统的研究蚧虫的呼吸与气管系统与一般昆虫不同,它有前后两对气门,每个气门内是由8—15根主气管成簇着生,主气管以2分支形式逐级分叉,最终形成微气管,构成气管网络,延伸入虫体内部组织中,以提供气体交换。气管壁透明,环状纹理,呈现明显的螺旋带。气管内含有一定的水分。 4.雌性生殖系统的研究雌蚧虫的生殖系统由一对卵巢,两条侧输卵管,输卵管,储精囊和阴门组成。当雌蚧虫发育成熟,准备孕卵时,生殖系统的卵巢管膨大,呈黄色,几乎充满整个体腔。在两条侧输卵管上着生着数以千计的卵巢管,一个卵巢管由一个营养室,一个卵室和卵泡细胞三部分组成。营养室包含三个滋卵细胞,为卵的发育提供营养;卵室中央为一个卵母细胞,是卵的前体,周围充满卵黄和脂肪粒,为营养物质;卵泡细胞均匀排列包围在卵室周围,形成卵室的外壁,最终形成卵壳。在卵巢的周围缠绕了许多气管的分支,这些分支直接插入卵巢组织内,为其提供必要的氧气。 5.蚧虫体内寄生蜂的发育研究本研究发现,纽绵蚧跳小蜂在皱大球坚蚧雌成虫体内为多寄生,一年发生一代,以蛹在蚧虫体内越冬。纽绵蚧跳小蜂发育过程中的最大特点是从卵到幼虫各个龄期,虫体尾部都有1长形通气柄,通气柄的末端着生在蚧虫的体壁上,其端口从体壁外吸收氧气。一、二龄幼虫的体壁透明,膜质,体内充满白色颗粒物。到第三、四龄期,前期幼虫的蜕套在通气柄上,使通气柄变为尾囊状构造。化蛹后,通气柄仍然保存。蛹羽化为成虫后,通气柄消失。成虫期的雌性小蜂中胸小盾片为黄色,雄性的为黑色。雌虫的翅淡烟色,基部透明;亚缘脉基部6/10处有一个锐三角形暗斑,尖端指向翅后缘,上密生黑色粗毛。

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北方干旱地区油松毛虫致病性白僵菌的筛选

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作者：王国昌山西农业大学

学位级别：硕士

松毛虫类(Dendrolimus)是我国松林的重大害虫类群，以往采用白僵菌(Beauveria)防治害虫多在南方，由于北方气候干旱少雨且低温期长，使它的防治应用受到限制。本次实验从2001年10月份开始，到2003年3月份，在灵丘县油松林内采集到油松毛... 详细信息

松毛虫类(Dendrolimus)是我国松林的重大害虫类群，以往采用白僵菌(Beauveria)防治害虫多在南方，由于北方气候干旱少雨且低温期长，使它的防治应用受到限制。本次实验从2001年10月份开始，到2003年3月份，在灵丘县油松林内采集到油松毛虫(Dendrolimus tabulaeformis Tsai et Liu)越冬幼虫的病死僵尸，经实验室分离、培养、鉴定，确认其致死病原物为半知菌亚门(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomycetes)丝孢目(Hyphomycetales)白僵菌属(Beauveria)的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)，并对它的生物学特性，菌落的生长速度，菌株的产孢量，分生孢子的萌发率，以及该菌株对油松毛虫幼虫的致病力进行了研究，其结果如下： 1．调查发现，在连年发生油松松毛虫危害的灵丘县下关林区能够采集到数量较多的被白僵菌侵染致死的油松毛虫僵尸，在林分干燥的环境中油松毛虫自然染病率很低。 2．在实验室对分离提纯后的白僵菌进行了一系列的生物测定。描述了该菌种的形态特征。掌握了该菌株的生长速度在温度为26±1℃的条件下最快，平均为4.12mm／d，在温度为7±1℃的条件下最慢，为1.99mm／d，在15±1℃的条件下菌株的生长速度介于二者之间，为3.77mm／d。菌株的产孢量在温度为26±1℃下最高，为4.49×10分生孢子／cm，温度为15±1℃时，产孢量为4.13×10分生孢子／cm，在7±1℃时，为2.44×10分生孢子／cm。测得孢子的萌发率为100％。 3．在不同的温度和湿度条件下，用5种浓度梯度的分生孢子悬浮液分别感染1～4龄的油松毛虫幼虫。结果表明，温度在25℃、空气相对湿度为(95±5)％时，各龄幼虫的死亡率最高、LT最低。经过对比，得出虫龄的易感性从高到低依次为1龄＞2龄＞3龄＞4龄。采用5种浓度的菌液做幼虫染病试验，其中以5×10和1×10分生孢子／ml两种浓度的致死率最高，显著高于其余3种浓度，但这两种浓度之间的差异不显著。综合比较，浓度为1×10分生孢子／ml的悬浮液，致病力强，成本较低，可在生产中参考应用。

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日本松干蚧的泌蜡及其机制研究

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作者：田芬山西大学

学位级别：硕士

日本松于蚧Matsucoccus matsumurae (Kuwana)属于昆虫纲Insecta,半翅目Hemiptera,蚧总科Coccoidea,松干蚧科Matsucocciclae,松干蚧属Matsucoccus Cockerell,是该属的模式种,由Kuwana于1903年在日本东京的黑松上首次发现,并作为新种发表... 详细信息

日本松于蚧Matsucoccus matsumurae (Kuwana)属于昆虫纲Insecta,半翅目Hemiptera,蚧总科Coccoidea,松干蚧科Matsucocciclae,松干蚧属Matsucoccus Cockerell,是该属的模式种,由Kuwana于1903年在日本东京的黑松上首次发现,并作为新种发表。于1940-1950传入我国,成为松林重大害虫,已造成巨大的经济损失,虽然连年进行大面积化学防治,但每年的危害面积仍很大,这主要是松干蚧的发育和变态复杂,虫体分泌有蜡质保护,防治困难。因此,深入研究其在不同发育阶段的泌蜡特点对提出新的防治对策将有重要意义。本研究在浙江省金华市受害的马尾松林地设立样地连续观察该害虫的发育过程并采集样本,应用光学显微技术、扫描电镜和透射电镜技术详细研究了雌雄两性在不同发育育阶段分泌的蜡质、泌蜡孔和泌蜡腺体的特点。研究结果如下： 1、日本松干蚧发育变态与各龄期的泌蜡特征研究研究结果显示,日本松于蚧雄性为完全变态,经过一龄若虫扩散和固定期、龄若虫珠形期、三龄若虫泌蜡结茧期、化蛹期、成虫羽化交配期,完成其生活史;雌性经过一龄和二龄若虫,从珠形期蜕皮后即发育为成虫,与雄虫交配后分泌蜡丝结成卵囊,产卵后死亡观察发现,雌雄两性的泌蜡特点不同：在一龄若虫扩散期虫体表而还没有分泌蜡质,一龄若虫固定期虫体开始分泌蜡质,二龄若虫期体农泌蜡很少,由气门分泌长的白色蜡丝;雄性三龄若虫是其一生中泌蜡量最多的时期,在体农分泌排列均匀的单根长蜡丝,编织形成茧,若虫在茧内化蛹,得到蜡茧保护;雄成虫虫体表面没有明显蜡质,仅在第Ⅶ腹节背面分泌一束白色长蜡丝;雌行泌蜡量最多为成虫期,山体壁分泌白色蜡丝,且在腹部末端蜡丝更多,蜡丝交错缠绕形成卵囊,卵产于囊内得到保护 2、各龄期泌蜡腺体的结构和细胞学特征研究采用扫描电镜技术观察发现：一龄若虫体表无明显蜡腺结构,气门担任泌蜡功能,气门中央为一圆孔,供气体交换,周缘环绕一圈条状小孔,蜡丝从其中泌出。二龄若虫体表覆盖薄的蜡层,气门发育为直径较大的单孔道,从中分泌出多束长蜡丝。气门有泌蜡功能在蚧虫蜡腺研究中属首次发现。三龄若虫为雄虫的泌蜡关键时期,蜡腺多集中分布在腹部背面,有单格腺、双格腺、三格腺和叫格腺,其中以双格腺为主。蜡质为实心丝状,末端膨大。雄成虫第7腹节向上翻起,背板上分布一簇柱状管腺,约18个,每个管腺有5个小孔,各分泌一根长蜡丝,这是松干蚧科的典型特征雌成虫是雌性蚧虫一生中泌蜡关键期,体表蜡腺数量较多,以腹部末端密度最大主要是多格腺(8—12格),由它们分泌蜡丝结成卵囊。同时观察到大量背疤,其结构是在体表形成大的凹陷,据说背疤是分泌性外激素的场所,但我们观察到在背疤边缘有少量蜡丝。以往研究发现新蚧总科的虫体分泌蜡丝多为空心结构,具高效泌蜡和承载能力强的特点,而日本松于蚧的蜡丝为实心结构,这进一步为松干蚧科属于古蚧类提供了证据。采用石蜡切片和透射电镜技术研究了蜡腺的细胞组成和超微结构,结构显示：在龄若虫期,气门下有发达的泌蜡复合结构,其中央为一个大的柱状储蜡器,周围环绕多个泌蜡细胞,细胞内具有合成的颗粒状蜡质：二龄若虫真皮层具有泌蜡功能的细胞,但不构成发达的泌蜡腺体,气门下有多个泌蜡细胞组成的蜡腺复合结构：三龄雄若干虫蜡腺腺中央是储蜡器,由两个体积很大的瓶状细胞组成,储蜡器周围环绕多个小型泌蜡腺细胞：雄成虫第7腹节背板上的管腺外端为硬化的泌蜡管道,火为储蜡器,最下端有一群泌蜡细胞。雌成虫的多格腺发达,中央为瓶状的储蜡细胞,周围为8-12个泌蜡细胞共同组成的复合结构,它和三龄雄若虫不同的是,中央储蜡细胞的体积不大,与周围的泌蜡细胞大小相似。将中央细胞放大后可明显观察到其内储存的蜡丝束,顶端有腺管供蜡质泌出,腺管数量与蜡腺格数一致。同时发现蜡腺细胞的细胞核较大,糙面内质网的数量很多。近年来对蜡腺的研究多局限于外部泌蜡孔的形态观察,本文采用TEM技术研究了蜡腺的细胞学特征,发现了日本松干蚧几种泌蜡腺体的泌蜡管、储蜡器和泌蜡细胞复合结构,并观察到泌蜡细胞内糙面内质网数量较多,这‘结果提供了蚧虫蜡质在腺体内的合成、储存与分泌过程的直观证据。 3.研究了虫体内与蜡质合成相关的脂肪酸合成酶(FAS)和脂肪酸延伸酶(FAE)的变化特点根据对不同阶段虫体的泌蜡特点和蜡腺细胞的研究,运用酶联免疫原理测定了虫体内与蜡质合成相关的FAS和FAE的含量变化,结果显示：虫体内FAS和FAE的含量变化与日本松干蚧在不同阶段的泌蜡活动密切相关,FAS含量变化特征为在雄性蚧虫的三龄若虫期最高(2.117±0.150nmol/L),二龄若虫期次之(1.642±0.107nmol/L),蛹期最低(0.995±0.046nmol/L);雌性蚧虫FAS含量在二龄若虫期为1.64

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昆虫病原真菌对杨尺蠖蛹的致病力研究

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作者：姚红青山西大学

学位级别：硕士

杨尺蠖,又名春尺蠖(Apocheima cinerarius Erschoff),是杨树上一种暴发性食叶害虫,每年三月下旬到五月初杨尺蠖幼虫上树取食。虫口密度大时可将整株叶片吃光,造成树木枯死。以往以喷雾杀虫剂防治树上幼虫为主。本硕士论文利用杨尺蠖老... 详细信息

杨尺蠖,又名春尺蠖(Apocheima cinerarius Erschoff),是杨树上一种暴发性食叶害虫,每年三月下旬到五月初杨尺蠖幼虫上树取食。虫口密度大时可将整株叶片吃光,造成树木枯死。以往以喷雾杀虫剂防治树上幼虫为主。本硕士论文利用杨尺蠖老熟幼虫下树入土,在土内化蛹越夏和越冬9个月的习性,开展了应用昆虫病原真菌进行生物防治的研究。本研究杨尺蠖的发生和采集地在山西省洪洞县杨树丰产林,蛹的三个发育期采样分别在5月、7月和10月,蛹的形态特征和内部解剖在OLYMPUS体视显微镜下完成。选用本实验室保存的三株球孢白僵菌作为试验菌种,TST05菌株是从桃小食心虫Carposina niponensis Walsingham越冬幼虫上分离的病原菌;FDB01菌株是从帕克阿扁叶蜂Acantholyda parki上分离的病原菌;SYN01菌株,购买于中国普通微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC 3.4428,寄主为松毛虫Dendrolimus kikuchii Matsumura。研究了这三株菌对不同发育期杨尺蠖蛹的致病力,并从自然染菌的杨尺蠖蛹上分离获得1株病原真菌。内容包括：(1)三个发育时期杨尺蠖蛹的外部形态特征和内部结构的观察,以及TST05、FDB01和SYN01菌株对其致死率的比较;(2)球孢白僵菌侵染杨尺蠖蛹体表的过程、病原菌胞外酶活力的变化测定以及杨尺蠖蛹表皮成分含量的测定;(3)从自然染菌的杨尺蠖蛹上分离获得1株病原真菌的分离、纯化,培养特征、形态特征的电镜观察和菌种的分子鉴定。结果如下：1.杨尺蠖蛹在三个发育时期的外部形态和内部解剖的结果显示,特征前期、中期和后期大致相同,有复眼、触角、中胸气门、翅芽和臀棘等结构。前期蛹和中期蛹体表为黄棕色,后期蛹为灰褐色。不同时期的蛹内部结构变化很大。前期蛹虫体未发育完全,只看到直肠囊位于中央。中期蛹基本发育完全,已经分化出中肠和马氏管等结构。后期雌蛹体内出现了卵。染菌实验说明：三菌株均能侵染杨尺蠖的蛹,死亡虫体继续培养后长出白色菌丝。虽然各时期杨尺蠖蛹的校正死亡率随时间变化曲线不相同,但是染菌4d后,TST05菌株对蛹的校正死亡率一直保持最高的趋势。染菌8d后,三个时期TST05菌株对杨尺蠖蛹的校正死亡率都是最高,致死率分别为71.05%、70.73%和61.18%,与其他菌株差异显著。LT50最小,分别为4.76d、4.91d和5.60d。TST05菌株对前期和中期蛹的校正死亡率较高,在70%以上,各时期之间差异显著。前期和中期LT50都低于5d。说明：球孢白僵菌TST05在杨尺蠖蛹期的地下防治中有较大的潜力,5月化蛹初期和7、8月雨季是防治的最佳时期。2.用球孢白僵菌菌株TST05孢子悬浮液(1×108孢子·mL-1)感染杨尺蠖后期蛹,在扫描电镜下观察侵染过程,发现杨尺蠖蛹腹部有许多分布不均匀的刻点。球孢白僵菌分生孢子在刻点处、腹部气门处、体壁上附着并萌发生出菌丝。菌丝穿透体壁后,在杨尺蠖蛹表皮背面覆盖并继续生长,并穿透在蛹壳内已发育为成虫的虫体体壁,进入体腔。以不同发育期的杨尺蠖蛹表皮为唯一碳氮源,测定三株菌的蛋白质酶、几丁质酶和脂肪酶活性,结果发现,不论以前期、中期,还是后期蛹的表皮为碳氮源,TST05和FDB01菌株对体壁蛋白质分解能力较强,酶活最大值分别达到4.581±0.392 U/ml和5.753±0.095 U/ml:SYN01菌株对体壁蛋白质分解能力较弱,最大值达到4.247±0.368 U/ml:以前期蛹表皮为唯一碳氮源,实验结果显示,三菌株***01和SYN01分解表皮几丁质能力相当,最大值分别达到0.206±0.005 U/ml.0.193±0.014 U/ml和0.200±0.012 U/ml:以中期蛹和后期蛹为唯一碳氮源,实验结果显示,SYN01菌株分解表皮几丁质的能力最强,最大值达到0.379±0.019 U/ml:TST05菌株次之,最大值达到0.346±0.036 U/ml:FDB01菌株最弱,最大值达到0.347±0.044 U/ml.不论以前期、中期,还是后期蛹的表皮为碳源,TST05菌株对表皮脂肪分解能力最强,脂肪酶的活性最大值为1.475±0.314 U/ml;FDB01次之,脂肪酶的酶活最大值为1.300±0.372 U/ml;SYN01最差,脂肪酶的酶活最大值为1.053±0.240 U/ml。同时测定了不同发育期蛹的表皮成分,在三个发育期,每0.1 g表皮,蛋白质含量分别为0.055±0.002g、0.053±0.004 g和0.052±0.003 g,三者差异性不显著。几丁质含量分别为0.021±0.001 g、0.023±0.004 g和0.026±0.002 g,后期含量比前期含量高且差异性显著,与中期相

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核桃举肢蛾病原真菌BXY01菌株的分离鉴定及致病力研究

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作者：王云山西大学

学位级别：硕士

核桃举肢蛾(Atrijuglans hetaohei Yang)属鳞翅目Lepidoptera,举肢蛾科Heliodinidae,是一种专门蛀食核桃果实的害虫。它以幼虫蛀入果内危害果皮和核桃种子,使核桃的果皮变黑,果实干缩,经济损失巨大。目前,防治核桃举肢蛾以树冠喷洒化学... 详细信息

核桃举肢蛾(Atrijuglans hetaohei Yang)属鳞翅目Lepidoptera,举肢蛾科Heliodinidae,是一种专门蛀食核桃果实的害虫。它以幼虫蛀入果内危害果皮和核桃种子,使核桃的果皮变黑,果实干缩,经济损失巨大。目前,防治核桃举肢蛾以树冠喷洒化学农药防治成虫、卵和初孵化的幼虫,但是对蛀入核桃果内的幼虫起不到防治作用。而且化学农药有污染、残留等问题。根据核桃举肢蛾老熟幼虫入土结茧越冬的习性,本研究展开以入土幼虫为靶标,利用昆虫病原真菌在表土层中感染幼虫,进行生物防治的研究。研究内容:(1)在山西盂县设立核桃实验林地,调查核桃举肢蛾越冬幼虫的虫口密度,观察核桃果实内幼虫的发育进度和危害状况,并对幼虫干尸的化学成分进行分析,测定其蛋白质、脂肪、几丁质及氨基酸的含量。为利用病原真菌提供依据。(2)从自然染病的核桃举肢蛾幼虫上分离获得一株病原真菌,对该菌株进行回接杀虫实验,形态特征观察和分子鉴定。(3)比较分离得到的菌株与来自不同寄主昆虫的球孢白僵菌3菌株对核桃举肢蛾的致病力。(4)对分离获得的病原菌株作了生物学特性和野外宿存试验。研究结果:1.核桃举肢蛾越冬虫口密度调查,幼虫果内发育和危害观察及幼虫干尸化学成分测定1.1越冬虫口密度和幼虫特征:调查显示,在3、4月份,核桃举肢蛾越冬幼虫在土壤内的密度为7802头/m2,其中活茧为98头/m2,茧内的越冬幼虫,头部黄褐色,虫体为白色,体长5-7mm。自然染病的幼虫为1.5头/m2。1.2幼虫在果实内的发育与危害:将虫害核桃解剖镜检,发现在危害初期,核桃果皮仍然保持青绿,幼虫钻蛀的虫孔和坑道都比较细小;危害中期,果实青皮上出现黑色斑块,虫体长大,果肉被大量蛀食,形成纵横交错的黑色坑道,内有虫粪;危害后期,核桃果皮大部分变黑,大部分果肉已被蛀食,形成许多虫孔和坑道,并充满大量虫粪;危害末期,幼虫发育接近成熟,果皮完全变黑,果肉几乎被完全蛀食,只剩下大量的虫粪。在钻蛀的核桃内幼虫平均6-7头,多的达13头。幼虫老熟后钻出核桃入土,刚脱果的幼虫体长6-9mm;头部黄褐色,虫体色浅,淡红,腹部末端2节呈白色。1.3幼虫干尸化学成分:经测定,幼虫干尸中蛋白质、脂肪和几丁质的含量分别为51g/100g,28g/100g和21g/100g。17种氨基酸总含量为47.24g/100g,其中以谷氨酰胺、天冬氨酸含量较多,分别为6.02g和5.17g。2.核桃举肢蛾病原真菌BXY01菌株的分离纯化与鉴定在越冬虫茧中自然染病的幼虫虫尸上,发现有虫生真菌寄生。染病虫体僵硬,表面有白色菌丝。从中分离获得一株病原真菌BXY01。作回接杀虫试验,其感染症状与自然染病虫尸的症状相同,证明该菌株是核桃举肢蛾的病原真菌。培养后观察,该菌株的菌落为绒毛状,菌丝致密,边缘整齐,菌落背面初期白色,后期淡黄色。菌丝白色,呈"之"字形弯曲生长产孢,根据形态学特征,鉴定该菌株为白僵菌属的球孢白僵菌。采用分子鉴定技术,将获得该菌株的ITS区域序列,提交至GenBank,获得Accession ***214583,经比对分析,BXY01菌株与GenBank中Beauveria bassian(Accession ***379794、***379807、***379808)同源性均为99%。结合形态学和分子鉴定结果,确定分离的BXY01菌株为白僵菌属的球抱白僵菌Beauveria bassiana。3.比较BXY01菌株与球孢白僵菌其他3个菌株对核桃举肢蛾的致病力选用球孢白僵菌3菌株,FDB01(原寄主为红松帕克阿扁叶蜂)、TST05(原寄主为桃小食心虫)、SYN01(原寄主为松毛虫),与分离得到的BXY01菌株制备孢子悬浮液(浓度为1×10孢子/mL)对核桃举肢蛾幼虫进行感染试验。结果显示,核桃举肢蛾第8d的校正致死率分别为87.8±5.2%、84.4±4.5%、91.1±2.4%和93.3±4.3%。致死中时分别为4.743d、4.934d、4.098d和3.760d,说明4个菌株对核桃举肢蛾幼虫都有较高的致死率,较短的致死中时,其中以BXY01为最优。BXY01菌株5个浓度孢子悬浮液(1×10孢子/mL、5×10孢子/mL、1×10孢子/mL、5×10孢子/mL、1×10孢子/mL)对核桃举肢蛾幼虫感染后第8d的校正致死率依次为100%、95.56±4.2%、93.3±4.3%、85.7±12.3%和76.7±7.2%。致死中时依次为3.253d、3.519d、3.760d、4.270d和4.843d。说明该菌株对核桃举肢蛾幼虫的致死率和致死中时具有浓度效应。***01菌株的生物学特性和在野外土壤中的宿存4.1生物学特性:试验证明,BXY01菌株温度适应范围较广,在15℃到35℃间都能够生长

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两种昆虫病原真菌防治大棚蔬菜根结线虫的应用研究

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作者：康佳佳山西大学

学位级别：硕士

随着北方蔬菜大棚面积扩大,大棚中的根结线虫病害大肆流行,严重影响大棚蔬菜的产量。目前,菜农采用的防治方法是在定植前用化学农药对土壤进行处理或者在蔬菜生长季节连续使用化学农药进行灌根。这样的方法不仅会造成土壤的严重污染,并... 详细信息

随着北方蔬菜大棚面积扩大,大棚中的根结线虫病害大肆流行,严重影响大棚蔬菜的产量。目前,菜农采用的防治方法是在定植前用化学农药对土壤进行处理或者在蔬菜生长季节连续使用化学农药进行灌根。这样的方法不仅会造成土壤的严重污染,并且化学农药的有毒物质可被蔬菜直接吸收,形成有毒蔬菜,威胁人们的食品安全和健康。因此,非常需要开发无公害的生物防治方法。本硕士论文利用两种昆虫病原真菌：球孢白僵菌TST05菌株的菌粉和金龟子绿僵菌TSL06菌株的发酵液对蔬菜大棚根结线虫进行了防治研究,主要内容有：(1)绿僵菌发酵液对根结线虫防治研究,包括致死率实验、室内盆栽实验、大棚实验、真菌在大棚土壤中的宿存能力,及绿僵菌发酵液毒素成分气相色谱-质谱联用测定。(2)白僵菌菌粉在大棚中对根结线虫的防治研究,包括冬季在西芹上的防治实验、春夏季在黄瓜上的防治实验,及白僵菌在大棚土壤中的宿存能力。研究结果如下：一、绿僵菌发酵液对大棚根结线虫的防治研究结果1)绿僵菌发酵液对根结线虫致死率实验结果用从实验大棚内采集的新鲜的活线虫作为实验材料,实验分三个处理,绿僵菌发酵液的滤液处理组,SDAY培养基处理组,蒸馏水处理组,处理24h后,发酵滤液处理组死亡率为100%,培养基处理组组死亡率为7.40%,蒸馏水处理组死亡率为0。2)绿僵菌发酵液对根结线虫防治效果的盆钵实验结果利用病土在实验室用花盆栽种西芹,分三个处理,绿僵菌发酵液原液处理组、发酵液滤液处理组、蒸馏水处理组,试验它们对根结线虫的防治效果。西芹生长三个月后,结果显示：西芹的平均株高,原液处理组比滤液组高3.1cm,比空白组高6.3cm;西芹单株平均鲜重,原液处理组比滤液组重13.4g,比空白组重6.58g;根瘤数,原液处理组比空白组减少了100%,滤液组比空白组减少了83.88%。结论：绿僵菌发酵液对根结线虫具有明显的防治效果,原液组比滤液组更好。3)绿僵菌发酵液对根结线虫防治效果的大棚实验结果将绿僵菌TSL06菌株用发酵罐制备成发酵液。在大棚内,蔬菜为黄瓜,二月底栽种,实验分三个处理,发酵液处理组,农药处理组,空白处理组,五个月后,统计黄瓜根上的根瘤数。根瘤按直径大小分为四组,分别是直径为0-3mm、4-6mm、7-9mm、≥10mm.结果显示：施菌组平均根瘤数按直径从小到大分别为56、35、33、4个／株,农药组分别为45、9、8、1个／株,空白组分别为67、54、39、11个／株。结论：施菌组与空白相比,有良好的防治效果,但是,稍微差于农药组。4)绿僵菌发酵液代谢毒素成分分析结果结果用正己烷和乙酸乙酯作为溶剂,对发酵液进行提取,提取物经气相色谱-质普联用仪分析。结果：得到20种可能有毒性的小分子有机物,如2,5-二叔丁基苯酚、邻苯二甲酸-异丁基-2-戊基酯、1-亚乙基-1H-茚、2,4二叔丁基苯酚、2,4-二叔丁基-7,7-二甲基-1,3,5-环庚三烯等。二、白僵菌菌粉对大棚根结线虫的防治研究结果1)第一季(冬季)的西芹实验结果将白僵菌TST05菌株制成菌粉。在大棚内,蔬菜为西芹,十月初栽种,栽种前将菌粉施予土壤中,实验分三个处理,施菌组,农药组,空白组,三个月后测量西芹的株高、根长、鲜重、根瘤数、叶片的叶绿素含量及其净光合速率。大棚-1的结果显示：芹菜平均株高,施菌组比施用农药组高10.42cm,比空白组高10.00cm;芹菜单株平均鲜重,施菌组比施用农药组重48g,比空白组重93g;根瘤数,施菌组比空白组减少了54.9%,农药组比空白组减少了50.0%;叶绿素总量,施菌组比施用农药组高0.05mg/g,比空白组高0.277mg／g;净光合速率,施菌组比施用农药组高0.4mg CO2/克鲜重*小时,比空白组高0.367mg CO2/克鲜重*小时。大棚-2的结果显示：芹菜平均株高,施菌组比施用农药组高2.8cm,比空白组高12.7cm;平均鲜重,施菌组比施用农药组轻41g,比空白组重51g;根瘤数,施菌组比空白组减少了45.6%,施用农药组比空白组减少了41.7%;叶绿素总量,施菌组比施用农药组高0.036mg／g,施菌组比空白组高0.133mg／g;净光合速率,施菌组比施用农药组高1.675mg CO2/克鲜重*小时,比空白组高1.725mg CO2/克鲜重*小时。以上结果均证明了白僵菌对根结线虫有良好的防治效果,甚至有优于农药的趋势。2)第二季(春季到夏季)的黄瓜实验结果将白僵菌TST05菌株制成菌粉。在大棚内,蔬菜为黄瓜,二月底栽种,栽种前将菌粉施予土壤中,实验分三个处理,白僵菌处理组,农药处理组,空白处理组,五个月后统计黄瓜根上的根瘤数。根瘤按直径大小分为四组,分别是直径为0-3mm、 4-6mm、7-9mm、≥10mm。结果显示：施菌组平均根瘤数按直径从小到大分别为63、30、22、5个／株,农药组分

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蚧虫基因组DNA提取及微卫星引物多态性扩增研究

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作者：石晶山西大学

学位级别：硕士

本试验对日本龟蜡蚧(Ceroplastes japonicus Green)、角蜡蚧(Ceroplastes ceriferus Fabricus)、白蜡绵粉蚧(Phenacoccus fraxinus Tang)、瘤大球坚蚧(Eulecanium gigantea Shinji)和朝鲜球蚧(Didesmococcus koreanus Borchsenius)等5... 详细信息

本试验对日本龟蜡蚧(Ceroplastes japonicus Green)、角蜡蚧(Ceroplastes ceriferus Fabricus)、白蜡绵粉蚧(Phenacoccus fraxinus Tang)、瘤大球坚蚧(Eulecanium gigantea Shinji)和朝鲜球蚧(Didesmococcus koreanus Borchsenius)等5种蚧虫基因组DNA的提取和微卫星引物多态性扩增进行了研究,试图寻找一种能有效用于蚧虫分类和系统学研究的分子遗传标记。研究结果如下: (1) 确定了一种能较稳定和大规模在实验室条件下提取蚧虫不同种类基因组DNA的方法。并且经过OD值的测定、酶切的检测和扩增实验,证明了该方法得到的DNA样品完全可以满足微卫星引物扩增的要求。通过对比若虫、雌成虫、雄成虫和卵不同虫态和酒精浸泡、阴干、烘干和冷冻不同保藏方法处理的标本的提取结果,表明该方法可以用于蚧虫的若虫、雌成虫和卵的基因组DNA提取,并且对用酒精浸泡、烘干和冷冻保存的标本也有较好的提取效果。但对雄成虫和阴干保藏的标本不适用。 (2) 建立了微卫星扩增的最适扩增体系。在保持反应体系和实验条件一致的情况下,本研究建立的蚧虫基因组DNA的单位点微卫星引物扩增体系的重复性和稳定性良好。通过温度梯度试验,确定出各微卫星引物的最适合退火温度分别为:33.15微卫星核心序列,54℃;(CAC),57℃。但(GATA)在所设温度梯度下未能获得扩增产物,说明该序列与基因组DNA蚧虫无匹配序列。优化的PCR扩增体系:模板DNA(蚧虫基因组DNA)4μL,微卫星引物15ng,dNTP 5mmol/L,Taq酶2U,10×buffer(不含Mg+))2.5μL,Mg2.5mmol/L,用双蒸水将反应体系体积加至25μL。 (3) 微卫星引物33.15核心序列在5个种的扩增中出现的条带数目都比较多,能反应遗传多态性特点,它是一条遗传多态性研究较好的通用性引物。微卫星引物(CAC)序列的种的特异性较强,在日本龟蜡蚧和白蜡绵粉蚧的扩增中条带偏少。

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桑白盾蚧病原真菌Simplicillium lanosoniveum TYL001菌株的研究

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作者：王妮山西大学

学位级别：硕士

桑白盾蚧Pseudaulacaspis pentagona（Targioni-Tozzetti）是世界性的花木和经济林木的害虫。该虫在我国北方一年发生3代,以受精雌成虫过冬,4月下旬将卵产于介壳下,5月中、下旬1龄若虫爬出介壳,在树枝干上活动扩散,选择合适位置固定,口... 详细信息

桑白盾蚧Pseudaulacaspis pentagona（Targioni-Tozzetti）是世界性的花木和经济林木的害虫。该虫在我国北方一年发生3代,以受精雌成虫过冬,4月下旬将卵产于介壳下,5月中、下旬1龄若虫爬出介壳,在树枝干上活动扩散,选择合适位置固定,口针刺入树皮内吸食汁液,虫体开始分泌蜡绒,逐渐形成介壳。蜡壳具有保护功能,使化学药物不易渗透,防治十分困难。本研究对山西省太原市绿化树木白蜡树上的桑白盾蚧进行观察研究,分离获得了病原真菌,并进行了一系列的病理学研究,为生物防治提供依据。研究内容:1、桑白盾蚧各龄期发育及显微形态特征的观察,并制作各龄期永久玻片标本;2、桑白盾蚧自然感染死亡的特征观察、虫尸收集、病原真菌的分离、纯化、回接杀虫实验、病原菌株TYL001的显微和超微形态特征的观察及物种鉴定、菌株的基因序列（ITS、线粒体小rRNA亚基（rns）、线粒体NADH脱氢酶亚基3（nad3））测定、系统发育树的构建及菌种的分子鉴定;3、TYL001菌株5种不同浓度的孢子悬浮液（1.0×10~6孢子/mL、5.0×10~6孢子/mL、1.O×10~7孢子/mL、5.0×10~7孢子/mL、1.0×10~8孢子/mL）侵染桑白盾蚧雌成虫,研究桑盾蚧的感染率和感染中时;利用光学显微、扫描电镜和透射电镜技术观察病原真菌对桑白盾蚧的侵染过程与病理学特征;以桑白盾蚧雌成虫体壁作为菌株的唯一碳源制作液体培养基,研究真菌降解体壁时3种胞外酶（脂肪酶、类枯草杆菌蛋白酶、几丁质酶）的酶活性变化。研究结果:1、桑白盾蚧雌成虫介壳与树体接触紧密,介壳呈圆形或椭圆形,灰白色,有明显的螺旋纹,背面隆起;桑白盾蚧雌成虫的虫体宽梨形或短卵形,颜色从淡黄色至橘黄色,长约1mm,触角、足、眼睛退化,体表分布多种腺体及刚毛。雌虫产卵时,围阴腺分泌蜡丝保护卵粒,防止粘连;产卵后,虫体缩向头部,干瘪死亡;卵呈椭圆形,粉色至橘粉色。初孵若虫呈藕粉色,扁椭圆形,光学显微镜下可清楚看到一龄若虫的眼、触角、足、尾丝的形态;触角6节,两眼间有两个腺孔明显,腹末有2根尾丝。二龄若虫的眼、触角、足、尾丝全部退化,外部形态与雌成虫基本相似,但是,围阴腺还未形成。2、在采集的桑白盾蚧上观察发现自然感染死亡的虫体,虫体自然感染真菌各时期的体色不同,分别为:感染初期发白、感染中期棕黄色、感染后期棕褐色,虫体表面附有菌丝;发病初期和中期的虫体还能看出明显具有体液,发病后期变的干瘪。用接种环直接取自然感染死亡虫尸上的真菌孢子,划线培养于平板培养基上,经过多次分离纯化,得到一株菌丝为白色的病原真菌,命名为:TYL001菌株。利用TYL001菌株制备孢子悬浮液（1.0×10~8孢子/mL）,对桑白盾阶雌成虫作回接杀虫实验,结果显示,蚧虫体表出现与自然染菌死亡虫尸同样的症状。说明TYL001菌株是致死桑白盾蚧的病原真菌。TYL001菌株的形态特征:分生孢子梗着生于菌丝上,多为单生,少量对生,轮生结构很少出现,刚长出的孢子以粘连球状着生于分生孢子梗上,成熟后,以单个孢子存在。据此形态特征,鉴定该菌株属于虫草科Cordycipitaceae。TYL001菌株的序列测定与分子鉴定:测定的三条序列在NCBI网页上进行Blast比对,ITS序列与Simplicillium sp.（序列号:FJ948132）的相似率为99%;rns序列与Simplicillium lanosoniveum（序列号:EF513006）的相似率为97%;nad3序列与Simplicillium lanosoniveum（序列号:EF512887）的相似性为92%。结合形态学特征和分子鉴定结果,确定TYL001菌株为Simplicillium lanosoniveum。3、5种浓度的孢子悬浮液感染桑白盾蚧后,感染率随孢子浓度的增加依次为:80%、83.33%、86.67%、90%、93.33%,感染中时随孢子浓度增加依次为:10~1.1 h、95.0 h、94.2 h、85.5 h、82.5 h。感染过程与病理学:用TYL001菌株的孢子悬浮液（1×10~8孢子/mL）侵染桑白盾蚧雌成虫,分生孢子最易附着在口器、背管、阴门、围阴腺、肛门及臀板节间处;孢子萌发形成芽管,再形成菌丝,菌丝可以从与外界相通的口器、背管、阴门、围阴腺、肛门等部位侵入,或利用其机械压力和自身分泌的胞外酶的作用,穿透桑白盾蚧体壁;菌丝进入血腔后,感染血细胞和肌肉等组织,大量生长、繁殖;待虫体内的营养耗尽,菌丝冲破体壁,扩散到体表,整个虫体被菌丝覆盖。TYL001菌株在盾蚧体壁培养液培养6 d后,三种胞外酶酶活性均表现先升高后降低的趋势,脂肪酶酶活在第2d达到最大值,Pr1酶酶活在第3d达到最大值,几丁质酶酶活在第4d达到最大值。

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