检索结果-南通市图书馆

作者：张玲玲广西医科大学

学位级别：硕士

目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌最常见的一种组织学类型。作为一种常见的恶性肿瘤,HCC对全球疾病和死亡率的负担有着显著的贡献,是全球癌症死亡的第二大原因。尿激酶纤溶酶原受体激活物(Urokinase plasminoge... 详细信息

目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌最常见的一种组织学类型。作为一种常见的恶性肿瘤,HCC对全球疾病和死亡率的负担有着显著的贡献,是全球癌症死亡的第二大原因。尿激酶纤溶酶原受体激活物(Urokinase plasminogen activator receptor,uPAR)是淋巴细胞抗原6(Lymphocyte antigen 6,Ly-6)超家族的成员之一,在肝细胞癌中高表达,并与肝癌的发生发展进程密切相关。本研究观察了uPAR对肝癌进展的影响,探讨潜在的分子机制,并进一步分析了uPAR与整合素之间的关系。方法:为了探索uPAR在肝癌细胞SMMC-7721中的功能,我们使用uPAR-siRNA慢病毒对肝癌细胞进行转染,下调肝癌细胞SMMC-7721中的uPAR的表达。通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot,WB)验证uPAR在mRNA和蛋白水平的沉默效果,并筛选稳定沉默uPAR基因的转染细胞株进行扩增培养,将其作为uPAR-siRNA沉默组。与此同时,采用阴性对照病毒转染的细胞作为阴性对照组(NC组),未经任何处理的细胞作为空白对照组(BC组)。转染后采用CCK-8实验验证沉默后SMMC-7721细胞的增殖能力,采用划痕实验,transwell迁移和侵袭实验分别验证细胞的迁移和侵袭功能,克隆形成实验则用于检测细胞的克隆形成能力。此外,为探究uPAR与整合素之间的相互作用,我们采用RT-PCR和WB实验检测了下调uPAR对整合素α5的影响。SPSS 22.0软件用于对测量数据的分析,组间比较采用单因素方差分析进行统计。结果:下调uPAR基因的稳定肝癌细胞株SMMC-7721构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示,uPAR-siRNA慢病毒转染组uPAR mRAN和蛋白表达量均显著少于阴性慢病毒转染组和空白对照组,沉默效率达94.2%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8检测细胞增殖实验发现,与其他两组对比,uPAR-siRNA沉默组在48h至120h内增殖能力降低(P<0.05),细胞增殖能力受到抑制;划痕实验结果显示,沉默组24h时划痕空白区域面积大于对应时间点的其他两组细胞面积,差异具有统计学意义(P<0.05);同样,Transwell迁移实验也得到了类似的结果,uPAR-siRNA沉默组迁移细胞数为63.40±8.11个,明显少于BC组(162.40±11.13)和NC组(155.47±11.75)的迁移细胞数,差异具有统计学意义(P<0.05),说明uPAR基因的敲低可显著抑制SMMC-7721的迁移功能;Transwell侵袭结果表明,uPAR-siRNA慢病毒转染后,通过Matrigel基质胶的侵袭细胞数减少,细胞侵袭能力明显降低(P<0.05);克隆形成实验中,BC组、NC组、沉默组细胞形成的克隆个数分别为387.67±12.90、365.67±15.04和121.67±7.64,沉默组克隆形成能力受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示,uPAR的敲低可导致肝癌细胞SMMC-7721中整合素α5 mRNA和蛋白表达水平的下调,抑制率达76.2%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过慢病毒转染可成功构建沉默uPAR的SMMC-7721细胞株。uPAR水平的下调可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力并且导致整合素α5水平的降低。我们的研究验证了uPAR在SMMC-7721细胞中的作用,提示其可能作为肝癌治疗中的潜在靶点。

关键词： uPAR 肝细胞癌整合素 SMMC-7721细胞侵袭和迁移

CRP基因多态性与非小细胞肺癌易感性的相关性研究

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CRP基因多态性与非小细胞肺癌易感性的相关性研究

作者：李豪广西医科大学

学位级别：硕士

目的:研究CRP基因rs2794521、rs2808630和rs1205三个位点多态性与非小细胞性肺癌易感性的关系,以寻找有价值的遗传标记,为肺癌的早期诊断和防治提供新线索、新思路。方法:选取非小细胞性肺癌患者152例,健康志愿者131例,进行病例对照研... 详细信息

目的:研究CRP基因rs2794521、rs2808630和rs1205三个位点多态性与非小细胞性肺癌易感性的关系,以寻找有价值的遗传标记,为肺癌的早期诊断和防治提供新线索、新思路。方法:选取非小细胞性肺癌患者152例,健康志愿者131例,进行病例对照研究。采用SNaPshot(单碱基延伸反应)技术检测样本CRP基因rs2794521、rs2808630和rs1205三个位点的单核苷酸多态性(single nucleotide PolymorPhisms,SNP),直接计算获得其基因型和等位基因的分布频率。应用χ2检验检测CRP基因三个位点的基因型在病例组和对照组中的分布应用是否符合哈-温平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium)。通过logistic回归分析相关的混杂因素,计算比值比(odds ratio,OR)和95%可信区间(Confidential interval,CI),评价三个SNP位点各基因型和等位基因与非小细胞肺癌患病风险的关系。利用在线软件SHEsis构建各SNP位点的单倍型,并分析其与非小细胞肺癌患病风险的关系。P值低于常规水平有统计学意义(P0.05),吸烟史的构成差异有统计学意义(P0.05),所选样本具有良好的群体代表性。2.CRP基因rs2794521位点有TT、CT和CC三种基因型,rs2808630位点有TT、CT和CC三种基因型,rs1205位点有TT、CT和CC三种基因型。三个位点各基因型和等位基因在对照组和病例组的频率分布均无显著性差异(P>0.05);三个位点基因型的患病风险比较中,用logistic回归分析对性别、年龄、吸烟史因素进行校正,结果显示三个位点的基因多态性与非小细胞肺癌的患病风险均不相关。3.对性别进行分层分析,在男性和女性人群中rs2794521、rs2808630及rs1205位点在对照组和病例组的基因型、等位基因的频率分布差异均无显著性差异;三个位点的基因多态性与非小细胞肺癌的患病风险均无关。对年龄进行分层分析,在年龄≥50岁的年长人群中,rs1205位点TT、CT、CC三种基因型在对照组和病例组的频率分布有显著性差异(P0.05)。结论:1.吸烟是NSCLC发生的一个危险因素。2.CRP基因rs1205位点CT基因型可能是年龄≥50岁人群肺癌患病的危险因素,同时在不吸烟人群中也可能是肺癌患病的危险因素。3.CRP基因rs2794521位点CT基因型可能是吸烟人群中肺癌患病的保护性因素。4.CRP基因rs2808630位点CT基因型和C等位基因可能是吸烟人群中肺癌患病的保护性因素。

关键词： CRP SNP 非小细胞肺癌易感性

过表达uPAR导致整合素β1水平升高并促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的研究

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过表达uPAR导致整合素β1水平升高并促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁...

作者：谢有军广西医科大学

学位级别：硕士

目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma;HCC)是原发性肝癌(Primary liver cancer;PLC)最常见的组织学类型,预后较差。尿激酶型纤溶酶原激活物受体(Urokinase plasminogen activator receptor;uPAR)在多种恶性肿瘤中高表达,并在肿瘤发生发展过程中起重要作用。本课题组前期研究表明,uPAR在肝癌组织中表达升高,但其在HCC中的作用机制尚未完全明确。本实验将进一步验证过表达uPAR基因对肝癌细胞生物学功能的影响,并探讨uPAR与整合素之间潜在的分子机制。方法:首先,本实验利用细胞转染技术,用载有过表达uPAR基因的慢病毒载体转染肝癌HepG2细胞,再利用嘌呤霉素筛选出稳转株进行扩增培养,设立为uPAR过表达组(LV-uPAR)。与此同时,采用阴性对照病毒转染的细胞作为空载对照组(Control),未经转染处理的细胞作为未转染组(Untreated)。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR;RT-PCR)和免疫印迹实验(Western blot;WB)分别用于检测转染后各实验组uPAR的mRNA和蛋白水平的表达,确认uPAR过表达是否成功。其次,系列功能学实验将用于验证过表达uPAR对肝癌HepG2细胞功能的影响。其中,CCK8实验用于检测细胞的增殖能力;Transwell迁移和划痕实验用于检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力;克隆形成实验用于检测细胞的克隆形成能力;流式细胞术用于检测过表达uPAR基因对HepG2细胞周期和凋亡的影响。最后,为探讨uPAR和整合素β1是否存在相互作用,RT-PCR和WB实验用于检测过表达uPAR后HepG2细胞中整合素β1的变化,并用WB检测粘着斑激酶(Focal adhesion kinase;FAK)的表达水平。SPSS22.0软件用于数据统计,组间比较采用单因素方差分析进行。结果:稳定过表达uPAR的肝癌HepG2细胞株构建成功。慢病毒转染组细胞均发出GFP荧光且生长状态良好,转染效率达80%以上;RT-PCR和WB结果显示,与未转染组和空载对照组相比,过表达组uPAR mRNA和蛋白表达水平均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。最后,RT-PCR和WB结果显示,uPAR过表达组整合素β1 mRAN和蛋白表达水平明显高于两个对照组(P<0.01);此外,FAK蛋白表达水平也明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:通过慢病毒转染可成功构建稳定过表达uPAR的HepG2细胞株。过表达uPAR可促进肝癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力,促使HepG2细胞从G0/G1期进入S期,但对细胞凋亡结局没有明显影响。此外,过表达uPAR导致整合素β1水平升高,其作用机制可能与整合素β1-FAK信号传导途径相关。

关键词： uPAR 整合素β1 肝细胞癌过表达 HepG2细胞

uPAR（D1D2）及整合素α5β1的协同作用与肝癌发生的相关性研究

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uPAR（D1D2）及整合素α5β1的协同作用与肝癌发生的相关性研究

作者：周英群广西医科大学

学位级别：硕士

目的：研究选择最佳的肝细胞的培养方法分离出高密度、高纯度、高活性的肝细胞作为充足的标本来源。培养并检测正常肝细胞、肝癌旁细胞及肝癌细胞中的尿激酶受体异构体uPAR（D1D2）浓度，并检测uPAR（D1D2）和整合素α5β1在正常肝组织... 详细信息

目的：研究选择最佳的肝细胞的培养方法分离出高密度、高纯度、高活性的肝细胞作为充足的标本来源。培养并检测正常肝细胞、肝癌旁细胞及肝癌细胞中的尿激酶受体异构体uPAR（D1D2）浓度，并检测uPAR（D1D2）和整合素α5β1在正常肝组织、肝癌癌旁组织、肝癌组织在广西人群中的表达;探讨尿激酶受体异构体uPAR（D1D2）和整合素α5β1在肝癌发生过程中的表达特点及两者的相关性。方法:用正常肝组织采用组织块贴壁法、肝细胞研磨法、胰酶消化法等三种原代细胞培养方法进行比较，筛选出最佳细胞培养方法，并以此最佳方法进行相关的细胞培养，并通过RT-PCR检测出正常肝细胞、肝癌旁细胞及肝癌细胞中的尿激酶受体异构体uPAR（D1D2）mRNA浓度;同时从60例肝癌组织、60例肝癌旁组织及25例正常肝组织中提取mRNA，选取RT-PCR方法检测uPAR（D1D2）、整合素α5β1mRNA在肝癌组织、肝癌旁组织及正常肝组织三种组织中的表达;同时采用原位杂交技术在基因水平上同步检测60例肝癌组织、60例癌旁组织及25例正常肝组织中uPAR（D1D2）和整合素α5β1mRNA的表达位点及表达水平。结果:1.通过比较三种培养方法的细胞纯度、存活率及上清液白蛋白，得出肝组织贴壁法是最经济、简便易行的原代肝细胞培养方法。2.通过RT-PCR检测出正常肝细胞、肝癌旁细胞及肝癌细胞中的尿激酶受体异构体uPAR（D1D2）mRNA浓度，发现从正常肝细胞、肝癌旁细胞到肝癌细胞亮度有明显增强的趋势;比较各组灰度值，P<0.05，差异有统计学意义。3.通过RT-PCR结果发现从正常肝组织、肝癌旁组织到肝癌组织，uPAR（D1D2）、整合素α5β1的表达量有明显增加的趋势，比较各组灰度比值，P<0.05，差异有统计学意义。4.在原位杂交结果中，uPAR（D1D2）、整合素α5β1均在包浆中表达，两者的阳性率在肝癌组织中都显著高于癌旁组织及正常组织，表达水平采用阳性细胞数评分和染色强度评分综合确定，比较各组的表达水平，P<0.05，差异有统计学意义。5.采用Spearman等级相关分析uPAR（D1D2）和整合素α5β1在肝癌中的表达强度，发现两者呈正相关(rs1=0.257,P<0.05;rs2=0.261，P<0.05)，认为uPAR（D1D2）和整合素α5β1在肝癌的发生发展过程中具有协同作用。结论：1.肝组织贴壁法是原代肝细胞培养的最佳方法，能培养出的高密度、高纯度、高活性的肝细胞为后续的试验提供了充足的标本来源。2.从正常肝细胞、肝癌旁细胞到肝癌细胞尿激酶受体异构体uPARmRNA(D1D2)浓度其亮度有明显增强的趋势，提示与肝细胞恶变相关。3.从正常肝组织、肝癌旁组织到肝癌组织uPAR(D1D2)和整合素α5β1mRNA的表达量均有明显增高的趋势，提示异构体uPAR(D1D2)和整合素α5β1的相互作用与肝细胞分化异常克隆性增生及恶变相关。

关键词：尿激酶受体异构体uPAR(D1D2) 整合素α5β1 协同作用肝细胞恶变细胞信号传导

PTEN SNP与非小细胞肺癌的遗传易感性研究

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PTEN SNP与非小细胞肺癌的遗传易感性研究

作者：梁珍广西医科大学

学位级别：硕士

目的:近年研究表明,第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten,PTE N)在细胞的增殖、分化及凋亡过程中起重要的调节作用,PTEN具有双特异性磷酸酶活性,通过参与PI3K/AK... 详细信息

目的:近年研究表明,第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten,PTE N)在细胞的增殖、分化及凋亡过程中起重要的调节作用,PTEN具有双特异性磷酸酶活性,通过参与PI3K/AKT途径的信号调控及维持细胞核染色质结构稳定性以发挥其抑癌作用。本课题通过检测PTEN基因rs11202586、rs1234220和rs1903858共三个位点的单核苷酸多态性(single nucleotide p olymorphism,SNP)及PTEN血清水平,探讨PTEN基因突变及PTEN血清水平与非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)发病风险的关系。方法:本课题研究中,进行了病例-对照研究,采用多重单碱基延伸(S napshot SNP)技术分别检测NSCLC组152例(男103例,女49例)和对照组124例(男84例,女40例)的PTEN基因rs11202586、rs1234220和rs1903858共三个位点的基因多态性。应用群体遗传学哈-温平衡(Hardy-W einberg equilibrium,HWE)定律检验病例组及对照组所纳入人群是否来自同一孟德尔群体,是否具有群体代表性。采用二元Logistic回归(binary logi stic regression)分析校正年龄、性别及吸烟史等因素,计算比值比(odds ratio,OR)和相应的95%可信区间(confidence intervals,CI);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测NSCLC组113例(男77例,女36例)和对照组103例(男65例,女38例)的PTEN血清水平,并比较两组间及NSC LC组男性与女性、鳞癌与腺癌、吸烟者与非吸烟者的PTEN血清水平,分析PTEN基因多态性及血清表达水平与NSCLC的患病风险关系。结果:1.PTEN基因rs11202586位点有TT、CT、CC三种基因型,以野生型纯合子TT及等位基因T为参照,CT和CC基因型与NSCLC的发病风险无相关性(P>0.05);与T等位基因相比,C等位基因与NSCLC的发病风险无相关性(P>0.05),提示rs11202586位点的基因突变可能与NSCLC的发病风险无相关性。2.PTEN基因rs1234220位点有AA、AG、GG三种基因型,以野生型纯合子AA及等位基因A为参照,AG和GG基因型与NSCLC的发病风险无相关性(P>0.05);与A等位基因相比,G等位基因与NSCLC的发病风险无相关性(P>0.05),提示rs1234220位点的基因突变可能与NSCLC的发病风险无相关性。3.PTEN基因rs1903858位点有AA、AG和GG三种基因型,以野生型纯合子AA和等位基因A作为参照,基因型AG及GG与NSCLC的发病风险增加存在相关性,其(OR=2.079,95%CI=1.087-3.974,P=0.027;OR=1.897,95%CI=1.053-3.419,P=0.033);对等位基因进行分析,发现G等位基因可增加NSCLC的发病风险,其OR=1.505,95%CI=1.065-2.126,P=0.020,提示,rs1903858位点的基因突变与NSCLC的发病风险相关。4.对吸烟习惯、病理类型及性别进行分层分析发现,在吸烟者人群中,PTEN rs1903858位点G等位基因增加NCSLC的发病风险,其OR=1.916,95%CI=1.023-3.589,P=0.042;PTEN rs1903858基因型GG及等位基因G与肺鳞状细胞癌的发病风险相关,其OR值(95%CI)分别为:OR=3.226,95%CI=1.075-9.678,P=0.037;OR=1.873,95%CI=1.092-3.212,P=0.023;rs1234220位点G等位基因增加肺腺癌的发病风险,OR=1.730,95%CI=1.054-2.841,P=0.030;在女性人群中,PTEN rs1903858位点G等位基因增加NSCLC的发病风险,其OR=2.026,95%CI=1.107-3.709,P=0.022。5.对PTEN基因rs11202585、rs1234220和rs1903858三个位点构建的单倍型进行分析发现,TAA单倍型降低NSCLC的发病风险(OR=0.628,95%CI=0.446-0.886,P=0.008),提示TAA单倍型对NSCLC是一个保护因子。6.PTEN血清水平在NSCLC组和对照组分别为55.13±69.98(ng/ml)、42.30±55.56(ng/ml)(中位数±四分位间距),两组数据差异无统计学意义(P>O.O5);NSCLC患者血清PTEN水平与患者性别、病理类型及吸烟史无相关性。结论:1.

关键词： PTEN 基因多态性 NSCLC