检索结果-南通市图书馆

作者：刘国龙山东师范大学

学位级别：硕士

松花粉的开发和利用已经有了长足的发展。松花钙奶粉是松花粉资源利用开发的复配产品,结合了松花粉中的膳食纤维与奶粉的营养物质。奶粉风味缺陷在很大程度上是由脂肪氧化。本次研究结合气相-离子迁移谱(GC-IMS)技术,系统的研究了松花... 详细信息

松花粉的开发和利用已经有了长足的发展。松花钙奶粉是松花粉资源利用开发的复配产品,结合了松花粉中的膳食纤维与奶粉的营养物质。奶粉风味缺陷在很大程度上是由脂肪氧化。本次研究结合气相-离子迁移谱(GC-IMS)技术,系统的研究了松花粉内源性酶活性评价及对产品品质的影响研究,为松花钙奶粉内源性酶活对产品品质的影响及生产工艺控制及提供了依据。本实验主要包括以下几个部分:一、对陈年松花粉、新鲜松花粉及松花钙奶粉的理化指标和脂肪酶、脂氧合酶活性进行了检测。松花粉中的脂肪含量较少,且由于花粉壁的影响未破壁的松花粉无法提取出脂肪。相较于松花粉脂肪的含量,松花钙奶粉的脂肪含量颇高;松花粉与松花钙奶粉的过氧化值均较低。与新鲜的松花粉酸价相比,陈年的松花粉的酸价是新鲜的两倍,说明经过长时间的储存,松花粉已经发生了严重的氧化变质;与松花钙奶粉的碘值相比松花粉的碘值较高,说明松花粉原料的不饱和程度大,容易发生氧化反应而导致腐败变质;松花钙奶粉的皂化值比松花粉的要高,说明脂肪酸分子量小,亲水性较强。松花钙奶粉的脂肪酶活性,与松花粉的脂肪酶活性一样,活性极低。与脂肪酶活性相比,在松花粉和松花钙奶粉中均具有较高的脂氧合酶活性。二、在基于GC-IMS和Rancimat实验探究天然抗氧化剂对风味的影响的研究中,添加松针精油和抗坏血酸棕榈酸酯可以增加挥发性风味物质的种类,但抗坏血酸棕榈酸酯对松花钙奶粉油风味的改变明显比松针精油要小,且松针精油的添加会导致强烈的青草味的产生。在实验范围内(0.3-1.5 g/kg),松针精油的添加均未能显著延长松花钙奶粉油的氧化诱导时间,添加抗坏血酸棕榈酸酯可以显著延长松花钙奶粉油的氧化诱导时间,说明在对油脂的抗氧化方面,抗坏血酸棕榈酸酯具有良好的效果。三、在采用Schaal烘箱加速法探究松花钙奶粉贮藏过程中脂肪氧化稳定性的研究中,抗坏血酸棕榈酸酯可以显著抑制松花钙奶粉储藏过程中引起的过氧化值和酸价的提升,尤其是添加了较高剂量的抗坏血酸棕榈酸酯组的酸价上升明显缓慢,在Schaal加速氧化的第三天和第十五天添加抗坏血酸棕榈酸酯可以一定程度的抑制松花钙奶粉TBARS值的升高。添加抗坏血酸棕榈酸酯可以一定程度的抑制松花钙奶粉中的脂氧合酶活性,从而间接的提高松花钙奶粉的氧化稳定性保持产品的质量。但是脂肪酶活性在样品中很低,对其影响也有限。这些结果说明抗坏血酸棕榈酸酯具有良好的抗氧化效果,能够提高松花钙奶粉的氧化稳定性。四、在植物脂氧合酶在人工模拟胃肠道液中稳定性的研究中,植物脂氧合酶在酸性条件下(低pH值)的酶活性很低,并且随着pH的升高植物脂氧合酶活性呈现出逐渐升高的趋势,植物脂氧合酶在碱性条件下有较高的酶活性。在两个小时的模拟胃液消化过程中,植物脂氧合酶对人工胃液的耐受性很差,这与在酸性条件下(低pH值)的酶活性结果表现一致。相较于在胃液中的酶活性在肠液中酶活性相对较高,人工肠液环境下植物脂氧合酶活性大幅下降,并且随着在消化时间的不断延长,植物脂氧合酶活性呈现出下降的趋势。五、在基于GC-IMS探究松花钙奶粉贮藏前后风味物质的变化的研究中,与新鲜松花钙奶粉相比,经过烘箱加速贮藏后,醛类、酯类、烯类挥发性风味物质的相对含量有所下降,醇类、酮类的相对含量有所上升。在奶粉的加工和储存过程中,样品中的游离脂肪酸首先被氧化成酮酸,然后脱羧成相应的甲基酮,这也解释了为什么随时间的延长酸价在加速氧化到第十二天后略微出现了下降。加速氧化15天后的样品中由于脂肪氧化程度的增加短链脂肪酸丙酸、丁酸含量显著增,加过高时会使松花钙奶粉产生酸臭的味道;2-庚酮-D、2-戊酮、羟基丙酮、4-羟基-4-甲基-2-戊酮等酮类含量显著增加,酮类物质主要由不饱和脂肪酸的热降解、氧化,美拉德反应而产生,2-庚酮-D和2-戊酮可能是由长链脂肪酸氧化生成的,奶粉中的糖类和蛋白质在加热条件下可能发生美拉德反应,形成多种有机物,包括一些酮类化合物,如羟基丙酮和4-羟基-4-甲基-2-戊酮。这些酮类物质在一定浓度范围内可以为松花钙奶粉增加香气但是不断增加会导致不良风味的产生,添加了较高剂量的抗坏血酸棕榈酸酯可以降低酮类物质的形成。本研究采用Schaal烘箱加速法探究了抗坏血酸棕榈酸酯对松花钙奶粉内源性酶活评价及脂质氧化的影响,并基于气相-离子迁移谱(GC-IMS)对添加天然抗氧化剂后松花钙奶粉油,以及加速贮藏前后不同松花钙奶粉样品挥发性物质进行了全面的研究。同时,研究了植物脂氧合酶在不同pH和人工消化液中的抗逆性。该研究有助于了解松花钙奶粉的内源性酶活评价及其对产品品质的影响,为松花钙奶粉的开发利用提供了新的理论基础。

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索马鲁肽对高脂饮食诱导肥胖小鼠代谢及肠道菌群的影响

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作者：孙璐颜山东师范大学

学位级别：硕士

索马鲁肽（Semaglutide）作为一种长效GLP-1受体激动剂,在临床和动物实验中均表现出降低机体体重、改善体脂的效果。然而,索马鲁肽对肥胖小鼠血清代谢途径以及肠道菌群的影响鲜有报道,并且能否通过粪菌移植技术将索马鲁肽改善肥胖的效... 详细信息

索马鲁肽（Semaglutide）作为一种长效GLP-1受体激动剂,在临床和动物实验中均表现出降低机体体重、改善体脂的效果。然而,索马鲁肽对肥胖小鼠血清代谢途径以及肠道菌群的影响鲜有报道,并且能否通过粪菌移植技术将索马鲁肽改善肥胖的效果传递给受体小鼠尚不得知。本研究通过代谢组学结合微生物组学等技术,从血清代谢和肠道菌群新角度探究索马鲁肽及粪菌移植对肥胖小鼠的影响,主要分为以下部分:一、探究不同剂量索马鲁肽对肥胖小鼠体重体脂、血脂水平及空腹血糖水平的影响。将实验小鼠分为正常饮食组（ND）、高脂饮食组（HFD）、低剂量索马鲁肽组（LSHF,10μg/kg·bw）、中剂量索马鲁肽组（MSHF,40μg/kg·bw）和高剂量索马鲁肽组（HSHF,100μg/kg·bw）。实验结果表明,为期六周的索马鲁肽干预显著降低肥胖小鼠的体重增量、体重增长率、体脂比及摄食量,改善小鼠血脂水平异常升高,显著降低空腹血糖水平,并且呈剂量依赖性。停止索马鲁肽干预四周后,小鼠体重增量和体重增长率呈现向HFD组靠近的趋势,并且血脂水平与HFD组无显著差异,空腹血糖水平与摄食量也有所回升。综上,10μg/kg·bw、40μg/kg·bw、100μg/kg·bw的索马鲁肽均改善高脂饮食诱发肥胖带来的不良影响,100μg/kg剂量效果最显著。停止索马鲁肽干预后,改善效果将逐渐减退,肥胖小鼠出现体重反弹,体脂和血糖水平回升的现象。二、探究索马鲁肽和粪菌移植对肥胖小鼠体重体脂、血脂水平、空腹血糖及胰岛素水平、白色脂肪和肝脏组织脂质积累的影响。实验小鼠分为正常饮食组（ND）、高脂饮食组（HFD）、索马鲁肽组（SHF,100μg/kg·bw）、上清液移植组（MT）和菌体移植组（FMT）。MT组灌胃移植SHF组粪悬液上层清液部分,FMT组灌胃移植SHF组粪悬液下层沉淀菌体部分。实验表明,索马鲁肽显著降低肥胖小鼠的体重增量、体重增长率、体脂比和摄食量,改善小鼠血脂水平紊乱,降低肥胖小鼠空腹血糖水平,改善了胰岛素抵抗及胰岛素敏感性受损现象;HE染色结果也表明索马鲁肽减少了小鼠白色脂肪组织和肝脏内的脂质沉积。并且可以通过粪菌移植技术将索马鲁肽改善肥胖的效果转移到受体小鼠上,移植菌体FMT组改善更显著,暗示菌体是粪菌移植技术关键。三、基于RT-qRCR技术探究索马鲁肽及粪菌移植对肥胖小鼠脂肪和肝脏脂质代谢途径及下丘脑食欲相关因子的影响以及基于核磁共振一维氢谱（HNMR）和超高效液相色谱串联高分辨率质谱（UHPLC-Q Exactive-MS/MS）代谢组学技术探究索马鲁肽及粪菌移植对肥胖小鼠血清代谢的影响。实验结果表明,索马鲁肽及粪菌移植显著上调白色脂肪组织与肝脏中脂质氧化分解相关蛋白基因的表达（如Pparα、Pparγ、Cpt1a、Pgc1α和Hsl）,显著下调脂质合成相关蛋白基因的表达（如Fabp4、Srebp1c和Nr1h3）。同时索马鲁肽增强下丘脑组织中Leptin基因表达,改善瘦素抵抗现象;增强肥胖小鼠厌食相关因子Pomc的表达,抑制食欲增加因子Agrp和Npy的表达来抑制机体摄食,粪菌移植技术也在一定程度上抑制了肥胖小鼠能量摄入。经过索马鲁肽和粪菌移植干预后,小鼠血清代谢通路如氨基酸相关代谢、谷胱甘肽代谢、甘油脂代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、嘧啶代谢、淀粉和蔗糖代谢和嘌呤代谢等代谢通路受到影响,其中氨基酸代谢涉及通路居多,苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等氨基酸均有涉及。综上,索马鲁肽及粪菌移植影响高脂饮食诱导肥胖小鼠脂质代谢及能量摄入,改变了小鼠血清代谢通路,尤其是氨基酸相关代谢。四、基于微生物组学探究索马鲁肽及粪菌移植对肥胖小鼠肠道菌群的影响。实验结果表明,索马鲁肽和粪菌移植改善了肥胖小鼠肠道菌群紊乱现象,降低了F/B比值,增加有益菌群的相对丰度、降低有害菌群的相对丰度和增加了短链脂肪酸的产生。索马鲁肽干预后Akkermansia菌属相对丰度显著上升,是索马鲁肽改善肠道菌群后的最优势菌群,但是小鼠日摄食量的降低损害了肠道菌群多样性。MT组与FMT组在不同菌属相对丰度的改善上各有所长。综上,索马鲁肽及粪菌移植影响着肥胖小鼠的肠道菌群结构和短链脂肪酸含量,通过上调产短链脂肪酸相关菌属丰度增加短链脂肪酸含量改善肥胖。五、将上述实验数据进行斯皮尔曼（Spearman）相关性分析,并结合参考文献分析讨论索马鲁肽及粪菌移植改善肥胖的关键因素。证实了索马鲁肽改善小鼠肥胖的过程中肠道菌群及代谢产物的关键作用,说明索马鲁肽通过调节小鼠脂质代谢、氨基酸代谢通路和肠道菌群改善肥胖。本课题结果表明,索马鲁肽及粪菌移植改善了肥胖小鼠体重体脂、空腹血糖和胰岛素水平,调节了肝脏和脂肪组织中脂质代谢相关因子的表达,同时影响下丘脑食欲相关因子从而调控摄食。从代谢组学新角度观察到索马鲁肽及

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松花粉酶解多肽及其抗氧化活性的初步研究

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作者：陈文媛山东师范大学

学位级别：硕士

松花粉是一种营养十分丰富的天然资源,近年来对其中多糖类物质以及脂肪酸都进行了全面的深入研究,但对于松花粉中的活性物质研究却鲜有报道。蛋白质是人体生命的最重要的基本物质,多肽则是蛋白质链的分解产物,具有生物活性的多肽片段在... 详细信息

松花粉是一种营养十分丰富的天然资源,近年来对其中多糖类物质以及脂肪酸都进行了全面的深入研究,但对于松花粉中的活性物质研究却鲜有报道。蛋白质是人体生命的最重要的基本物质,多肽则是蛋白质链的分解产物,具有生物活性的多肽片段在人体内具有多种重要功能,比如抗氧化、降血压、抗疲劳、抑制肿瘤、促进各种有利于人体的微量元素被吸收,因此,活性多肽的制备成为现在生物工程研究领域的热门。本课题以实验室自制的云南松花粉粗提蛋白为原料,利用碱性蛋白酶对云南松花粉粗提蛋白进行水解,并对其酶解条件进行优化,对得到的酶解多肽进行超滤纯化,并在化学体系及细胞体系下进行抗氧化的初步研究,为进一步研究松花粉蛋白质奠定基础。结果如下: 1.选用碱性蛋白酶酶解松花粉粗提蛋白,以羟自由基清除率和水解度为测定指标,通过单因素实验和正交试验优化酶解条件,确定抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH=9.0、温度为50℃、底物浓度为3%、酶浓度为4000U/g,酶解时间为2小时,在此条件下羟自由基清除率可以达到67.6%。 2.云南松花粉酶解多肽(PHPP)在体外的抗氧化研究,在PHPP浓度为7.5mg/mL时对超氧阴离子自由基清除率可达到64.45%,在浓度为30mg/mL时对羟自由基的清除率达到72.99%,在浓度为3mg/mL时对DPPH自由基的清除率为42.48%。 3.离心超滤法对酶解多肽(PHPP)纯化浓缩,得到的酶解多肽纯化组分简称为PPHPP。对PPHPP进行了全面的抗氧化研究,在其浓度为7.5mg/mL时对超氧阴离子自由基清除率可达到92.48%,在浓度为30mg/mL时对羟自由基的清除率达到80.80%,在浓度为3mg/mL时对DPPH自由基的清除率为70.83%,与超滤前PHPP相比,清除率均有不同程度的提高,说明离心超滤法对于提纯蛋白、去除杂质、增强酶解多肽活性发挥了很大的作用。 ***法检测PPHPP对过氧化氢损伤的H9C2心肌细胞株的保护作用,结果表明,加入PPHPP共孵后再进行过氧化氢损伤的样品组,其OD值较于损伤模型组有不同程度的提高,且终浓度为50、100、500μg/mL的PPHPP组分对心肌细胞的保护作用明显,其OD值与模型组相比为极显著差异(P<0.01)。 5.用SOD、MDA检测试剂盒测定H2O2模型组及加入PPHPP后的心肌细胞损伤组的SOD和MDA值,模型组中SOD的活力较空白组显著降低(P<0.01),过氧化物产物MDA的含量显著升高(P<0.01),但是在PPHPP加样组中,SOD的活力相对于模型组显著提高(P<0.01),过氧化物产物MDA的含量明显降低(P<0.05),这同样表明了加入PPHPP样品后的心肌细胞一定程度上减小了对H2O2的应激反应,起到了保护心肌细胞的作用。

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松花粉多糖硫酸酯化前后对白血病细胞的作用研究

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作者：王丽娟山东师范大学

学位级别：硕士

本实验室体内研究曾表明,马尾松硫酸酯化多糖(SPPM60)能抑制HepG2细胞增殖,并诱导HepG2细胞分化,逆转其恶性,而PPM60无明显作用。本次实验拟以人白血病细胞株K562细胞为研究对象,考察PPM60或SPPM60对其生长状态的影响并对其机理进行初... 详细信息

本实验室体内研究曾表明,马尾松硫酸酯化多糖(SPPM60)能抑制HepG2细胞增殖,并诱导HepG2细胞分化,逆转其恶性,而PPM60无明显作用。本次实验拟以人白血病细胞株K562细胞为研究对象,考察PPM60或SPPM60对其生长状态的影响并对其机理进行初步探讨,以期为马尾松花粉多糖的开发利用提供理论支持,并为白血病的防治提供一种潜在的方法。实验主要分为以下几个部分: 一、PPM60的分离纯化及硫酸酯化修饰:采用氯磺酸-吡啶法分别对50mg PPM60-A、PPM60-B、PPM60-C、PPM60-D进行硫酸酯化改性,得到暗黄色产物SPPM60-A、SPPM60-B、SPPM60-C、SPPM60-D61.8mg、79.0mg、63.2mg、71.9mg。用氯化钡-明胶比浊法鉴定其硫酸根含量并计算取代度分别为1.28、1.63、1.31、1.49。二、PPM60硫酸酯化前后对K562细胞增殖能力及细胞周期的影响:MTT法检测发现PPM60对K562细胞的增殖的抑制作用明显强于SPPM60,400μg/mLPPM60或SPPM60作用K562细胞48h时抑制率分别约达到32%和16%。瑞氏染色、Ho.33342/PI荧光双染观察PPM60或SPPM60对K562细胞形态的影响。经400μg/mLPPM60作用48h后,细胞体积缩小,核直径减小,核染色质浓缩,胞质丰富,核浆比例降低,细胞膜完整但不光滑,并出现一定程度的凋亡;SPPM60组与对照组相比没有明显差别。流式细胞技术检测PPM60或SPPM60处理前后K562细胞周期分布的变化。PPM60组较对照组G0/G1期细胞比例显著性增加,细胞周期发生了G0/G1期阻滞,并诱导凋亡发生。SPPM60处理组细胞细胞周期各个时相以及凋亡率与对照组相比,均没有显著性差异。三、PPM60硫酸酯化前后对K562细胞[Ca2+]i和活性氧的影响:分别以Fura-2/AM和DCFH/DA为探针,荧光分光光度计检测PPM60或SPPM60处理前后[Ca2+]i和胞内ROS的变化。PPM60作用24h、48h、72h后,PPM60组[Ca2+]i与对照组相比均明显上升,SPPM60组[Ca2+]i与对照组各时间点均显著性降低;PPM60组胞内ROS水平明显升高,SPPM60组胞内ROS水平与对照组相比基本没有变化。黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力法检测PPM60或SPPM60处理前后胞内SOD水平的变化。72h内K562细胞PPM60作用组的SOD活力较对照组有下降趋势;而SPPM60组胞内SOD活力与对照组相比,基本没有变化。TBA法检测PPM60或SPPM60处理前后胞内丙二醛(MDA)水平的变化。12h、24h、48h、72h后,PPM60组细胞内MDA与对照组相比都有所增加,SPPM60组胞内MDA水平高于对照组,但幅度甚小。以上结果表明:(1)PPM60对K562细胞有较强的抑制作用,硫酸酯化修饰之后降低了其抑制作用。(2)PPM60抑制K562细胞的机制可能是升高细胞内钙离子和活性氧浓度,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导K562细胞产生凋亡。

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山楂蜜饯生产中HACCP体系的构建与工艺优化研究

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作者：孙凯婷山东师范大学

学位级别：硕士

伴随着全球经济的发展和食品花样种类的增多，人们对食品的营养性和安全性提出了新的要求。山楂蜜饯作为一种传统的休闲食品，果香浓郁，酸甜可口，具有丰富的营养成分和药用功效，深受消费者喜爱。但是一直以来局限于作坊式生产，加工... 详细信息

伴随着全球经济的发展和食品花样种类的增多，人们对食品的营养性和安全性提出了新的要求。山楂蜜饯作为一种传统的休闲食品，果香浓郁，酸甜可口，具有丰富的营养成分和药用功效，深受消费者喜爱。但是一直以来局限于作坊式生产，加工工艺落后，管理模式陈旧。通过近几年国家对蜜饯产品的抽检发现，产品合格率不容乐观。因此，优化山楂蜜饯产品生产工艺、引入先进的产品质量管理体系对推动蜜饯产业发展有着重要的意义。本课题对低糖山楂果脯护色硬化工艺、真空渗糖工艺和山楂饼机械切片工艺进行了试验研究，提出了工艺优化方案。根据山东省青州市山楂蜜饯企业生产现状，探索建立起山楂蜜饯生产HACCP管理体系并验证了其实施效果。主要研究内容与结论如下：1.研究了低糖山楂果脯护色硬化工艺，分别用柠檬酸+VC混合液、NaHSO3溶液、NaCl溶液在不同浓度和时间下进行护色试验，以感官评价和浸渍液中花青素的含量评价护色效果。结果用浓度为1.0mol/L的柠檬酸溶液和浓度为0.2mol/L的VC溶液组成混合液护色2h效果最佳;用不同浓度的δ-葡萄糖酸内酯溶液在不同时间下作硬化处理，通过感官评价确定最适硬化条件为浓度为2.5%的δ-葡萄糖酸内酯溶液做硬化处理3h。2.研究了山楂饼机械切片工艺，选取片叠放厚度、片直径大小和水分含量进行单因素试验，在单因素实验基础上，进行正交试验分析，结果表明：片叠放厚度为35cm，直径为2.0cm，水分含量为8.5%，山楂蜜饯机械切片效果最佳。3.研究真空渗糖真空度、温度、抽空时间单因素对渗糖率的影响，确定了三个因素的适宜范围，然后通过正交试验确定最佳真空渗糖条件，结果表明在真空度0.08MPa、糖液温度50℃、抽空时间20min的条件下真空渗糖效果最好，渗糖率为16.5%。4.运用HACCP体系的原则对山楂蜜饯生产各环节进行危害分析，确定了加工过程中的关键控制点及相应的关键限值，进而建立起山楂蜜饯生产HACCP管理体系。5.将建立起的山楂蜜饯生产HACCP管理体系应用于山楂蜜饯生产企业，经验证，实施HACCP质量控制体系后，各加工环节的菌落总数和大肠菌群数均下降;产品质量缺陷率比HACCP体系实施前降低了57.5%，且每一项质量缺陷均比HACCP体系实施前有不同程度减少，产品质量有了明显提升。证明HACCP体系对于控制山楂蜜饯生产及质量安全是有效的。

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松花粉多糖和酯化多糖调节肠道屏障及RIPK3通路对小鼠结肠炎的影响

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作者：李振香山东师范大学

学位级别：硕士

松花粉多糖及酯化多糖具有良好的免疫活性,对炎症因子的调节具有重要作用。本实验室前期研究证实,松花粉多糖及其酯化物在免疫水平上对小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用,推测松花粉多糖及酯化多糖对免疫因子的调节是否与保护肠上皮细胞屏障有... 详细信息

松花粉多糖及酯化多糖具有良好的免疫活性,对炎症因子的调节具有重要作用。本实验室前期研究证实,松花粉多糖及其酯化物在免疫水平上对小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用,推测松花粉多糖及酯化多糖对免疫因子的调节是否与保护肠上皮细胞屏障有关,此外大量研究发现程序性坏死与炎症又有着密不可分的联系。本实验运用了前期实验室提取分离纯化及酯化多糖的方法,在已摸索好结肠炎小鼠的建模方法基础上,重点探究了松花粉多糖及酯化多糖调节结肠炎小鼠肠道屏障的作用以及是否能够通过调节RIPK3介导的程序性坏死通路在体内发挥抗炎作用。本实验主要包括以下几个部分:一.松花粉多糖的提取分离纯化及硫酸酯化。松花粉多糖的提取工作依照本实验室前期的提取方法,即选用水煮醇沉法进行提取,三氯乙酸去蛋白,根据得率及纯度,最终选用60%乙醇提取出来的多糖,称为PPM60。PPM60通过Sephacryl S-400凝胶层析过滤方法进行分离纯化,分为五个组分,根据得率选择第3组分继续进行后续实验,即PPM60-Ⅲ。氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化处理,得硫酸化多糖即SPPM60-Ⅲ。二.根据实验室之前的研究成果,用3%DSS水溶液7天建立小鼠溃疡性结肠炎症模型。实验小鼠分4个组,即正常组(HC)、模型组(DSS)、多糖组(PPM)、酯化多糖组(SPPM)。每天称量体重并观察记录粪便情况。实验结束后麻醉取血,绘制小鼠体重变化图,DAI评分图,以及结肠长度图,HE染色观察结肠病理组织切片。DSS组的小鼠体重下降明显、DAI评分明显升高、结肠长度明显缩短、结肠损伤严重,PPM及SPPM组都缓解了其变化趋势,并不同程度修复了结肠损伤。三.Elisa试剂盒检测小鼠血清中的炎症因子含量变化,包括IL-10、IL-18、IL-6、TNF-α、IL-1β。Western blotting实验检测结肠组织中COX-2和i NOS的含量变化。结果显示,DSS组中抑炎因子IL-10的含量降低,促炎因子IL-18、IL-6、TNF-α、IL-1β的含量升高,而PPM和SPPM组显著改善这种情况;DSS组中,炎症相关酶的含量升高,PPM组和SPPM组显著降低了炎症相关酶的含量。四.研究小鼠体内RIPK3通路相关蛋白的表达变化。通过Western blotting分析RIPK3通路介导的程序性坏死标志蛋白即RIPK3、MLKL、RIPK1、Caspase-8的含量变化,并进一步分析在该通路中发生磷酸化的标志蛋白的含量表达,即p-RIPK3、p-RIPK1、p-MLKL的含量表达,验证是否在此过程中发生程序性坏死通路的调节作用。实验发现,DSS诱导的结肠炎小鼠体内RIPK3、MLKL、RIPK1的蛋白表达升高,而PPM和SPPM组中的表达降低,表明RIPK3、MLKL、RIPK1在治疗炎症中发挥作用,调节了RIPK3通路。此外,DSS诱导的结肠炎小鼠中p-RIPK3、p-RIPK1、p-MLKL的表达明显升高,而PPM和SPPM组中的表达降低,Caspase-8的表达变化则恰好相反,表明在此过程中可能调节了RIPK3介导的程序性坏死通路从而治疗小鼠结肠炎。另外,RT-q PCR结果也表现出相同趋势,但不具显著性差异。五.研究小鼠结肠组织中肠上皮细胞紧密连接的变化。通过透射电子显微镜观察肠上皮细胞的紧密连接,免疫荧光分析紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin的分布表达,Western blotting分析ZO-1、Occludin、Claudin-1的蛋白表达含量。结果表明,DSS诱导的结肠炎小鼠肠上皮细胞的紧密连接遭到严重破坏,紧密连接相关蛋白的表达降低,而PPM和SPPM组细胞紧密连接情况得到改善,相关蛋白表达含量升高。六.本实验利用了16S r DNA扩增子测序,对小鼠结肠组织内容物微生物种群的多样性进行了一系列研究,结果发现厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门是肠道菌群的优势菌种,其中厚壁菌门、拟杆菌门在DSS模型组中丰度降低,变形菌门在DSS模型组中丰度升高,PPM及SPPM组改善其变化。变形菌、芽孢杆菌、埃希氏菌等有害菌种在DSS组中丰度较高,拟杆菌、拟普雷沃菌、阿克曼氏菌、Faecalibacterium等有益菌的丰度降低,PPM及SPPM组中调节了菌种的丰度,改善菌群变化,维持了肠道菌群的平衡,菌群的调节又进一步恢复了上皮细胞的屏障保护作用。本实验结果表明,PPM60-III和SPPM60-III对溃疡性结肠炎小鼠有一定的治疗作用,其作用机制可能是通过调节RIPK3通路、调节肠道菌群及上皮细胞的紧密连接修复了肠道屏障达到治疗炎症的效果。

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人工饲料对蜂王浆成分的影响及王浆蛋白、多肽活性的研究

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作者：赵发山东师范大学

学位级别：硕士

蜂王浆的化学成分十分复杂，一般认为新鲜的蜂王浆主要成分有水分、蛋白质、碳水化合物、脂类、维生素、矿物质以及其它微量元素等。由于蜂王浆具有复杂的化学组成，使蜂王浆具有重要的生理学、药学作用，主要有肿瘤抑制、免疫调节、降... 详细信息

蜂王浆的化学成分十分复杂，一般认为新鲜的蜂王浆主要成分有水分、蛋白质、碳水化合物、脂类、维生素、矿物质以及其它微量元素等。由于蜂王浆具有复杂的化学组成，使蜂王浆具有重要的生理学、药学作用，主要有肿瘤抑制、免疫调节、降血压、降血脂、抗氧化、抗菌、抗疲劳等对人体有益的作用。本文通过改变蜜蜂饲粮中蛋白含量，检测其对蜂王浆品质的影响。并提取蜂王浆中的蛋白、多肽类物质，对提取物的抗肿瘤作用进行初步研究，为进一步研究蜂王浆奠定基础。结果如下：1.蜜蜂饲粮中蛋白含量对蜂王浆中10-HDA的影响应用高效液相色谱法检测不同蛋白质含量的饲粮对10-HDA的影响。结果显示，不同蛋白质含量的饲粮对蜂王浆中的10-HDA含量有一定影响，但不同实验组同一批次之间、同一实验组不同批次之间并不存在显著性差异（P＞0.05）。花粉对照组的10-HDA含量除了第二次检测结果稍低外，均高于同批次各实验组2.蜜蜂饲粮中蛋白含量对蜂王浆中蛋白质的影响应用凯氏定氮法检测不同蛋白含量的饲粮对蜂王浆粗蛋白含量的影响，结果显示，不同蛋白含量的饲粮喂食蜜峰，对蜂王浆中的蛋白质含量有一定影响，但不同实验组同一批次之间、同一实验组不同批次之间并不存在显著性差异（P＞0.05）。3.蜜蜂饲粮中蛋白含量对蜂王浆中酸度的影响应用pH计检测不同蛋白含量的饲粮对蜂王浆酸度的影响，酸度检测结果显示，人工饲粮实验组间无显著性差异（P＞0.05）。4.将蜂王浆溶解后，用中压色谱仪分离得到两种物质F1、F2.5.蜂王浆中蛋白提取液对白血病细胞的抑制作用蜂王浆蛋白提取液对白细胞有抑制作用，实验中测得当蜂王浆蛋白提取液在400μg/mL时抑制率较低，当达到600μg/mL时抑制率可达到43.01%，当浓度为800μg/mL时抑制率增加不明显。6.蜂王浆中提取多肽对白血病细胞的抑制作用实验中共分离纯化得到两种多肽F1、F2。当F1浓度为400、600和800μg/mL时，对白血病细胞的抑制率分别为43.84%、47.42%和63.37%，样品对白血病细胞抑制效果明显，抑制效率随着浓度的增加而增加。当F2浓度为400、600和800μg/mL抑制率分别为12.97%、38.32%和12.65%，样品对白血病细胞具有抑制效果，当样品浓度为600μg/mL时样品具有最强的抑制效果，为最适抑制浓度。

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基于代谢组学技术分析蜂胶中的差异性代谢物

引用

作者：郐婉宁山东师范大学

学位级别：硕士

蜂胶素有“紫色黄金”之称,含有较多的黄酮和酚酸类物质,具有抗氧化、消炎、抗癌、抗辐射、抗菌等生物学活性。但因产量较低、生产周期长常导致蜂胶市场供不应求,加之蜂胶成分复杂且与杨树芽成分相似,使它掺假现象层出不穷。随着蜂胶商... 详细信息

蜂胶素有“紫色黄金”之称,含有较多的黄酮和酚酸类物质,具有抗氧化、消炎、抗癌、抗辐射、抗菌等生物学活性。但因产量较低、生产周期长常导致蜂胶市场供不应求,加之蜂胶成分复杂且与杨树芽成分相似,使它掺假现象层出不穷。随着蜂胶商品化进程的推进,不法分子常将杨树芽加工伪装成蜂胶出售。之前的许多研究中,对蜂胶中的有效活性成分如酚酸和黄酮等的测定主要依据国家标准,或利用某种方法对单一的化合物进行靶向测定。本研究是基于代谢组学技术,采用液质联用方法对蜂胶进行全面分析,并结合多元统计分析寻找不同产地原蜂胶和蜂胶产品之间的差异性代谢物,同时对蜂胶中的金属污染物进行测定,为蜂胶及其制品研究提供一定理论基础。本实验分为两个部分,第一部分为蜂胶的代谢组学研究。采用超高效液相色谱串联高分辨质谱（UPLC-Q Exactive Obitrap LC-MS）获得不同产地蜂胶、蜂胶产品的原始数据,将其导入Compound Discoverer2.1软件对样品总离子流图中的特征峰进行提取,并结合多元统计分析对不同样品进行区分,寻找可能的差异性代谢物;然后利用高分辨质谱得到的二级数据,结合Compound Discoverer2.1软件的数据处理,对代谢物进行初步定性;第二部分即样品的金属污染物检测,利用ICP-MS对样品中的铝、锰、铅、镉、铬、砷、铁等元素进行测定,为合理使用蜂胶产品提供一定理论依据。第一部分结果显示不同蜂胶样品间均能较好区分。山东和四川原蜂胶共筛选定性出16种差异性代谢物,山东原蜂胶含有较多的邻苯二甲醛、异甘草素、3-邻甲基槲皮素、4,5,6,7-四甲氧基黄酮等物质,乙基香兰素丙二醇缩醛、异丁酸香兰素乙酯和光甘草酚等多分布于四川蜂胶;四川和河北省蜂胶共寻找出16种差异性代谢物,四川蜂胶含有较多的银杏酸、腰果酸、18-β-甘草次酸等物质,河北蜂胶中含有较多异紫花前胡内酯、2-羟基马尿酸、洛伐他汀等物质;山东和河北蜂胶差异性较小,共寻找出11种差异性代谢物,山东蜂胶含有银杏酸和艾考莫瑞,河北蜂胶含有较多乔松素、樱花素、异甘草素等物质。三省原蜂胶差异性产生的原因可能为蜂胶采集地胶源植物树脂成分的差异,并辅以环境和气候的影响。蜂胶原胶与网购蜂胶差异较小,最终定性出11种差异性代谢物,网购蜂胶含有较多香豆素类物质（蒿属香豆素、异戊烯氧基呋喃香豆素）、黄酮类物质（3-羟基黄酮、乔松素、3-邻甲基槲皮素）等物质,蜂胶原胶中咖啡酸、白当归脑、二甲基倒捻子素等3种物质含量较多。造成差异的原因为蜂农对蜂胶加工程度较轻,且不同产地的蜂胶成分常存在一定差异。蜂胶原胶与蜂胶胶囊具有显著差异性,共寻找出19种差异性代谢物,包括银杏酸、绿原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、乔松素、异甘草素、4,5,6,7-四甲氧基黄酮等物质。其中胶囊中富含莽草素、4,5,6,7-四甲氧基黄酮、阿魏酸松柏酯、β,β-二甲基丙烯酸紫草素、[3,4,6-三乙酰氧基-5-（苯甲氧基）-1-环己烯]苯甲酸甲酯5种物质,其余14种物质在蜂胶原胶中含量较多。差异性产生的原因为蜂胶加工过程成分的部分损失和加工辅料的加入等。第二部分结果显示蜂胶原胶中Al、Cr、Fe、Ba、Pb含量较多且存在超标情况,其他元素如钒（V）、锰（Mn）、钴（Co）等12种元素的含量相对较低。随机购买的10种市售的胶囊产品金属元素含量均未超过国家限定标准,金属污染较小。

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柄海鞘（Styela clava）生理活性物质的研究

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作者：赵相轩山东师范大学

学位级别：硕士

目前，国外对海洋被囊动物海鞘生理活性物质的研究正处于高速发展阶段，但是关于来自柄海鞘鞘囊或鞘体的高效抗肿瘤提取物以及具有其它生理活性的海鞘提取物的仅有零星报道。我国学者对柄海鞘的研究更为少见。我国海洋海鞘资源丰富，尤... 详细信息

目前，国外对海洋被囊动物海鞘生理活性物质的研究正处于高速发展阶段，但是关于来自柄海鞘鞘囊或鞘体的高效抗肿瘤提取物以及具有其它生理活性的海鞘提取物的仅有零星报道。我国学者对柄海鞘的研究更为少见。我国海洋海鞘资源丰富，尤其是山东沿海海域海鞘资源更是极其丰富，与国外相比，不仅没有得到开发，而且还极大的困扰着养殖业和航海业的发展。因此，应当引起人们极大的关注。本文从以下几个方面对柄海鞘生理活性物质进行了初步的研究。一、脂溶性物质的研究首先，将柄海鞘的鞘囊和鞘体进行精细剥离，避免了物质的相互干扰，更好的进行物质的定位。实验中，我们单独对柄海鞘鞘囊中的化学成分进行研究。按照目前比较常用的天然产物的提取分离办法，将样品冷冻干燥后，用100％氯仿浸泡，收集氯仿滤液，减压蒸馏浓缩去除浸提溶剂，得到黑褐色的浸膏状物质。采用硅胶作干层析柱填充物，用氯仿作展开剂和洗脱液，反复硅胶层析，对柄海鞘鞘囊氯仿浸提物进行分离、提取与纯化，最后得到一浅黄绿色的油状液体fraction Ⅰ(以下均称FⅠ)。其次，利用高效液相色谱，蛋白核酸分析仪，薄层层析，凝胶色谱等检测手段，从各个角度入手，证明该FⅠ为单一组分。第三，利用核磁共振，红外光谱，紫外分析，质谱等现代分析测试技术对分离提取物FⅠ进行结构鉴定，解析出FⅠ的结构，初步推断该物质为邻苯二甲酸-(3-甲基)壬酯(PDNE)，根据目前所掌握的资料，还没有检索到该物质相关的报道，初步认定为一种新型的天然产物。第四，利用癌细胞培养等技术进行抗肿瘤活性等生理活性的研究。我们研究了该天然产物对癌细胞的活性的影响，通过MTT法初步检验了其对癌细胞细胞活性的抑制作用。实验表明，PDNE在40μg／ml浓度下即表现出对BEL7402肝癌细胞细胞活性有显著的抑制作用，这种抑制作用具有浓度依赖性。但是对于B37乳腺癌细胞细胞活性的抑制作用不明显。山东师范大学硕士学位论文柄海鞘生理活性物质的研究二、水溶性物质的研究我们还进行了柄海鞘鞘囊水溶性生理活性的研究。其提取步骤和脂溶性物质PDNE的提取分离稍有差别。对于水溶性组分，目前还没有进行物质纯度和结构的分析，仅仅进行了抗癌生理活性的初步检验，实验表明，所提取的绿色HQLF组分能够抑制B37乳腺癌细胞的活性。相信，通过进一步的研究，必然会推进我国在此领域天然产物研究与开发的进度，开创海鞘生理活性物质研究的新局面。

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松花粉硫酸酯化多糖作用于RAW264.7细胞表面受体的研究

引用

作者：李慧山东师范大学

学位级别：硕士

马尾松花粉多糖与细胞发生作用是在细胞外还是细胞内尚且未知,前期本实验室对马尾松花粉多糖进行荧光标记后发现多糖能够进入细胞。用细胞表面受体TLR4抑制剂处理后能够显著抑制多糖进入细胞,说明多糖可能通过细胞表面受体发挥功效,荧... 详细信息

马尾松花粉多糖与细胞发生作用是在细胞外还是细胞内尚且未知,前期本实验室对马尾松花粉多糖进行荧光标记后发现多糖能够进入细胞。用细胞表面受体TLR4抑制剂处理后能够显著抑制多糖进入细胞,说明多糖可能通过细胞表面受体发挥功效,荧光标记多糖提供了示踪多糖的技术基础。实验室研究还表明硫酸酯化的马尾松花粉多糖较未酯化的多糖具有更多的功能,但硫酸酯化的马尾松花粉多糖到底是在细胞内还是通过细胞表面受体发挥作用尚不清楚。因此本实验将马尾松花粉多糖同时进行硫酸酯化与荧光标记,探究多糖与细胞表面受体的作用。本文的主要内容如下:一、对马尾松花粉多糖进行提取、纯化及检测。采用热水浸提法提取马尾松花粉多糖,三氯乙酸法除蛋白后乙醇分级沉淀获得60%乙醇沉淀的多糖,命名为PPM60,然后用中压制备色谱技术进行分离纯化,共分离出五个多糖峰,对每个多糖峰进行纯度检测最终选用纯度较好的峰III,命名为PPM60-III。二、对PPM60-III进行硫酸酯化与荧光标记。采用氯磺酸-吡啶法对PPM60-III进行硫酸酯化,硫酸根取代度为1.21,将硫酸成功酯化后的多糖命名为SPPM60-III;然后采用酪胺还原法对SPPM60-III进行荧光标记,荧光取代度为0.43%;将其命名为FSPPM60-III;红外光谱仪和荧光光谱仪检测结果显示成功对PPM60-III进行了硫酸酯化和荧光标记;对FSPPM60-III进行了多糖含量的测定,测得多糖含量为71.74%;同时用FDSS(FITC-dextran sulfate sodium)作对照。三、探究FSPPM60-III对RAW264.7细胞活性、吞噬和迁移能力的影响。结果显示FSPPM60-III和FDSS都在浓度为200?g/mL时显著促进细胞增殖,后续实验综合选用多糖作用浓度为200?g/m L;PPM60-III和FSPPM60-III能显著促进细胞吞噬作用;FSPPM60-III能显著促进细胞贴壁,PPM60-III、FDSS和FSPPM60-III对细胞迁移能力都没有显著影响;四、探究巨噬细胞表面三种受体TLR4、TLR2和Dectin-1与多糖的作用。CLSM结果表明三种受体与FSPPM60-III和FDSS都存在共定位现象;用三种受体的抑制剂作用细胞后再加入多糖进行FCM检测,结果表明三种受体抑制剂都能显著抑制多糖进入细胞;说明多糖可能与三种受体发生作用。五、探究了三种受体对RAW264.7胞内钙离子和细胞分泌细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α等的影响。结果表明FSPPM60-III和FDSS与细胞作用后引起胞内钙离子浓度的升高与巨噬细胞表面的受体TLR4、TLR2和Dectin-1受体有关;三种受体抑制剂也都能或者部分显著性抑制多糖引起的细胞分泌细胞因子的增加;结果再次表明FSPPM60-III和FDSS通过与巨噬细胞表面的三种受体发挥作用。结论:FSPPM60-III能显著性促进细胞增殖、细胞贴壁和细胞吞噬能力提高了机体免疫调节能力;FSPPM60-III与细胞表面受体存在共定位现象,加入受体抑制剂后能显著性抑制多糖进入细胞,且加入受体抑制剂后能显著性抑制FSPPM60-III诱导产生的胞内钙离子及细胞因子的增加,说明细胞表面受体TLR4、TLR2和Dectin-1是FSPPM60-III的作用靶点,除三种受体外FSPPM60-III还可能与细胞表面其他受体结合发挥多糖功效。

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