检索结果-南通市图书馆

作者：王英第四军医大学

学位级别：硕士

AD是一种以获得性进行性记忆减退、认知功能障碍以及行为异常为特征的神经退行性疾病。其三大病理特征是：老年斑(SP)、神经元纤维缠结(NFT)和神经元数目的减少。β-淀粉样蛋白(Aβ)是构成SP的核心成分，也是NFT的生化基础，对神经细胞... 详细信息

AD是一种以获得性进行性记忆减退、认知功能障碍以及行为异常为特征的神经退行性疾病。其三大病理特征是：老年斑(SP)、神经元纤维缠结(NFT)和神经元数目的减少。β-淀粉样蛋白(Aβ)是构成SP的核心成分，也是NFT的生化基础，对神经细胞有直接的毒性作用，但致神经细胞凋亡和坏死的百分比，目前研究的还不十分清楚。NGF作为一种神经营养因子，能否抑制AD的神经元变性仍存在争议。目的：研究Aβ对体外培养海马神经细胞的毒性作用，及NGF对Aβ诱导的海马神经细胞凋亡的保护作用。方法： 1、取新生1天SD大鼠的海马区，应用一般培养法、加阿糖胞苷法、加阿糖胞苷和神经生长因子法培养神经元，进行神经元形态的观察，用倒置显微镜观察法和MTT比色分析检测神经元存活率，并用ABC免疫组化反应法比较三种不同培养方法在不同培养时间所得神经元的纯度。 2、观察不同浓度、不同时间Aβ对体外培养的海马神经细胞的毒性，并用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、荧光染色进行细胞第四军医大学硕士学位论文凋亡和坏死的检测。 3、对体外原代培养的海马神经细胞通过透射电镜、琼脂糖凝透胶电泳、原位末端标记(TUNEL)等方法观察加Ap组、加Ap 及NGF组神经细胞的凋亡情况。结果: 1、加NGF培养的神经元生长良好，纯度和存活率均较高。培养至12天时加NGF组神经元的纯度为98月.2%，存活率为94.52 %;不加NGF组神经元的纯度为83士2.4%，存活率为82.16% (P<0 .01);。 2、(l)经5、10、20林mol/L Ap:二。处理1 Zh后，神经细胞凋亡和坏死率明显高于浓度效应对照组;(2)给予10林mol/L Apl-40 处理的条件下，经过6、12、24h后，神经细胞凋亡和坏死率明显高于时间效应对照组。(10林mol几Apl一。处理12h后神经细胞凋亡率为30.5士6.51，坏死率为8.16士5.62) 3、NGF可保护海马神经细胞，使Ap所致的细胞凋亡率明显减少，且呈剂量依赖关系。(10林mol几Apl一+N GF组神经细胞凋亡率为15.36士3.26，10卜mol/LApl一40组神经细胞凋亡率为30.5士6.51， P<0 .01)。结论: 1、NGF对培养的神经细胞具有营养和支持作用;2、一定浓度的Ap对体外培养的海马神经细胞具有细胞毒性，由其诱导的神经细胞凋亡和坏死具有时间和剂量效应;3、NGF对Ap诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用。

关键词：海马神经细胞纯度存活率阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白凋亡坏死神经生长因子

MG患者IgG与培养神经元nAChR免疫结合及对神经元胞浆钙的影响

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MG患者IgG与培养神经元nAChR免疫结合及对神经元胞浆钙的影响

作者：刘睿第四军医大学

学位级别：硕士

重症肌无力(MG)公认为神经肌接头(NMJ)处的自身免疫性疾病，其发病机制系乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)与肌-烟碱型乙酰胆碱受体(肌-nAChR)结合，阻碍乙酰胆碱(ACh)传递。近年有研究表明MG患者存在多种中枢神经系统(CNS)受损症状和神经电生... 详细信息

重症肌无力(MG)公认为神经肌接头(NMJ)处的自身免疫性疾病，其发病机制系乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)与肌-烟碱型乙酰胆碱受体(肌-nAChR)结合，阻碍乙酰胆碱(ACh)传递。近年有研究表明MG患者存在多种中枢神经系统(CNS)受损症状和神经电生理检查异常。有研究提示，部分MG患者的CNS受损可能由AChRAb与神经-烟碱型乙酰胆碱受体(神经-nAChR)免疫交叉结合引起，但仍缺乏有力的实验证据。目的：从离体细胞水平探讨AChRAb是否能与培养神经元表面的神经-nAChR免疫交叉结合，并引起神经元生理活性改变。方法：提纯正常人及MG患者IgG。体外培养SD大鼠与昆明种小白鼠神经元及TE671细胞株。随机选取TE671细胞和SD大鼠皮层、脑干、海马神经元，分为实验组和对照组作间接免疫荧光双标记。实验组分为两组，一抗用MG患者IgG分别与NF-160和β-Tubulin作双标;对照组也分为两组，一抗用正常人IgG分别与NF-160和β-Tubulin作双标。为明确MG患者IgG结合的是否烟碱型乙酰胆碱受体，再选取SD大鼠神经元，分为实验组和对照组作间接免疫荧光双标记。实验组一抗用MG患者IgG与VAChT作双标;对照组用正常人IgG与VAChT作双标。以上结果在共聚焦荧光显微镜下观察并行荧光像素密度分析。为再次证实，选取昆明种小白鼠皮层神经元行ABC免疫细胞化学染色。实验组一抗用MG患者IgG标记;对照组一抗用正常人IgG标记。为观察这种免疫结合对神经元生理活性的影响，随机选取SD大鼠皮层神第叫军【）｛学颀f：学位论文经元行胞浆钙测定：实验组按不同滴度加 MG患者经灭活补体血请，对照组按不同滴度加正常人经灭活补体血渭（含空白对照）。血请作用2，4，6，sh 后分别加入FllJ。－3－AM，经孵育、冲洗后在荧光显微镜下观察并测定荧光像素密度，它反映细胞内的Cay浓度动态变化。待基线平稳后加入nAChR激动剂氨甲酚胆硷，检测神经元胞内钙变化，行统计分析。结果：实验组TE671细胞呈绿色荧光，对照组TE671细胞则无，证明MG 患者 IgG中含有 AChRAb，可与 TE671细胞表面特异性表达的肌－nAChR结合，正常人血清中则无AChRAb。实验组神经元呈双标，对照组呈单标，三种来源的神经元实验组均发出绿色荧光，以胞膜和树突为著，对照组则无绿色荧光，证明皮层、脑干、海马神经元均可与AChRAb结合。 VAChT和MG患者屹G双标记发现实验组MG患者屹G与VAChT共定位，证明MG患者IgG中含有的AChRAb可与胆碱能神经元的nAChR结合。 ABC免疫细胞化学反应发现实验组昆明种小白鼠免疫反应阳性，对照组则无。荧光像素密度分析说明TE671细胞表达的nAChR数量显著高于神经元上的 nAChR数量，而皮层、脑干、海马神经元表面dCM数量差异不显著。胞浆钙测定可见实验组神经元形态改变，胞内钙超载，钙超载的程度和速度与患者血清滴度和作用时间相关，对照组神经元和实验组中神经胶质细胞未见明显变化。实验组神经元静息钙不稳，对氨甲酞胆碱的反应性降低。结论：①MG患者AChRAb可与神经－nAChR受体免疫交叉结合。②部分 MG患者CNS受损的可能机制之一是AChRAb与神经－nAChR结合，抑制钙正常内流，影响神经元对神经递质的反应性。③AChRAb阴性的MG患者有无可能系CNS内产生针对神经－nAChR自身抗体所致需要深入研究。

关键词：重症肌无力,神经细胞,细胞培养,神经-烟碱型乙酚胆碱受体,烟碱型乙酰胆碱受体抗体,荧光双标记,胞浆钙

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重症肌无力中枢损害模型大脑基因表达差异

重症肌无力中枢损害模型大脑基因表达差异

作者：王桂平第四军医大学

学位级别：硕士

目的：重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头(NMJ)传递障碍引起的自身免疫性疾病，主要累及眼外肌、四肢肌及呼吸肌等引起肌肉收缩无力。然而，临床实践中发现部分MG患者伴有锥体束征;有学者发现在MG患者中枢神经系统(CNS)内乙酰胆碱受体抗... 详细信息

目的：重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头(NMJ)传递障碍引起的自身免疫性疾病，主要累及眼外肌、四肢肌及呼吸肌等引起肌肉收缩无力。然而，临床实践中发现部分MG患者伴有锥体束征;有学者发现在MG患者中枢神经系统(CNS)内乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)分泌增加，推测其可与CNS的神经-乙酰胆碱受体(AChR)结合，损害CNS，导致锥体束征;另有研究发现注入大鼠脑室系统的MG患者的IgG可与CNS的神经-AChR结合，引起CNS功能障碍，并据此建立了实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG) CNS受损模型。后续研究利用此模型进一步探讨了MG CNS受损过程中IL-1、IL-6、TNF-α、NO与NOS、AChE、Fas等变化及神经元和神经胶质细胞超微结构改变;同时从神经元水平进一步证实了MG患者AChRAb可与神经—AchR结合，进而引起胞浆钙的变化。到目前为止，所有这些分子水平的变化还缺乏基因水平的证据。本实验旨在探讨SD大鼠MG CNS损害模型中大脑皮质基因表达的差异，为深入研究MG CNS损害机制提供实验依据。方法：利用Protein G法自MG患者和健康对照志愿者血浆中分别提取并纯化免疫球蛋白，并将其借助立体定向仪分别注入实验组和对照组SD大鼠侧脑室，建立MG CNS损害模型。3周后取新鲜脑组织以改良酚氯仿一步法抽提总RNA，样品经分光光度计检测第四军医大学硕士学位论文吸光度值，并行热稳定试验鉴定有无RNA降解。以Schena法逆转录CDNA探针并纯化，分别用Cys一dUTP和Cy3一dUTP标记实验组和对照组cDNA。将两组cDNA探针混匀并与经过预杂交的的基因芯片杂交，洗片、凉干。以GenePix 4000B扫描仪扫描芯片， GenePix Pro 3.0图像处理软件分析各杂交位点Cy3、Cys荧光信号强度，计算Cys/Cy3值，筛选出与MG CNS损害相关的差异表达基因，并将所得基因在GeneBank中分析。结果:两组RNA吸光度值检测结果及热稳定试验结果均表明在取材过程中RNA无明显降解。在2000条目的基因中共发现差异表达基因46条，包括全长表达基因17条，表达序列标识29条。在模型大鼠大脑皮层中42条表达减少，4条表达增加。差异表达基因包括信号转导相关基因、细胞基本代谢相关基因、蛋白转运相关基因、细胞周期相关基因、细胞骨架和动力蛋白基因、免疫相关基因、离子通道相关基因等。结论:实验组与对照组大鼠大脑皮层存在多个基因表达差异，说明MG CNS损害过程与多个基因表达的调控有关。这些差异表达的基因提示MG过程中CNS内神经元和神经胶质细胞内蛋白的合成、转运、加工修饰、分解代谢等正常生理活动受到干扰，细胞的生长状态不良、增殖活力下降、分裂周期延长，神经元可塑性降低，适应能力下降。其中，某些基因表达的异常可能诱发机体免疫监测系统对自身抗原的异常应答，因而可能参与了MG发病的始动过程。而另一些基因表达的调控则表明，MG CNs 损害过程中，机体通过调控某些基因的表达启动补偿机制，以对抗剧烈的自身免疫反应，在一定程度上缓和了MG CNS损害过程。MG CNS损害过程中功能较为清楚的差异表达基因为深入研究MG CNS损害机理提供了较明确的探索方向。

关键词：重症肌无力中枢神经系统基因芯片基因表达

重症肌无力中枢损害大鼠NOS、NO水平变化及c-fos基因表达的实验研究

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重症肌无力中枢损害大鼠NOS、NO水平变化及c-fos基因表达的实验研...

作者：朱林第四军医大学

学位级别：硕士

目的：探讨MG CNS受损的可能机制。方法：将MG患者血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统，建立CNS受损的MG大鼠模型。测定模型大鼠脑组织及胸腺、周围血NOS、 NO水平及其动态变化。应用免疫组织化学方法，观察即早基因c-f... 详细信息

目的：探讨MG CNS受损的可能机制。方法：将MG患者血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统，建立CNS受损的MG大鼠模型。测定模型大鼠脑组织及胸腺、周围血NOS、 NO水平及其动态变化。应用免疫组织化学方法，观察即早基因c-fos 的表达，并和用健康人血清提取的IgG注入大鼠侧脑室建立的对照组进行比较。结果：模型大鼠表现出类似于实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）动物模型样症状。大鼠脑组织及周围血、胸腺中NOS、NO水平均显著升高，与对照组比较，差异非常显著（P＜0.01）。动态观察：各组织中NOS、NO均在第一周末开始升高，但脑组织中第一周末达高峰，外周组织中第二周末达高峰，各组织中第三周末开始下降，但仍高于正常组。总体来看NOS、NO水平随时间的延长和模型动物症状的加重而逐步升高。直线相关分析：脑组织NOS与NO、脑组织NOS与胸腺组织NOS、脑组织NO与胸腺组织NO均呈正相关，相关系数分别为 r=0.7155;r=0.6806;r=0.7891，P＜0.01。Fos免疫组化染色结果示：实验组大鼠脑室内第3次注入MG患者AChRab后脑内有多个脑区可以见到大量Fos阳性神经元。第三次注射后3h，大脑皮层、基底节、丘脑、海马、脑干各颅神经运动核团、听神经核、小脑皮层，下丘脑外侧区、穹隆、隔区、扣带回、乳头体、黑质、红核、纹状体等即有Fos表达，第四军医大学98级硕士研究生论文 4～sh时FOS表达达到高峰，12h后除大脑皮层、下丘脑、海马等部分脑区外，大部分脑区的FO S表达消退明显。结论：经侧脑室注入到大鼠脑室系统的MG患者AChLRab可以引起大鼠CNS功能障碍，中枢和外周NOS、NO水平均显著升高，并随大鼠症状的加重而增加，提示NOS、NO在其发病中起重要作用。C－fOS等即早基因的表达有可能参与诱导NOS、NO等神经介质或细胞因子的变化，从而导致大鼠CNS功能障碍。

关键词：重症肌无力,乙酰胆碱受体,乙酰胆碱受体抗体,一氧化氮,一氧化氮合酶,C-fos,中枢神经系统,大鼠

睡眠剥夺后大鼠中缝核群星形胶质细胞的反应及其与神经元的关系

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睡眠剥夺后大鼠中缝核群星形胶质细胞的反应及其与神经元的关系

作者：王晓东第四军医大学

学位级别：硕士

星形胶质细胞(AS)是神经胶质细胞中数量最多的一种，在脑中分布广泛。既往认为神经胶质细胞对神经元具有保护、支持、营养作用。近年研究发现神经元与星形胶质细胞之间有双向信息交流，且彼此相互作用，参与多种生理、病理过程。某些神... 详细信息

星形胶质细胞(AS)是神经胶质细胞中数量最多的一种，在脑中分布广泛。既往认为神经胶质细胞对神经元具有保护、支持、营养作用。近年研究发现神经元与星形胶质细胞之间有双向信息交流，且彼此相互作用，参与多种生理、病理过程。某些神经递质在睡眠及睡眠障碍中的作用日益受到重视，但是有关AS与睡眠关系报道很少。GFAP作为星形胶质细胞激活的标志之一，已经成为共识。本研究通过观察睡眠剥夺后大鼠脑干中缝核群GFAP表达的变化及其与神经元的关系，探讨星形胶质细胞在睡眠中的作用。实验共分以下几个部分：第一部分：不同时间睡眠剥夺后，大鼠中缝核群星形胶质细胞的表达及其与神经元的关系方法：采用小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型，用免疫组化法测量Fos和GFAP在脑干中缝核群的表达，分组为睡眠剥夺3，6，12，24，48，72，96h组，大平台对照组和正常单独饲养组，每组4只。结果：睡眠剥夺后Fos、GFAP在中缝核群均有表达，中缝苍白核和中缝背核有较高表达，随着睡眠剥夺时间的延长，Fos在中缝背核表达逐渐增加，到高峰后，则逐渐下降;GFAP在中缝背核表达到高峰后，维持在较高的水平，中缝苍白核变化不明显。结论：不同时间睡眠剥夺影响GFAP蛋白的表达，提示星形胶质细胞可能参与睡眠调节。但是在长时间睡眠剥夺过程中神经元和星形胶质细胞的反应并不同步。第二部分：睡眠剥夺和恢复睡眠后，大鼠中缝核群星形胶质细胞的表达及其与神经元的关系方法：同上。分组为睡眠剥夺12h组，睡眠剥夺12h恢复睡眠3小时组及大平台对照组和正常单独饲养组，每组3只。结果：睡眠剥夺后GFAP在中缝背核表达明显增高，睡眠恢复后表达明显减少，其变化趋势与Fos表达相一致。结论：睡眠剥夺及其后恢第四军医大学硕士学位论文复睡眠，神经元和星形胶质细胞的反应一致，该部位神经元和星形胶质细胞可能共同参与了睡眠调节。第三部分:睡眠剥夺和恢复睡眠后，大鼠中缝核群星形胶质细胞与神经元的关系一一Fos、GF/J和5一HT三重标记研究方法:同第二部分。结果:睡眠剥夺后GF妙在中缝核群尤其是中缝背核表达明显增多，睡眠恢复后表达明显减少，其变化趋势及部位与Fos表达相一致，在中缝背核Fos或者5一HT单标，或者Fos和5一HT双标阳性神经元、Fos和GFAP双标、GFAP和 5一HT双标以及Fos和5一HT双标阳性神经元周围有GFAP阳性神经纤维包绕，形成3种形式的复合体样结构。结论:GF妙对睡眠剥夺和恢复睡眠的影响反应敏感，与神经元反应趋势一致，提示星形胶质细胞和神经元可能共同参与睡眠调节。本研究结果显示:中缝背核星形胶质细胞在长时间睡眠剥夺过程中，其反应为较长时间维持在较高的表达水平，与神经元不完全一致。而在睡眠剥夺后恢复睡眠过程中，反应水平明显下降，其反应趋势与神经元完全一致，神经元与星形胶质细胞形成功能复合体共同参与睡眠觉醒的调节。中缝苍白核星形胶质细胞虽然也表现出较高的兴奋性，但不论在长时间睡眠剥夺还是在睡眠剥夺后恢复睡眠过程中其变化不明显，提示它可能没有直接参与睡眠觉醒节律的调节。中缝核群其它核团在此过程中兴奋性较低，可能未直接参与睡眠调节。

关键词：胶原纤维酸性蛋白,睡眠剥夺,中缝核,星形胶质细胞

重症肌无力中枢损害与中枢内神经细胞及神经胶质细胞的关系

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重症肌无力中枢损害与中枢内神经细胞及神经胶质细胞的关系

作者：刘少峰第四军医大学

学位级别：硕士

目的：探讨中枢神经系统(CNS)神经细胞及神经胶质细胞凋亡与重症肌无力(MG)CNS损害之间的关系方法：将MG患者血中提取的IgG(AChRAb)注入大鼠侧脑室，建立MG大鼠中枢损害模型，用透射电镜观察模型大鼠中枢内神经细胞及神经胶质细胞... 详细信息

目的：探讨中枢神经系统(CNS)神经细胞及神经胶质细胞凋亡与重症肌无力(MG)CNS损害之间的关系方法：将MG患者血中提取的IgG(AChRAb)注入大鼠侧脑室，建立MG大鼠中枢损害模型，用透射电镜观察模型大鼠中枢内神经细胞及神经胶质细胞凋亡情况，并和健康人血清提取的IgG注人大鼠侧脑室建立的对照组进行比较。结果：模型大鼠表现出类似于实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型样症状及摄食、体重、行为改变和植物神经功能异常。透射电镜下可见额、顶、颞、枕叶皮层和海马CA1区神经细胞及神经胶质细胞凋亡。与对照组之间差异显著。动态观察：1、神经细胞：侧脑室注射MG患者IgG(AChRab)1周后，在额、顶、颞、枕叶皮层和海马CA1区，神经细胞发生细胞核染色质边集：神经细胞体缩小、胞浆浓缩、核膜完整，核染色质边集于核膜内侧成团块，神经细胞有发生凋亡的趋势;2周后，电镜下可见典型的神经细胞凋亡：细胞核染色体在细胞核膜周边聚集形成新月体，染色体固缩，电子密度增强，核膜完整，细胞体积缩小，胞浆浓缩，其内细胞器集中，少数神经细胞可见线粒体轻度浓缩，粗面内质网、核糖体等细胞器基本正常，凋亡细胞周围无炎性反应(图1，2，3)。与空白及健康对照组比较差异显著。2、神经胶质细胞：侧脑室注入IgG 1周后，在模型大鼠海马CAI区及额、顶、颞、枕叶大脑皮层中可见星形胶质细胞发生如下变第四军医大学硕士论文化：细胞核染色质边集：胞体缩小、胞浆浓缩、核膜完整，核染色质边集于核膜内侧成团块状;提示有发生细胞凋亡的倾向，但尚未发生细胞凋亡;2周后，电镜下可见典型的星形胶质细胞凋亡：核染色体边聚，在核膜周边聚集成新月体形，染色体固缩，电子密度增强，核膜完整，细胞体积缩小，细胞浆浓缩，其内线粒体、粗面内质网、核糖体等细胞器基本正常;少数细胞可见线粒体轻度浓缩调亡细胞周围未见炎症反应（图4，5，6人健康及对照组则仅见极少数胶质细胞凋亡。结论：经侧脑室注人到大鼠脑室系统的MG患者血清中提取的 IgGuChRab）可以引起出类似于实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）动物模型样症状及CNS功能障碍，CNS内发生神经细胞及神经胶质细胞凋亡，并在时间上与模型大鼠症状的发生、发展相关联。瓢AChRab可作用于中枢，与CNS内的神经人ChR发生免疫交叉反应，通过各种机制，启动中枢内细胞凋亡机制，使神经细胞及神经胶质细胞凋亡，造成CNS受损，神经细胞和神经胶质细胞二者之间相互影响、相互作用，更进一步加重了上述损伤过程，促进彼此的凋亡，加剧CNS 及其功能受损。

关键词：重症肌无力乙酰胆碱受体抗体神经-乙酰胆碱受体细胞凋亡神经细胞神经胶质细胞

Aβ1-40对海马神经元的神经毒性作用及bFGF保护作用的实验研究

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Aβ1-40对海马神经元的神经毒性作用及bFGF保护作用的实验研究

作者：车宇中国人民解放军第四军医大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以损害大脑记忆和认知功能为主的中枢神经系统变性性疾病，在老年人群中，AD的发病率仅次于心脑血管病和癌症。AD的病理学特征为大脑半球老年斑形成、神经纤维缠结和广泛性神经细胞死亡。... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以损害大脑记忆和认知功能为主的中枢神经系统变性性疾病，在老年人群中，AD的发病率仅次于心脑血管病和癌症。AD的病理学特征为大脑半球老年斑形成、神经纤维缠结和广泛性神经细胞死亡。构成老年斑的主要成分β-淀粉样蛋白(Amyloid beta protein，Aβ)在AD发病过程中起重要作用;Aβ可能通过扰乱细胞内钙稳态、产生氧化应激反应和放大兴奋性毒性作用等对神经细胞产生毒性损伤，但具体机制还不清楚。细胞内钙稳态失调可影响到能量代谢和物质代谢，引发一系列病理生理反应，现多认为它是许多外界因素引起细胞死亡的共同通路。所以研究Aβ引起细胞内钙稳态失调的途径将有助于临床选择新的治疗策略。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有多功能生物活性的细胞因子，能促进神经元的存活和增殖以及保护神经元免受损伤，国内研究bFGF多集中在其对缺血性脑损伤和脑外伤的保护作用上，对AD的作用研究不多。本实验主要从细胞水平研究bFGF对Aβ损伤的保护作用，以期为第四军医大学硕士学位论文 —— 临床应用bFGF治疗AD提供实验依据。目的： 1．研究 AOI叫0对培养海马神经元的毒性作用和 bFGF的保护作用。 2．探讨A01叫。引起细胞内游离钙离子浓度厂C4入］i）升高及可能途径。方法： l．随机选取体外培养7d的新生大鼠海马神经元，经不同浓度己老化处理的＊叫0慢性作用后，观察神经元形态变化;通过MTT比色实验和激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针FlllO上／AM标记的方法检测Apl叫0对神经元存活率和＊／”］;的影响。 2．选择相同的观察指标，以bFGF为保护因素，观察bFGF预作用24h 后神经元对Apl叶0损伤的抵抗作用。同时观察了bFGF对HZO。引起神经元损伤的保护作用。 3．应用激光扫描共聚焦显微镜动态测量＊／勺i的方法，观察 L型钙离子通道阻滞剂尼莫地平和NMDA受体阻滞剂MK401对耶叫。升钙作用的影响。结果： 1．海马神经元经 0．l、l、10pmol／L的 A61叫。作用 24h后，神经元形态、存活率和［C／勺;均发生了变化：神经元生长状态不良;各组 MTT比色实验所测得的光吸收值门D值）分别为0．30210＊30、0．254t0＊26、0．133t0刀09;细胞内游离钙离子浓度相对荧光值分别是2．53f0．76、3．17f0．72、6．97“0．74。随A61叶。浓度的增加，OD值减少，游离钙离子浓度相对荧光值增加，与对照组相比，这两项指标在较高剂量组门、10pmol／L组）有统计学差异（均 P＜0＊5），低剂量组（***／L组）无差异（伶0＊5）。 2．神经元经终浓度为20ng／ML的bFGF预作用24h后，再经不同浓度的帅叫0或HZOZ作用所测得的OD值分别为0．31910刀＊、0．31410刀27、 3 第四军医大学硕士学位论文 0．300f0刀19和 0．37810刀68、0．380t0．044、0．355f0刀引，钙离子浓度相对荧光值分别是 2．26t0石8、2．38L0．76、2．5310．61 和 2．49t0．65、二．44f0．57、 2．58f0．32，两项指标变化均不明显，与对照组相比，各剂量组无显著性差异（均P＞***）。 3．在无 C4“的 D爿。k，S液中，Ah叫0不能引起细胞［Caf勺i的升高，而在完全培养液中，Apl叫。可使细胞IC4y］i明显升高;应用尼莫地平后，Apl－ 40的升钙作用被部分抑制：而MK－801无抑制作用。结论： 1．聚集态的邓叫0可以引起培养的海马神经元形态改变和存活率下降，并与其导致的细胞［C4勺;升高作用相一致，说明A到叫。的神经毒性机制可能与其升高神经元［C／勺;有关。 2，bFGF可以抑制A61叫0和HZOZ对神经元的损伤作用，其机理可能是通过稳定神经元＊勺;、抗氧化等途径实现的。 ***叫。对神经元r4勺i的升高主要是通过细胞外C／“内流完成的，L 型钙离子通道可能部分参与了这一过程。

关键词：阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白神经元细胞培养钙离子激光扫描共聚焦显微镜碱性成纤维细胞生长因子

局灶性脑缺血再灌注后IL-6、TNF-α的表达和海马CA1区超微结构改变及川芎嗪的保护机制

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局灶性脑缺血再灌注后IL-6、TNF-α的表达和海马CA1区超微结构改...

作者：林海中国人民解放军第四军医大学

学位级别：硕士

目的：局灶性脑缺血再灌注既可挽救濒临梗死的神经细胞，又可加重神经细胞的损伤甚至死亡。近年来的研究表明，局灶性脑缺血再灌注损伤中炎症机制愈来愈受到关注，其中细胞因子的作用至关重要。中药川芎嗪具有扩张血管、抑制血小... 详细信息

目的：局灶性脑缺血再灌注既可挽救濒临梗死的神经细胞，又可加重神经细胞的损伤甚至死亡。近年来的研究表明，局灶性脑缺血再灌注损伤中炎症机制愈来愈受到关注，其中细胞因子的作用至关重要。中药川芎嗪具有扩张血管、抑制血小板聚集、改善微循环、抗脂质氧化等作用，但是否可以通过影响细胞因子而起到一定的脑保护作用未见报道。本研究通过放免法观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后各时相的IL-6、TNF-α表达及中药川芎嗪对IL-6、TNF-α表达的影响，以及相应时相海马CA1区超微结构的改变，以探讨上述问题。方法： 1、用颈外动脉插入线栓法制备大鼠短暂脑缺血／再灌注模型，实验组，术前腹腔注射川芎嗪;对照组，术前腹腔注射生理盐水。 2、取脑缺血I-0.5h、再灌注R-1h、R-3h、R-6h、R-12h等5个时相点，作大鼠脑组织匀浆，用放射免疫分析法测定标本中的IL-6及TNF-α水平。 3、实验组、对照组取缺血再灌注6h、12h各2各时相点，用电镜观察海马CA1区超微结构的改变。结果： 1、IL-6的变化假手术组脑组织中未检测出IL-6;对照组I-0.5h及R-1h、R-3h、R-6h见到IL-6表达，但无显著差异，而在12h时IL-6表达却显著增高(P＜0.05);实验组的I-0.5h、R-1h及R-3h的IL-6表达与对照组相比无显著差异(P＞0.05)，但在R-6h时IL-6表达与同组间相比较显著增高(P＜0.05)，同时与对照组相比亦有显著差异(P＜0.05);R-12h两组相比仍有显著差异(P＜0.05)。 2、TNF-α的变化大鼠I-30分钟时，对照组及实验组脑组织TNF-α 第四军医大学硕士学位论文的水平较假手术组已有所增高（P＜0刀5），脑缺血再灌注各时相的增幅较之再灌注前更明显（P＜0刀5），R－12h表达最明显。各时相间，实验组的 yF a的水平与假手术组比较虽有所增加，但与对照组相比TNF a的水平却明显降低（P＜0刀5）。 3、超微结构的改变实验组海马 CA区超微结构的改变总体较对照组明显减轻，表现为：再灌注6h星形胶质细胞，突起稍肿胀，线粒体结构无明显变化：神经细胞内仅部分线粒体肿胀，内质网扩张。再灌注12h星形胶质细胞，突起肿胀，线粒体结构无明显变化;未与星形胶质细胞相连之神经细胞，胞浆内线粒体肿胀、轴突内线粒体空泡化;与星形胶质细胞相连神经细胞，内质网脱颗粒，线粒体无明显改变。结论： T’NF a加重脑缺血再灌注损伤;IL－6可能作为一种脑缺血后神经细胞死亡的内生桔抗剂，起到神经保护作用;）0芍喷可抑制脑缺血再灌注后TNF a的表达，保护海马以区星形胶质细胞，使IL－6的表达提前，可能是川苇嗓对抗脑缺血再灌注损伤的机制之一。

关键词：海马CAI区缺血/再灌注白细胞介素一6肿瘤坏死因子一α 超微结构大鼠