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作者：叶增华中科技大学

学位级别：硕士

研究目的本研究探索低氧胰腺癌细胞外泌体对常氧胰腺癌细胞侵袭与转移的影响,并进一步研究外泌体miRNA在这过程中发挥的作用。旨在为胰腺癌的综合治疗提供新的策略。研究方法提取低氧胰腺癌细胞培养基中的外泌体,并与常氧胰腺癌细胞孵育... 详细信息

研究目的本研究探索低氧胰腺癌细胞外泌体对常氧胰腺癌细胞侵袭与转移的影响,并进一步研究外泌体miRNA在这过程中发挥的作用。旨在为胰腺癌的综合治疗提供新的策略。研究方法提取低氧胰腺癌细胞培养基中的外泌体,并与常氧胰腺癌细胞孵育,观察后者侵袭、转移效应。再通过miRNA芯片和实时荧光定量PCR检测miRNAs在低氧及常氧胰腺癌外泌体中的表达差异,选择上调最明显的miRNA(miR-650)。通过CHIP、荧光素酶报告基因等实验探究低氧促进miR-650表达机制。在低氧胰腺癌细胞中抑制miR-650后,再提取外泌体,做生物学效应实验,如transwell和划痕实验来观察抑制miR-650后低氧胰腺癌细胞所分泌的外泌体对正常氧含量条件下胰腺癌细胞侵袭、转移能力的影响。在常氧细胞过表达miR-650,观察其外泌体对胰腺癌细胞侵袭、转移的影响。通过检测常氧细胞的HIF-1α及其下游靶标的表达情况,检测低氧外泌体是否影响常氧胰腺癌细胞低氧相关的信号通路。最后通过网站预测,找出miR-650的下游靶标VHL mRNA,并通过PCR、双荧光素酶报告基因及western blot验证。同时过表达miR-650和VHL,实验观察HIF-1α变化情况。研究结果胰腺癌细胞的功能学效应研究表明,低氧胰腺癌细胞外泌体明显促进常氧胰腺癌细胞的侵袭与转移。miRNA芯片及PCR结果显示,miR-650在低氧胰腺癌细胞外泌体中升高最明显。CHIP和荧光素酶报告基因等实验结果表明HIF-1α促进miR-650转录。抑制miR-650后,低氧胰腺癌细胞外泌体的促侵袭和转移能力亦明显减弱。而在常氧细胞过表达miR-650后,其外泌体也有促侵袭和转移能力。Western Blot结果显示,低氧胰腺癌外泌体和miR-650促进HIF-1α及其侵袭转移相关下游ZEB1的表达,抑制下游E-cadherin的表达。表明低氧胰腺癌外泌体向常氧胰腺癌细胞传递了低氧信号。通过TargetScan网站预测,发现VHL是mi R-650的下游靶标。PCR、双荧光素酶报告基因及western blot证明过表达miR-650在RNA水平和蛋白水平降低VHL。此外,过表达VHL可以大部分逆转mi R-650诱导的HIF-1α升高。研究结论低氧在转录水平促进miR-650的表达,通过包装进入外泌体,传递给常氧胰腺癌细胞,激活后者低氧信号通路,促进其侵袭与转移。在miR-650与HIF-1α之间存在一个正反馈环路,相互促进。通过靶向抑制外泌体miR-650来抑制胰腺癌的侵袭与转移可能为胰腺癌综合治疗提供一个潜在方向,但尚需进一步证实。

关键词：胰腺癌低氧外泌体 miR-650 侵袭迁移

胰岛素通过缺氧诱导因子1α信号途径增强胰腺癌细胞的增殖活性和侵袭能力

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胰岛素通过缺氧诱导因子1α信号途径增强胰腺癌细胞的增殖活性和...

作者：王统玲华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分Insulin、HIF-1α在胰腺癌组织中的表达及其相关性研究目的探讨胰腺癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达与胰岛素(insulin)水平的相关性。方法免疫组织化学SP法检测65例胰腺癌中心与与边缘癌组织内HIF-1α、insulin蛋白表... 详细信息

第一部分Insulin、HIF-1α在胰腺癌组织中的表达及其相关性研究目的探讨胰腺癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达与胰岛素(insulin)水平的相关性。方法免疫组织化学SP法检测65例胰腺癌中心与与边缘癌组织内HIF-1α、insulin蛋白表达;Western blots免疫印迹法检测28例胰腺癌中心与边缘癌组织内HIF-1α蛋白表达及insulin水平,并分析两者之间相关性。结果免疫组织化学与Western blots结果显示中心、边缘胰腺癌组织中均高表达HIF-1α蛋白,无明显统计学差异(P>0.05);边缘癌组织中insulin水平明显高于中心癌组织,差异有统计学意义(P0.05);无明显正直线相关性(r=0.22,P>0.05)。结论胰腺癌中高胰岛素微环境可能通过调控HIF-1α蛋白表达增强肿瘤细胞侵袭与转移能力。第二部分胰岛素对人胰腺癌细胞增殖与侵袭能力的影响目的研究胰岛素预处理对PANC-1增殖与侵袭能力的影响及对细胞中低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的调控。方法使用不同浓度胰岛素处理PANC-1。MTT法和Transwell侵袭实验检测不同浓度胰岛素干预下PANC-1增殖和侵袭能力变化;Western blots分析PANC-1中HIF-1α、VEGF、PCNA蛋白表达变化;实时定量PCR检测细胞中HIF -1α、VEGF mRNA表达。结果胰岛素预处理可增强PANC-1增殖能力,且随胰岛素浓度增加细胞增殖能力明显增强(p 0.05),而VEGF mRNA表达明显升高(p <0.05)。结论胰腺癌中高胰岛素微环境可能影响癌细胞恶性增殖和侵袭能力,促进胰腺癌浸润与转移。

关键词：胰腺癌缺氧诱导因子1α 胰岛素微环境增殖侵袭

缺氧时间对胰腺癌PANC-1细胞株HIF-1αmRNA和蛋白表达的影响

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缺氧时间对胰腺癌PANC-1细胞株HIF-1αmRNA和蛋白表达的影响

作者：杨俊华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】观察缺氧条件下胰腺癌PANC-1细胞株缺氧诱导因子-1αmRNA和蛋白表达的变化。【方法】建立胰腺癌PANC-1细胞体外缺氧培养模型,胰腺癌PANC-1细胞分4组培养:正常培养对照组、低氧浓度培养24小时组、低氧浓度培养48小时组、低氧浓... 详细信息

【目的】观察缺氧条件下胰腺癌PANC-1细胞株缺氧诱导因子-1αmRNA和蛋白表达的变化。【方法】建立胰腺癌PANC-1细胞体外缺氧培养模型,胰腺癌PANC-1细胞分4组培养:正常培养对照组、低氧浓度培养24小时组、低氧浓度培养48小时组、低氧浓度培养72小时组。分别培养后收集细胞,观察缺氧条件下不同时点(24、48、72h)HIF-1的表达。应用半定量RT-PCR方法,检测胰腺癌PANC-1细胞中HIF-1αmRNA表达水平,应用Western- Blot方法,检测胰腺癌PANC-1细胞中HIF-1α蛋白表达水平。【结果】缺氧处理后,与常氧对照组相比,低氧浓度培养组各组的HIF-1α蛋白和mRNA表达均明显升高(P<0.01);与低氧浓度组比较,随缺氧时间的延长HIF-1α蛋白和mRNA表达水平亦相应增高,各组比较有显著性差异(P<0.01)。【结论】环境缺氧可诱导胰腺癌细胞HIF-1的表达上调,随缺氧时间的延长,HIF-1α在mRNA水平和蛋白水平表达亦相应的上调。

关键词：缺氧胰腺癌PANC-1细胞缺氧诱导因子-1α

TLR信号通路参与AHNP时肝损伤机制及生长抑素调控作用

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TLR信号通路参与AHNP时肝损伤机制及生长抑素调控作用

作者：张昭华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探讨TLR信号通路在急性出血坏死性胰腺炎组(AHNP组)肝损伤作用机制及生长抑素调控作用。方法:分二部分:第一部分:80只SD大鼠随机分成二组:假手术对照组(SO组):行开腹手术翻动肠管后关腹;AHNP组:胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(STC)... 详细信息

目的:探讨TLR信号通路在急性出血坏死性胰腺炎组(AHNP组)肝损伤作用机制及生长抑素调控作用。方法:分二部分:第一部分:80只SD大鼠随机分成二组:假手术对照组(SO组):行开腹手术翻动肠管后关腹;AHNP组:胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(STC)复制急性出血坏死性胰腺炎模型;第二部分:80只SD大鼠随机分成二组:AHNP组:胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(STC)复制急性出血坏死性胰腺炎模型;生长抑素治疗组:背部皮下注射奥曲肽生理盐水溶液,AHNP组注射等容积生理盐水。各组均于3,6,12 h活杀留取静脉血和肝标本待测,测定血清淀粉酶(Amy)、丙氨酸转氨酶(ALT)和肝组织中的肿瘤坏死因子(TNF-α)来反映胰腺炎肝脏炎症反应水平和肝脏损伤水平,RT-PCR检测肝组织中TLR2和TLR4 mRNA及免疫组织化学染色方法检测细胞核转录因子(NF-κB)的表达情况,并观察各组大鼠腹水量及24 h病死率。结果:与假手术组(0.020±0.005,0.024±0.004)比较,AHNP组大鼠3 h肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达开始增高(0.097±0.020,0.342±0.057),以后逐渐升高,于12 h达到高峰(0.628±0.146,1.033±0.172;P<0.05);肝组织中NF-κB于3 h开始表达增强,6 h达到高峰,同时肝损伤加重,肝组织TNF-α表达升高,血清中Amy和ALT浓度逐渐升高(P<0.05)。给予注射奥曲肽治疗后,TLR2和TLR4 mRNA表达降低(3 h:0.033±0.006,0.157±0.03;6 h:0.120±0.03,0.286±0.08;12 h:0.229±0.07,0.710±0.20;P<0.05);肝组织中NF-κB表达降低,同时肝损伤程度减轻,肝组织TNF-α水平降低,血清中Amy和ALT浓度逐渐降低(P<0.05)。此外,治疗组的腹水量和24 h病死率较AHNP组明显降低。结论: AHNP时肝脏中Toll受体和NF-κB表达增强,TLR信号通路参与AHNP时肝损伤过程;生长抑素对AHNP时肝损伤有显著的保护作用。其机制可能与其抑制胰弹性蛋白酶的分泌与激活,抑制TLR信号通路,降低炎症反应及损伤有关。

关键词：胰腺炎急性坏死性肝/病理学生长抑素受体 Toll NF-κB

PDX-1促进大鼠胰腺导管上皮细胞向胰岛细胞分化的体外实验研究

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PDX-1促进大鼠胰腺导管上皮细胞向胰岛细胞分化的体外实验研究

作者：禹峰华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分胰腺导管上皮细胞的原代、传代培养和转染目的完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养,成功转染PDX-1基因进入胰腺导管上皮细胞。方法用含有胶原酶V型的消化液对大鼠胰腺组织进行消化分离,接着用梯度离心法将导管上皮细胞分离... 详细信息

第一部分胰腺导管上皮细胞的原代、传代培养和转染目的完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养,成功转染PDX-1基因进入胰腺导管上皮细胞。方法用含有胶原酶V型的消化液对大鼠胰腺组织进行消化分离,接着用梯度离心法将导管上皮细胞分离纯化,在体外经RPMI1640及含10%胎牛血清(FBS)的培养液培养,在达到80%～90%的细胞汇合时,1∶2传代培养。传代3～5次后接种于6孔板中转染重组载体PDX-1(XlHbox8VP16),分转染组与非转染组。结果获得的原代培养细胞有上皮细胞的生长排列方式,可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞可传代培养到第3～5代不等。结论我们的原代培养和传代培养的方法能在体外培养出较纯的胰腺导管上皮细胞,并能进行成功转染PDX-1。第二部分体外转染PDX-1在胰腺导管上皮细胞分化中的作用及衍生胰岛细胞功能鉴定目的体外观察转染PDX-1对胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞的作用。方法对转染组与非转染组细胞进行培养,取各时间点细胞进行实验,实时定量RT-PCR检测细胞中PDX-1,胰岛素mRNA的表达。Western blotting检测细胞中PDX-1,胰岛素蛋白的表达。放射免疫法测定衍生胰岛细胞的分泌功能,双硫腙染色检测胰岛细胞。结果转染组与非转染组相比,转染的细胞中有XlHbox8 mRNA的表达,且PDX-1,胰岛素mRNA以及蛋白的表达也增加。生成的胰岛细胞数量及胰岛素分泌量明显增加(葡萄糖浓度5.6 mmol/L时胰岛素分泌量1.32±0.43 vs 3.48±0.81,葡萄糖浓度16.7 mmol/L时胰岛素分泌量4.86±1.15 vs 10.25±1.32),差异有显著性(P<0.01)。结论PDX-1能显著促进胰腺导管上皮细胞分化为胰岛细胞。用此法获得大量的胰岛可能为糖尿病治疗提供一条新的途径。

关键词：原代培养传代培养 PDX-1 胰腺导管上皮细胞胰岛分化 PDX-1

低浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞生长增殖影响相关性研究

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低浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞生长增殖影响相关性研究

作者：李祥生华中科技大学

学位级别：硕士

目的：研究不同浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞系生长增殖的影响和低浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞CD133+亚群的杀伤作用。方法：用低浓度二甲双胍（≤0.1mM）处理胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3），在12、24、36、48、60、72h分别用细胞... 详细信息

目的：研究不同浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞系生长增殖的影响和低浓度二甲双胍对胰腺腺癌细胞CD133+亚群的杀伤作用。方法：用低浓度二甲双胍（≤0.1mM）处理胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3），在12、24、36、48、60、72h分别用细胞计数法和CCK8法鉴定其增殖差异。同时联合吉西他滨，处理胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3），观察其协同作用。应用流式细胞术标记CD133+细胞，检测低浓度二甲双胍（≤0.1mM）对CD133+亚群细胞的增殖影响;绘制细胞生长曲线，按流式结果绘制CD133+亚群细胞生长曲线。加入AMPK通道抑制剂（Compound C）后对比其作用效果，探讨其作用机制。结果：高浓度二甲双胍（≥1mM）对胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3）杀伤作用明显（P＜0.01）;低浓度二甲双胍（≤0.01mM）对胰腺癌细胞生长抑制作用无明显统计学差异（P＞0.05），但能增加癌细胞对治疗剂量吉西他滨的敏感性，同时对CD133+亚群细胞杀伤作用有差异（P＜0.05）;加入AMPK通道抑制剂（Compound C）后其杀伤作用无明显变化（P＞0.05）。结论：二甲双胍对胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3）影响有最低药效浓度;低浓度二甲双胍（≤0.1mM）能增加胰腺腺癌细胞系（ASPC1,BxPc3）对吉西他滨的敏感性;低浓度二甲双胍（≤0.1mM）能选择作用于CD133+细胞亚群，抑制其增值。低浓度二甲双胍（≤0.1mM）其机理可能是对肿瘤干细胞的选择性杀伤但其作用机制于AMPK/mTOR通路相关性不明显。

关键词：二甲双胍胰腺癌 CD133 吉西他滨

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

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胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

作者：杨卫华华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分胰腺癌中p16蛋白的表达及其临床意义目的探讨p16蛋白与原发性胰腺癌发生及其临床病理学特征之间的关系。方法采用免疫组织化学技术检测46例胰腺癌组织及相应癌旁组织中p16蛋白表达状况,并结合临床参数进行分析。结果46例原... 详细信息

第一部分胰腺癌中p16蛋白的表达及其临床意义目的探讨p16蛋白与原发性胰腺癌发生及其临床病理学特征之间的关系。方法采用免疫组织化学技术检测46例胰腺癌组织及相应癌旁组织中p16蛋白表达状况,并结合临床参数进行分析。结果46例原发性胰腺癌的癌组织及癌旁组织p16蛋白阳性表达率分别为41.3%(19/46)和95.7%(44/46),两者相比有差异显著性(P0.05),而与分化程度、临床分期及转移相关(P0.05),但在组织分化程度、有无转移、TNM分期上有显著意义(P<0.05)。结论p16基因启动子异常甲基化改变可能影响p16蛋白的表达;p16甲基化、蛋白表达与胰腺癌的发生发展有密切相关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。

关键词：胰腺癌 p16基因蛋白表达甲基化甲基化特异性PCR

miR-548ac/Notch1信号通路在胰腺癌中的作用研究

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miR-548ac/Notch1信号通路在胰腺癌中的作用研究

作者：陈经远华中科技大学

学位级别：硕士

背景和目的胰腺癌目前仍是人类恶性程度最高的癌症之一,由于缺乏有效的早期诊断手段,大多病例被发现时已是晚期。传统手术及化疗等手段对胰腺癌的治疗没有重大进展。因而迫切需要明确胰腺癌的发病机机制。Micro RNAs已经被广泛证明调控... 详细信息

背景和目的胰腺癌目前仍是人类恶性程度最高的癌症之一,由于缺乏有效的早期诊断手段,大多病例被发现时已是晚期。传统手术及化疗等手段对胰腺癌的治疗没有重大进展。因而迫切需要明确胰腺癌的发病机机制。Micro RNAs已经被广泛证明调控多种肿瘤的生物学事件,包括胰腺癌。Mi R-548ac属于mi R-548家族,该家族被报道参与肿瘤的发生发展,但具体的机制仍不清楚。mi R-548ac在胰腺癌中未曾被研究,其在胰腺癌中的作用尚不明确。因此,本研究主要探讨mi R-548ac在胰腺癌中的作用,并进一步研究其可能的调控机制。实验方法采集在2012年7月至2015年2月期间在武汉协和医院胰腺外科行手术治疗的50例胰腺癌患者病例及组织标本(其中男性患者24例,女性患者26例)。通过q RT-PCR检测胰腺癌组织中mi R-548ac及Notch1的相对表达量,进一步分析这两者之间的相关性。构建双荧光素酶报告基因载体,共转染mi R-548ac的类似物,观察胰腺癌细胞系中mi R-548ac对Notch1直接作用关系。细胞转染使用脂质体2000作为载体,将mi R-548ac类似物转染至PANC-1和Bx PC-3细胞中。运用实时荧光定量PCR检测mi R-548ac的表达,分析转染效率。Western blot检测Notch1蛋白水平的变化。通过MTT法检测胰腺癌细胞在活体外的增殖。皮下种植瘤模型观察胰腺癌细胞的成瘤能力。细胞的侵袭能力的检测采用Transwell实验法。结果q RT-PCR检测发现mi R-548ac在50例胰腺癌组织和4个胰腺癌细胞系中表达明显低于癌周正常胰腺组织或正常胰腺导管上皮细胞。mi R-548ac的表达下调与肿瘤体积、临床分期、淋巴结侵袭和远处转移呈正相关。胰腺癌细胞行为学研究显示增加mi R-548ac的表达能明显抑制胰腺癌细胞的增殖,减弱胰腺癌细胞裸鼠体内成瘤能力。同时,mi R-548ac能明显抑制胰腺癌细胞的迁徙和侵袭。双荧光素酶报告实验显示mi R-548ac mimics能明显降低Notch1的野生型3’UTR的荧光素酶活性,说明mi R-548ac与Notch1 m RNA的3’UTR能够直接相作用。Notch1在胰腺癌组织中高表达,且这种高表达同mi R-548ac在胰腺癌中的低表达呈负相关性。胰腺癌细胞上调mi R-548ac的表达,能够降低Notch1在m RNA和蛋白的表达水平,显示mi R-548ac靶向调控Notch1。进一步干扰Notch1的表达,胰腺癌细胞呈现与mi R-548ac过表达相同的结果。结论mi R-548ac胰腺癌细胞内靶向调控Notch1的表达。mi R-548ac/Notch1通路能够抑制胰腺癌细胞的增殖、成瘤能力、侵袭转移,在胰腺癌细胞中的发挥抑癌作用。靶向调控mi R-548ac/Notch1通路表达可成为胰腺癌诊断与治疗的新靶点。

关键词： miR-548ac 胰腺癌 Notch1

吉西他滨联合槐耳颗粒治疗胰腺癌的临床及实验研究

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吉西他滨联合槐耳颗粒治疗胰腺癌的临床及实验研究

作者：许州华中科技大学

学位级别：硕士

一、槐耳清膏对人胰腺癌细胞Panc-1生长及凋亡影响的实验研究目的:探讨槐耳清膏(Extract of Fungi of Huai’er,EFH)在体外对人胰腺癌细胞Panc-1的生长抑制作用及凋亡诱导作用。方法:不同浓度梯度的槐耳清膏与人胰腺癌细胞Panc-1共同... 详细信息

一、槐耳清膏对人胰腺癌细胞Panc-1生长及凋亡影响的实验研究目的:探讨槐耳清膏(Extract of Fungi of Huai’er,EFH)在体外对人胰腺癌细胞Panc-1的生长抑制作用及凋亡诱导作用。方法:不同浓度梯度的槐耳清膏与人胰腺癌细胞Panc-1共同培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察人胰腺癌细胞Panc-1生长抑制情况,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测人胰腺癌细胞Panc-1凋亡发生情况。结果:槐耳清膏对人胰腺癌细胞Panc-1的抑制率随浓度增加而上升,呈一定的剂量依赖性,浓度为3mg/ml时抑制率最大(17.7%)。人胰腺癌细胞Panc-1的凋亡率随着槐耳清膏浓度的增加而增高,当浓度达到3mg/ml时,凋亡率最高为(13.17±1.20)%,且高于6mg/ml组(11.21±0.87)%,差异有显著性(P0.05);第6月时GEM+槐耳组显著高于GEM组(P0.05)。切除者中,a、b、c三组间的复发转移率未见显著差异(P>0.05)。GEM化疗与GEM化疗+槐耳综合治疗在病人1年生存率上的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GEM化疗联合槐耳治疗,在改胰腺癌客观缓解率、复发转移及生存时间方面无统计学证据,但对化疗血液系统反应、免疫功能及生存质量等方面有显著疗效。

关键词：胰腺癌槐耳清膏生长凋亡吉西他滨槐耳颗粒治疗预后

补体C5抑制剂对实验性急性出血坏死性胰腺炎大鼠肾损害的治疗作用

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补体C5抑制剂对实验性急性出血坏死性胰腺炎大鼠肾损害的治疗作用

作者：彭涛华中科技大学

学位级别：硕士

目的:评价补体C5抑制剂对实验性急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肾损害的治疗作用。方法: Wistar大鼠42只,随机分为3组:正常对照组(HC组, n=6);AP造模组(AP组,n=18);AP造模+C5抑制剂组(AP-C5-I组,n=18)。以5 %牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱... 详细信息

目的:评价补体C5抑制剂对实验性急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肾损害的治疗作用。方法: Wistar大鼠42只,随机分为3组:正常对照组(HC组, n=6);AP造模组(AP组,n=18);AP造模+C5抑制剂组(AP-C5-I组,n=18)。以5 %牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发AP模型建立AP组;造模后即向大鼠向下腔静脉注射C5抑制剂(2.0 mg/kg)建立AP-C5-I组;HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物。分别在6h、12h、18三个时间点处死AP组、AP-C5-I组各6只。分别测定其血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),血清IL-1β、C5a水平;采用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(realtime RT-PCR)方法测定各组大鼠肾组织中肾内C5、IL-1β、TNF-α和IL-10mRNA表达情况以及肾组织髓过氧化物酶(MPO)活性;对各组大鼠胰腺及肾组织病理形态学改变进行观察和组织学评分。结果:AP组血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、IL-1β、C5a水平显著升高( P 0. 05)。C5抑制剂治疗对肾脏病理改变影响不明显。肾组织IL-10mRNA水平于建模后先升后降,AP组和AP-C5-I组建模后各时点均显著高于HC组(p﹤0.05),AP-C5-I组于建模后6h和12h较AP组有显著统计学差异(p﹤0.05)。结论:(1)胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立Wistar大鼠AHNP并发肾损害模型,是一种较理想的动物模型制备方法。(2)AHNP大鼠血清IL-1β升高、肾组织IL-1β、TNF-αmRNA表达明显增强和IL-10mRNA表达明显减弱,IL-1β、TNF-α、IL-10共同参与了AHNP中肾损害的发生、发展。(3)AHNP大鼠全身及肾组织促抗炎细胞因子严重失衡可能是导致肾损害的原因。(4)补体系统的异常激活在AHNP大鼠肾组织促抗炎细胞因子失衡起了重要作用。(5)补体C5抑制剂能够阻断补体系统的激活,从而部分恢复促抗炎细胞因子平衡,对AHNP大鼠早期肾损害具有部分保护作用。

关键词：急性出血坏死性胰腺炎肾损害补体抑制剂实时荧光定量逆转录多聚酶链反应白细胞介素-1 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-10