检索结果-南通市图书馆

作者：童国军南方医科大学

学位级别：硕士

背景:甲状旁腺素(Parathyroid Hormone,PTH)是一种促进骨形成的激素类药物。前期研究显示,PTH通过nonPLC/PKC信号途径提升松质骨骨量,改善骨小梁的微结构,研究nonPLC/PKC的信号分子和途径以及骨代谢作用,有利于设计出更好的nonPLC/PKC... 详细信息

背景:甲状旁腺素(Parathyroid Hormone,PTH)是一种促进骨形成的激素类药物。前期研究显示,PTH通过nonPLC/PKC信号途径提升松质骨骨量,改善骨小梁的微结构,研究nonPLC/PKC的信号分子和途径以及骨代谢作用,有利于设计出更好的nonPLC/PKC模拟肽,提高药物的效能,扩大应用范围。前期研究发现该通路可以分成cAMP/PKA依赖途径和非依赖途径,但是该通路的生物学功能尚不清楚。目的:通过现存的PTH模拟肽验证cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路是否对甲状旁腺素在成骨细胞的增殖、凋亡和成骨分化中的起作用;通过前期合成的cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号特异性模拟肽MY-1肽和MY-2肽,验证其信号通路是否为cAMP非依赖和PLC非依赖途径,并验证模拟肽的抗凋亡作用,体外细胞成骨分化和破骨分化效应;建立卵巢切除的小鼠骨质疏松模型,评价模拟肽MY-1和MY-2的抗骨质疏松作用。方法:取MC3T3E1细胞,低浓度血清处理12小时后,模拟肽间断刺激6小时后用MTT观察细胞的增殖情况,细胞饥饿处理12小时后,模拟肽处理4小时后流式细胞观察模拟肽的抗凋亡效果,成骨诱导分化14天观察碱性磷酸酶染色和酶活性检测,28天后观察钙结节的茜素红染色和钙定量;取小鼠原代颅骨细胞,行ELISA检测MY-1肽和MY-2肽的cAMP和PLC信号通路,并同时行细胞流式凋亡实验,取6周龄的C57BL小鼠的全骨髓细胞,行成骨分化培养和破骨分化培养;取6周龄的C57BL雌鼠,构建卵巢切除的骨质疏松模型,皮下注射PTH模拟肽,分别在4周和8周后处死小鼠,并行胫骨骨小梁结构显微CT分析。结果:对于cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路,可以促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,促进成骨细胞的分化;对于cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号通路,信号通路检测发现MY-1肽和MY-2肽都不能显著激活cAMP和PLC通路,MY-1和MY-2具有良好的抗凋亡效果,在间断刺激培养中,MY-1肽和MY-2肽可以显著促进细胞成骨分化,并表现出低破骨分化的特性,连续刺激同样表现出成骨分化作用和低破骨的特性;使用卵巢切除的小鼠模型,我们发现卵巢切除组的骨量较假手术组显著降低,注射MY-1肽和MY-2肽的单位骨量4周和8周组较卵巢切除组显著升高,表现出良好的抗骨质疏松效果。结论:cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路具有促进成骨细胞增殖、促进成骨细胞分化和抑制成骨细胞凋亡的作用;cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号模拟肽MY-1和MY-2体外细胞间断和连续诱导都表现出促进成骨和低破骨分化的特性,并具有良好的抗凋亡作用;动物研究显示MY-1肽和MY-2肽具有良好的抗骨质疏松的作用。

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甲状旁腺激素PTH（1-34）对小鼠肺癌骨转移瘤生长的影响

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作者：李春雨南方医科大学

学位级别：硕士

背景：骨转移癌是晚期肿瘤常见的并发症之一。临床上以肺癌、乳腺癌、前列腺癌、等实体瘤最易出现骨转移,占肿瘤骨转移的85%[1]。原发性肺癌骨转移占晚期肺癌患者的30-40%[21,主要分布在肋骨、脊柱、骨盆以及四肢骨等部位。绝大部... 详细信息

背景：骨转移癌是晚期肿瘤常见的并发症之一。临床上以肺癌、乳腺癌、前列腺癌、等实体瘤最易出现骨转移,占肿瘤骨转移的85%[1]。原发性肺癌骨转移占晚期肺癌患者的30-40%[21,主要分布在肋骨、脊柱、骨盆以及四肢骨等部位。绝大部分为溶骨性破坏,少数呈成骨性破坏。由于骨质和骨膜破坏,常造成局部疼痛,骨和关节运动障碍,病理性骨折,高钙血症,从而使患者生存期的生活质量明显下降,原发性肺癌骨转移患者的中位生存时间约为8-10个月[3]。目前在于骨转移癌病人的治疗上面仍无显著有效的方案,多采用综合治疗方法,包括全身性化疗、局部放射、内分泌治疗及放射性同位素等,均是针对肿瘤细胞的作用。而对骨质起作用药物甚少的,仅有双麟酸盐用于抑制破骨细胞而起到治疗作用,有学者研究双磷酸盐能抑制破骨细胞,干预肿瘤细胞对骨的侵犯,减轻肿瘤引起的骨损伤[4]。目前用于促骨形成药物PTH（1-34）具有良好的促骨形成作用,同时能改变骨微结构。是否可以利用其促骨形成作用而延缓骨转移癌对骨破坏,从而延缓病理性骨折的发生呢? 甲状旁腺激素（Parathyroid Hormone, PTH）是一种促骨形成药物[5],2002年美国FDA批准上市,2010年PTH（1-34）批准进入中国。已经有大量研究表明间断小剂量注射PTH（1-34）可明显增加骨密度、改善骨微结构、降低骨折风险[6,7]。目前PTH（1-34）已经广泛应用于临床,主要用来治疗骨质疏松症[8,9]。天然的PTH由84个氨基酸构成（PTH（1-84））,与I型PTH受体（PTHR1）结合,N端的34个氨基酸残基（PTH（1-34））具有与PTH（1-84）相同的PTHR1结合和激活功能。研究表明PTH调节成骨细胞的生成、转化、增殖或凋亡等各个环节[10],对破骨细胞的作用是通过对成骨细胞的影响而间接达到的,其效应受体是成骨细胞表面的Ⅰ型PTH受体（PTHR1）[11],从而激活PTHR1及其下游的多个信号途径而实现对骨的调节。因此能否将PTH（1-34）应用于骨转移癌病人,利用PTH（1-34）的促骨形成及对骨结构的重建的作用,延缓病理性骨折发生,甚至延长病人生存时间,成为我们实验的初步思路,而实现这个思路,建立一种动物模型是我们试验的基础。动物模型的制备是肿瘤骨转移的基础,而骨转移癌的动物模型,常用已建立的人/动物肿瘤细胞株种植于免疫缺陷动物体内而建立的。小鼠是公认的药物检验最佳动物选择,目前关于小鼠骨转移模型成熟,从其制作方法常分为三种：第一种通过血流播散制作的肿瘤骨转移模型1、静脉注射法：静脉注射法与临床上骨转移产生机制不符,以前很少使用。但最近Teresa等[12]报道,将MDA-MB-231细胞株在裸鼠体内连续多次传代后,筛选出多株不同细胞克隆,给这些细胞克隆转染荧光素酶报告基因,通过活体成像技术发现,B02克隆株与其它细胞克隆不同,该细胞株具有快速形成溶骨型骨转移的能力。实验发现将B02通过小鼠尾静脉注射后,10天即可形成明显的骨转移。2、心脏注射法：左心室注射法产生的骨转移模型与肿瘤患者骨转移灶无论在生长状况还是形态学上都非常相似,是目前最常用的方法之一。该模型不仅有许多优点,还符合Paget提出的“种子与土壤学说”:肿瘤细胞充当“种子”,骨髓腔微环境充当“土壤”。支持该学说的证据有：肿瘤细胞经左心室注射后,一些细胞在骨微环境中选择性生长进而形成骨转移瘤;抑制溶骨反应可以抑制转移肿瘤的生长。利用该方法制备的模型的缺点是引起脑、肺、肾上腺皮质等的多发性转移,还可造成某些实验鼠骨转移尚未出现而因其它的转移灶致死。第二种方法,局部骨内注射制作骨转移模型,该法将针尖直接刺透骨皮质,将移植肿瘤细胞注入胫骨或股骨的骨干。具有致瘤率高、制作方法简单、不受脏器转移影响等优点。缺点是造成了骨皮质和骨髓腔的损伤,且所制作的模型主要为骨干转移,与临床上常见的骨骺端转移不同。骨内注射方法常被用来制作成骨性或成骨/溶骨混合性骨转移模型[13]。为研究骨转移发生机制和药物疗效提供了一个极具价值的模型工具。第三种方法,肿瘤原位移植模型,原位移植是指将癌细胞或组织块种植于小鼠胸壁的乳腺脂肪垫内或前列腺组织从而发生骨转移。用该方法形成的骨转移模型保留了从肿瘤原发灶到骨转移的完整过程,但该复制方法也存在缺点,即与上述介绍的血流播散、骨内注射等方法相比,骨转移的发生率偏低,且伴有其他脏器的转移。因此若从成瘤高,瘤体容易观察,不易受器官转移影响方面考量,那么第二种动物模型制备的方法适合应用。本研究在上述背景下,选择建立小鼠肺癌骨转移模型,并在此模型上间歇性小剂量皮下注射PTH（1-34）,通过观察小鼠全身X线、显微CT、骨组织病理切片、血清ALP等指标,初步观察PTH（1-34）对小鼠

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非PLC依赖PKC通路特异性甲状旁腺素模拟肽的建立及其对骨代谢作用的初步研究

非PLC依赖PKC通路特异性甲状旁腺素模拟肽的建立及其对骨代谢作用...

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作者：郝松南方医科大学

学位级别：硕士

背景：甲状旁腺素(PTH)是目前应用于临床的唯一促骨形成药物,它可以有效增加骨量,治疗骨质疏松及骨质疏松性骨折、关节假体松动及长期使用二磷酸盐引起的非典型骨折等。2002年美国FDA批准低剂量PTH间断性皮下注射用以治疗骨质疏松,2010... 详细信息

背景：甲状旁腺素(PTH)是目前应用于临床的唯一促骨形成药物,它可以有效增加骨量,治疗骨质疏松及骨质疏松性骨折、关节假体松动及长期使用二磷酸盐引起的非典型骨折等。2002年美国FDA批准低剂量PTH间断性皮下注射用以治疗骨质疏松,2010年PTH被批准进入中国,治疗绝经后的重度骨质疏松。随着中国人口老龄化问题的日益严重,以及人们对于预防骨质疏松的意识尚浅薄等原因,骨质疏松症愈来愈成为困扰中老年人的疾病之一。骨质疏松症是一种以骨量减少及骨组织显微结构退化为特征,导致骨脆性增加及骨折危险性增加的一种全身代谢性骨病,目前骨质疏松症的治疗药物种类很多,其适用范围和作用机制也各不相同。国内的治疗主要以抗骨质吸收类药物为主,包括二膦酸盐类、降钙素、雌激素及选择性雌激素受体调节剂等,辅以促进骨矿化的钙剂、维生素D及其活性代谢物等,其对于骨质疏松症的治疗效果有限。PTH作为一种骨形成促进剂,研究证明其对骨密度提高的程度优于既往抗骨吸收类药物,对减少骨质疏松性骨折的作用也更为突出。但是,PTH在临床上的应用也受到诸多限制,如价格高,疗程长(2年),高剂量、持续应用会促进骨吸收(不能复合到内植入物以促进骨融合),可能存在致癌的风险,长期使用还存在疗效降低的可能性等,因此优化PTH,促进疗效,缩短使用时间,避免其副作用,是目前PTH领域研究的重要方向之一。人体中天然的PTH由84个氨基酸构成[PTH(1-84)],与Ⅰ型PTH受体(PTHR1)结合后激活PTHR1及其下游的多个信号途径,参与骨组织代谢的过程。主要的信号通路有：(1) Gs/cAMP/PKA信号转导通路,目前认为是PTH作用于骨组织的主要机制。(2) PLC/PKC通路。(3)非PLC依赖PKC激活途径(PTH/nonPLC/PKC)。(4) β-arrestin通路等。目前认为,PTHR1受体至少通过两种途径激活PKC,其一为激活质膜上的PLC,进而激活PKC;另一途径为不依赖PLC的PKC激活途径(nonPLC/PKC),即不激活PLC而通过其他分子介导机制激活PKC,具体信号特征并不清楚,其信号转导机制及调节骨代谢功能的研究是时下PTH研究领域的热点之一。PTH激活不同的信号通路与其自身的多肽结构密不可分,任何氨基酸的突变及构象的改变都有可能导致某些信号通路激活能力的缺失。研究证实,改变PTH的氨基酸序列能改变PTH的信号转导特征,如PTH(1-34)片段中,1-3位的氨基酸决定PTH的cAMP/PKA和PLC信号通路的激活功能;Ser1变成Gly1可使得PTH(1-34)失去激活PLC的能力;第19位氨基酸Glu19变成Arg19能够补偿29-34氨基酸残基缺失引起的受体结合力减弱;Leu24,Leu28,va131突变成Glu后,PTH(5-34)不与受体结合Aib1,3,Nle8,21,Gln10,Har11,Ala12,Trp14,Arg19构成的组合突变亦称M突变,M突变可使PTH(1-34)的cAMP合成能力提高约40倍,PLC的激活能力提高66倍,与PTHR的结合力提高约10倍;在PTH(1-34)中,Ile5,Glul9,Val21等位点的突变严重干扰PTH(1-34)与受体的结合力：PTH(1-34)第1、3位氨基酸突变成氨基异丁酸(Aib)后促进与PTHR的结合和cAMP的形成。根据以上模拟肽结构的研究基础,我们拟通过氨基酸突变的方法来达到基本不影响PTH肽与受体结合能力,屏蔽cAMP/PKA和PLC激活能力的目的,设计nonPLC/PKC通路特异性PTH模拟肽的序列。我们的前期研究也表明,Gly1Arg19hPTH(1-28) (GR(1-28)和Gly1Arg19hPTH(1-34) (GR(1-34))均失去了激活PLC的能力,但GR(1-34)仍可激活PKC,而GR(1-28)却没有这样的作用,即PTH可以通过nonPLC/PKC通路激活PKC,且功能区域是PTH(29-34)片段。通过C57BL小鼠皮下注射观察发现,GR(1-34)显著增加骨量,尤其是受力的松质骨区域,显著强于GR(1-28)的作用,尽管后者具有与前者相同的cAMP激活特性,提示PTH作用下nonPLC/PKC通路的激活能够促进受力区松质骨合成,改善骨小梁微结构,促进新骨的形成。近期我们发现GR(1-34)具有比PTH(1-34)和GR(1-28)更强的促进脊柱融合的作用,具有一定通路选择性的PTH模拟肽具有较PTH更好的促骨形成作用和改善骨微结构的功能。但是nonPLC/PKC通路的具体信号介导分子仍不清楚,其对于骨代谢的作用机制仍需要深入研究。因此我们拟设计和筛选nonPLC/PKC信号通路选择性PTH模拟肽,并分析该通路特有的下游效应分子,进一步探讨PTH通过nonPLC/P

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信号选择性甲状旁腺素模拟肽影响去势雄性小鼠骨折愈合的实验研究

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作者：袁亮南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景骨质疏松症,顾名思义是骨质多孔,以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的,骨密度和骨量降低,致使骨的脆性增加,骨折危险性增加的一种全身性骨骼疾病。骨质疏松症主要分为原发性骨质疏松症和继发性骨质疏松症两大类。据流行病学... 详细信息

研究背景骨质疏松症,顾名思义是骨质多孔,以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的,骨密度和骨量降低,致使骨的脆性增加,骨折危险性增加的一种全身性骨骼疾病。骨质疏松症主要分为原发性骨质疏松症和继发性骨质疏松症两大类。据流行病学调查估计,欧美国家和日本约有7500万人患骨质疏松症,患病人数还在不断的增加。美国骨质疏松杂志基金会调查结果显示,依据WHO的诊断标准,绝经后白人女性分别有54%和30%患骨量减少和骨质疏松,大于50岁男性有3%-6%患骨质疏松。据WHO预测,至2050年亚洲65岁以上老年人将达9亿,每年将有320万髋部骨折患者,其中主要原因为骨量减少和骨质疏松。随着我国人口的老龄化,骨质疏松症现在也成为公共健康最严重的问题之一。据我国九五攻关课题调研结果发现：中国人群骨质疏松患病率为22.6%,骨量减少患病率为13.3%。骨质疏松症的严重后果是骨折以及骨折后并发症所致的残疾和死亡,不仅给患者带来痛苦,同时给社会和家庭带来沉重的负担。治疗骨质疏松的基本方法包括基础治疗和药物治疗。其中,基础治疗包括饮食调节、钙剂和维生素D等。药物治疗以促骨形成、抑制骨吸收为基本原则。目前运用于临床的抗骨吸收的药物有如雌激素、二磷酸盐、降钙素、活性维生素D衍生物等。促骨形成药物如氟化物、雄性激素及其衍生物、生长激素、锶盐、PTH片段等。增加骨量促骨形成的代谢药物中,目前仅有甲状旁腺素(Parathyroid Hormone, PTH)获得一致认可(尽管锶盐被认为有一定的促骨形成作用,但需要更多的研究证实)。甲状旁腺激素(PTH)是体内重要的钙稳态调节剂。PTH(1-34)是天然PTH(1-84)的短肽形式,具有相同的结合能力和相同的电位,激活Ⅰ型的PTH受体(PTHR1)。PTH (1-34)已在美国上市治疗骨质疏松,并于2011年10月正式在我国投入临床使用。临床随访观察其具有可靠的抗骨质疏松作用,但仍未达到理想的效果。重要的原因之一是：PTH对骨组织的作用是双向的,即间断小剂量促进骨形成,连续大剂量促进骨吸收。PTH可以调节成骨细胞的生成、转化、增殖或凋亡等各个环节,也促进破骨细胞的骨吸收功能。现认为,PTH对骨组织的作用主要通过与成骨系细胞表面的Ⅰ型PTH受体(PTHR1)结合,对破骨细胞的作用是通过对成骨细胞的影响而间接达到的。PTH影响骨形成和骨吸收功能与其PTHR1引起的多个信号途径有关。与PTHR1结合后,G蛋白偶联的cAMP/PKA信号级联反应被触发,其中包括cAMP/PKA, PLC/PKC和PLC-independent/PKC通道,每条通道都对应至PTH(1-34)的氨基酸序列的关键性区域。其中1位丝氨酸对于PLC的激活是至关重要的,N末端开始的3个氨基酸是cAMP/PKA活化所必须的。我们以前的研究证实,PTH(29-34)对于PLC-independent/PKC信号通路非常重要。随着对PTH(1-34)信号通路的认识加深,我们设计出[Glyl, Arg19]hPTH(1-34)是一个模拟PTH缺乏激活PLC信号通路的模拟肽,第1位丝氨酸(Serl)突变成甘氨酸(Glyl)大幅度失去激活PLC信号的特性。19位谷氨酸突变成精氨酸(Arg19)可以补偿29-34氨基酸残基缺失引起的受体结合力的减弱。该结论已经通过前期的实验证实,间断小剂量注射PTH及其改建缺陷模拟肽能增加胫骨平台下方骨小梁数量和大小,增加全身骨密度。PTH(1-34)促进骨折愈合的作用已在多篇动物实验研究中报道,如间歇性注射PTH(1-34)可提高骨痂的骨密度和骨形成,促进骨折愈合,增加全身骨密度,影响血清成骨标志物形成。尚无文献报道PTH模拟肽作用于骨折愈合的研究。雄激素在生物体内存在广泛的生理作用,尤其是在雄性生殖器官的发育、性成熟和生精功能的维持等方面。其中,雄激素的主要成分为睾酮。有研究报道睾酮对于人的骨骼生长、发育具有重要影响,但随着年龄的增加,人体内睾酮的浓度逐渐降低,低水平睾酮浓度的老年男性容易导致骨转换加快以及增加骨折发生的风险。低睾酮水平的骨微结构变化及其骨折愈合的情况,以前相关的研究十分有限。去睾丸动物骨折后,运用信号选择性甲状旁腺激素模拟肽进行干预,观察骨折愈合的情况,将有利于了解PTH信号通路对于骨折愈合的影响,探讨新药的设计及运用。研究目的1、通过建立雄性小鼠睾丸摘除去势模型,分析研究小鼠去睾丸后血清雄激素水平变化以及小鼠骨量和骨显微结构变化。在此基础上建立股骨骨折模型,观察去势组与对照组之间骨折愈合情况。2、观察甲状旁腺素(PTH)信号选择性模拟肽对去势雄鼠骨折的作用,比较具有不同信号转导通路激活特性的PTH模拟肽对骨折愈合的影响,为PTH促进骨折愈合理论研究和新型

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应用酵母双杂交系统筛选与CITED1相互作用蛋白

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作者：林振南方医科大学

学位级别：硕士

背景：骨质疏松症(OP)是一种以骨量减少,骨微结构破坏,从而导致骨脆性增加,容易发生骨折为特征的全身性骨病(世界卫生组织,WHO)。2001年美国国立卫生研究院(NIH)提出：骨质疏松症是以骨强度降低、骨折风险性增高为特征的骨骼系统疾病,... 详细信息

背景：骨质疏松症(OP)是一种以骨量减少,骨微结构破坏,从而导致骨脆性增加,容易发生骨折为特征的全身性骨病(世界卫生组织,WHO)。2001年美国国立卫生研究院(NIH)提出：骨质疏松症是以骨强度降低、骨折风险性增高为特征的骨骼系统疾病,主要强调骨强度包括两个方面：骨密度和骨质量。一项美国研究显示,在美国,50岁以上的女性和男性,患有骨质疏松的人数,分别达到8,000,000和2,000,000。到2020年,患骨质疏松的人数估计将会达到14,000,000。2005,因骨质疏松造成的直接经济损失高达$13,700,000,000到$20,300,000,000。预计到2025年,损失将高达$25,300,000,000。我国的骨质疏松流行病学调查发现,40岁以上的骨质疏松患病率为16.1%,随年龄增加,骨质疏松发病率逐步增高,60岁以上人群为22.6%,超过80岁时超过50%人群患病。随着全球人口的逐步老龄化,骨质疏松疾病及其相关并发症已成为一个较大的社会问题,严重影响高龄人群的健康和寿命。目前,临床上用于治疗骨质疏松症的药物主要包括：骨吸收抑制剂、骨形成促进剂和增加骨矿化药物以及中医药物等。钙剂和维生素D制剂是抗骨质疏松的基础药物,双膦酸盐、降钙素、雌激素和雌激素受体调节剂属于骨吸收抑制剂,甲状旁腺素相关制剂是骨形成促进剂。PTH作为一类重要的抗骨质疏松药物,可通过促进骨的合成代谢,显著增加骨量。但是PTH的作用机理复杂,小剂量间断使用可以促进骨形成,而大剂量连续使用则会促进骨吸收,因此,如何降低其骨吸收作用,最大限度的发挥其促骨形成的作用是当前研究的热点。前期研究证实,PTH可以显著促进共转录因子CITED1(Cbp/p300-interacting transactivator with Glutamic Acid/Aspartic Acid-rich carboxy-terminal domain-1)的表达,并呈时间剂量依赖的关系。进一步研究提示,CITED1可抑制成骨细胞钙化,信号通路研究表明,PTH通过cAMP/PKA信号通路促进其表达,而CITED1也可以通过cAMP/PKA信号通路对PTH起负反馈调节作用。通过该实验证明,CITED1参与调节PTH的成骨效应,并有作为PTH佐剂治疗骨质疏松的潜力。但是,CITED1相关研究较少,其本身的作用机理,及其对PTH的调节方式和调节机理还不明确。本实验通过酵母双杂交技术筛选与共转录因子CITED1相互作用的蛋白,进而研究CITED1在骨代谢中的作用。一方面,发现CITED1相互作用蛋白,有助于CITED1作用机制的研究;另一方面,CITED1主要受cAMP/PKA信号通路影响,对PTH/cAMP/PKA信号通路起负反馈调节作用,如果可以筛到CITED1的拮抗肽,可以作为PTH的佐剂,优化PTH的成骨作用。 CITED1,原称MSG1(黑素细胞特异基因,melanocyte-specific genel)属于转录共激活因子家族,最初在小鼠黑色素瘤细胞株中发现,并参与黑色素生成。CITED1结合CBP/P300,与Smad4作用,促进SMAD介导的转录活性,热休克蛋白HSP70可竞争性的与CITED1结合抑制该过程CITED1还可与雌激素alpha和beta受体结合,促进雌激素诱导的转录激活。CITED1的共转录功能受细胞的增殖周期影响,受色氨酸磷酸化机制调控。 CITED1的研究目前主要在甲状腺癌、黑色素瘤、肾的发育、乳腺的发育等方向上。我们的前期实验显示,CITED1在成骨细胞中表达,PTH间断使用促进其表达水平。成骨细胞在CITED1敲除后增值能力没有改变但体外分化成骨能力增强。CITED1基因敲除的成骨细胞可以表达相对于野生型成骨细胞较高的骨标志基因。G1R19(1-28)是cAMP/PKA信号通路的选择性PTH模拟物,它促进成骨细胞分化的能力在CITED1敲除后明显增强了。进一步体内试验结果显示CITED1KO小鼠在5周龄时具有较高的骨密度,到12周龄时,骨密度较低。上述显示了CITED1具有调节骨组织代谢的作用。酵母双杂交系统的基础是真核生物调控转录起始过程,参与转录调控的转录激活因子在结构上是组件式的,由两个或两个以上相对独立的结构域组成：DNA结合结构域(binding domain, BD)和转录活化结构域(activition domain,AD)。两结构域相互作用产生空间联系是转录激活的关键,而两者单独作用则无法激活转录过程。分别将需要研究的猎物(prey)蛋白的基因与编码AD的基因序列结合,诱饵(bait)蛋白的基因则与编码BD的基因序列结合,形成两段融合基因。当两段融合基因通过载体质粒转入同一酵母细胞表达时,分别生成融合蛋白prey

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腰椎间盘突出伴马尾神经综合症延迟手术后神经功能的随访分析

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作者：赖勋维南方医科大学

学位级别：硕士

一、研究背景:腰椎间盘突出伴马尾神经综合症(Cauda equina symdrome caused by Lumbar disc protrusion,CES-LDP)是一种少见的,由各种原因引起马尾神经严重受压致神经功能受损的一种疾病。目前提倡早期甚至急诊手术减压,及时解除神经压... 详细信息

一、研究背景:腰椎间盘突出伴马尾神经综合症(Cauda equina symdrome caused by Lumbar disc protrusion,CES-LDP)是一种少见的,由各种原因引起马尾神经严重受压致神经功能受损的一种疾病。目前提倡早期甚至急诊手术减压,及时解除神经压迫,能防止持续性神经功能受损,保留神经功能恢复潜能,以期达到神经功能恢复。但目前关于该类患者延迟手术减压(延迟周以上)的神经功能恢复状况及长期随访结果,鲜有文献报道。临床实践中,由于经济、就医意识、社区医疗对该疾病意识缺乏,延迟手术情况时有发生。二、研究目的:探讨腰椎间盘突出伴马尾神经综合症患者接受延迟手术减压疗效及其神经功能恢复的长期随访结果。三、研究方法:回顾性分析35例有完整临床病历资料的腰椎间盘突出伴马尾神经综合症患者;如符合:1)充盈性尿失禁需尿管支持、2)大便失禁、3)勃起功能丧失、4)鞍区感觉消失中一项以上,为完全性马尾神经综合症组,部分丧失以上四项功能,则为不完全性马尾神经综合症组;随访着重关注患者术前及术后膀胱排空功能、排便功能、性功能及鞍区感觉改变并作术前术后对比。四、研究结果:35例患者中,完全性马尾神经综合症患者平均延迟手术减压时间为4.1±3.9周,不完全性马尾神经综合症患者平均延迟减压时间为5.5±7.6周;平均随访时间为43.0±28.9个月(3-110个月)。23例不完全性马尾神经综合症患者,19例完全恢复,4例存在轻微的鞍区或下肢感觉功能改变。12例完全性马尾神经综合症患者,2例患者完全恢复,4例患者存在轻微鞍区或下肢感觉障碍且其中2例存在偶发便秘,其余6例患者存在不同程度的鞍区感觉障碍、排尿及排便功能障碍。6例患者术前及术后有完整尿动力学结果,随访尿动力学提示排尿时腹压明显上升,残余尿量较术前明显减少,4例患者初次排尿感觉时膀胱容量恢复正常。五、研究结论:对接受延迟手术的腰椎间盘突出伴马尾神经综合症患者,长期随访结果显示多数患者预后良好,神经功能均有不同程度恢复,不完全性组长期随访结局优于完全性组;尿动力学提示膀胱排空功能恢复可能来源于膀胱感觉恢复引发排尿时腹内压代偿升高所致。

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蛋白激酶C通路特异性甲状旁腺素模拟肽在连续应用时对骨骼系统作用的研究

蛋白激酶C通路特异性甲状旁腺素模拟肽在连续应用时对骨骼系统作...

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作者：李明翰南方医科大学

学位级别：硕士

背景:甲状旁腺素(Parathyoid Hormone,PTH)是正常人体内的钙调节激素,N端34个氨基酸多肽(PTH(1-34),特立帕肽)是临床上治疗骨质疏松的促骨形成药物,但仅限于间断使用。这是由于其兼具破骨作用,因此在体内连续应用会显著促进骨吸收;近年... 详细信息

背景:甲状旁腺素(Parathyoid Hormone,PTH)是正常人体内的钙调节激素,N端34个氨基酸多肽(PTH(1-34),特立帕肽)是临床上治疗骨质疏松的促骨形成药物,但仅限于间断使用。这是由于其兼具破骨作用,因此在体内连续应用会显著促进骨吸收;近年来的研究都主要着重于提高其成骨作用、避免破骨作用,但进展甚微。PTH能够与甲状旁腺素Ⅰ型受体结合,激活蛋白激酶C(PKC)通路,从而改善和提高松质骨骨量,并且它还能够改善骨小梁的微观结构。在我们前期实验中,我们已经验证并合成了能够特异性激活PKC通路的PTH模拟肽(MY-1),通过对其进行离体和在体实验,我们发现MY-1肽具有促进成骨细胞分化,但不激活破骨细胞分化和增殖的作用。体内实验研究发现,MY-1肽拥有与PTH(1-34)相近的改善或延缓去势后造成的骨量丢失的作用。PTH肽连续作用对骨代谢的影响是研究它破骨效应研究的重要方式。目的:通过我们前期合成的特异性激活PKC通路的PTH模拟肽进行体内和体外实验,探讨适于PTH持续灌注对骨骼系统的作用研究合适的动物模型,评价MY-1肽连续应用时的骨质变化。方法:取5只8周龄小鼠(C57BL/6J)提取股骨和胫骨的骨髓基质细胞(BMSC)、骨髓源巨噬细胞(BMMs);成骨诱导BMSC细胞,对细胞采用茜素红染色、钙定量分析、碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性测定,破骨诱导BMMs,对细胞进行TRAP染色及抗酒石酸酸性磷酸酶活性测定;提取3日龄左右乳鼠(C57BL/6J)的颅骨原代成骨细胞,通过RT-PCR测定特异性成骨基因表达水平。取24只6周龄C57BL/6J雌性小鼠,适应性喂养一周后,随机取12只小鼠行卵巢切除术,术后观察一周,对OVX-TPTD组和TPTD组植入ALZET2004型微量缓释泵模拟连续使用TPTD。在第2周末行颈椎脱臼法处死后常温固定,取其胫骨进行MicroCT扫描,对松质骨进行定量分析,取胫骨做石蜡切片,进行HE及TRAP染色,观察骨小梁和破骨细胞分布情况,观察胫骨生长板厚度。取18只7周龄C57BL/6J雌性小鼠,通过对处理组植入ALZET2004型微量缓释泵模拟连续使用PTH(1-34)和MY-1肽。在第2周末行颈椎脱臼法处死后常温固定,取其胫骨进行MicroCT扫描,对松质骨进行定量分析,取胫骨做石蜡切片,进行HE及TRAP染色,观察骨小梁和破骨细胞分布情况,观察胫骨生长板厚度。结果:(1)胫骨松质骨骨量的测定,骨小梁体积分数PTH(1-34)组低于SHAM组,但MY-1组骨小梁体积分数与SHAM组略高于SHAM组,且明显高于PTH(1-34)组。OVX组显著低于SHAM组,PTH+OVX组显著高于OVX组。胫骨上段病理切片显示:骨小梁所占面积百分数,PTH(1-34)组、MY-1组与SHAM组显著性差异,OVX组显著低于SHAM组,PTH+OVX组显著高于OVX组。胫骨上段骨小梁发生区的厚度PTH(1-34)组和OVX组明显低于SHAM组,MY-1组与SHAM组无统计学差异,PTH+OVX组明显高于OVX组。(3)BMSC成骨诱导结果:茜素红染色示,PTH(1-34)组较对照组红色结节面积较少MY-1组红色结节面积明显高于对照组;碱性磷酸酶染色示,CON组、PTH(1-34)组、MY-1组均出现深蓝色染色,且PTH(1-34)组和MY-1组染色明显较对照组深,ALP定量检测示,酶活性在PTH(1-34)组出现降低、MY-1组的酶活性显著提升,PTH(1-34)vsMY-1;(4)BMMs破骨诱导结果:TRAP染色提示PTH(1-34)组和MY-1组TRAP阳性细胞数目明显增高,且均较CON组更多,但MY-1组破骨细胞增多数目较少;抗酒石酸酸性磷酸酶定量测定显示PTH(1-34)组和MY-1组的酶活性与CON组相比均有升高,但PTH(1-34)组TRAP酶活性高于MY-1组,两组间有统计学差异。(5)颅骨原代和BMSC细胞RT-PCR结果:成骨相关特异性基因(ALP、BSP、OC、OPG)表达,PTH(1-34)组相比对照组明显抑制,MY-1组相对于对照组明显上调。PTH(1-34)组相对于对照组,Rankl基因表达明显上调,MY-1组与对照组相比则表现出抑制。结论:细胞和动物实验综合显示,MY-1肽具有比PTH更好的促进成骨分化的作用,并且未表现出和PTH 一样的促进破骨分化的作用。由于MY-1肽在PKC通路的特异性,提示PKC信号通路可能特异性促进成骨分化。MY-1肽具有局部应用的可能。在研究甲状旁腺素连续应用的过程中,我们发现去卵巢小鼠和正常小鼠显现的效果不一致,雌激素对PTH连续应用的影响、机理和临床效应需要深入研究,但提示我们在实验动物模型的选择和研究结果解读需要更加慎重。

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同方学位论文库评论

绝经后骨质疏松椎体骨折治疗方案的临床效果观察

引用

作者：马洋洋南方医科大学

学位级别：硕士

研究目的:1.设计特立帕肽(TPTD)、椎体成形术(PVP)+阿仑膦酸钠、特立帕肽+椎体成形术(TPTD+PVP)、阿仑膦酸钠+止痛药四种治疗骨质疏松椎体骨折的方案,从有效性、安全性及经济性多个维度进行评估,从而为骨质疏松椎体骨折的治疗提出优选... 详细信息

研究目的:1.设计特立帕肽(TPTD)、椎体成形术(PVP)+阿仑膦酸钠、特立帕肽+椎体成形术(TPTD+PVP)、阿仑膦酸钠+止痛药四种治疗骨质疏松椎体骨折的方案,从有效性、安全性及经济性多个维度进行评估,从而为骨质疏松椎体骨折的治疗提出优选和备选的方案。2.对比分析特立帕肽保守(TPTD)与椎体成形术(PVP)+阿仑膦酸钠治疗骨质疏松椎体骨折在短期内(3个月)疼痛缓解、生活质量提升以及医疗花费的不同,探讨特立帕肽作为新型治疗方案的适用性。3.观察四组方案1年内治疗骨质疏松椎体压缩性骨折有关生活质量、骨密度提升以及骨折再发生率情况。研究方法:1.收集120例就诊于我院诊断为骨质疏松椎体骨折且年龄255岁的患者,根据患者本身的治疗意愿分为TPTD、PVP+阿仑膦酸钠组、TPTD+PVP组、阿仑膦酸钠+止痛药物组。TPTD组患者接受每日20 ug TPTD皮下注射,PVP+阿仑膦酸钠组患者在接受PVP手术治疗后每周口服70mg阿仑膦酸钠作为后续治疗。TPTD+PVP组患者在接受PVP手术治疗后接受每日20 ug TPTD皮下注射。阿仑膦酸钠治疗+止痛药物治疗组单纯口服止痛药物(痛时)和每周口服一次70mg阿仑膦酸钠治疗。在接受治疗后1周、1月、3月、6月、12月、18月、24月完善腰背痛评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)和SF-36生活质量评价表。治疗后3、6、12、18、24月复查X线。统计3、12、24月医疗总费用,治疗后3、6月复查MRI,每12月复查一次BMD并统计骨折再发生率,来探讨四组治疗方案的可行性。2.以3个月作为第一个临床观察点,单独分析TPTD组与PVP+阿仑膦酸钠组两组治疗效果。3.以1年为第二个临床观察点分析TPTD组、PVP+阿仑膦酸钠组、TPTD+PVP组和阿仑膦酸钠+止痛药物治疗组四组治疗效果。研究结果:***保守与PVP+阿仑膦酸钠治疗在缓解疼痛、日常功能恢复以及生活质量方面有很大的提升。1周时,在疼痛缓解方面PVP效果更加明显,两组有统计学差异(P0.05)。1年时,TPTD与阿仑膦酸钠相比,对骨密度增加量更优,具有统计学差异(P<0.05)。TPTD+PVP治疗花费最高,与其余三组相比均有统计学差异(P<0.05)。研究结论:1.本研究将为TPTD、PVP+阿仑膦酸钠、TPTD+PVP、阿仑膦酸钠+止痛药四种方案治疗骨质疏松椎体骨折的效果提供大量临床数据,对骨质疏松骨折的治疗指导具有重要意义。2.对于骨质疏松椎体压缩性骨折,短期内(3个月)TPTD保守治疗也能够达到与PVP手术治疗相同的效果,并且花费更少的治疗费用。***保守治疗骨质疏松椎体骨折的临床效果要优于PVP手术治疗,骨密度提升明显高于阿仑膦酸钠,并且与TPTD+PVP相比花费更少的医疗费用,从有效性、安全性及经济性多个维度进行评估可作为首要选择方案。

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