检索结果-南通市图书馆

作者：符可芯海南大学

学位级别：硕士

铜是动植物生长发育所必需的一种微量元素,其缺乏或过量都会对生物体产生相应的损伤。农业土壤中存在的高浓度铜能通过食物链进行传播和累积,对生态环境安全和人类健康造成威胁。微生物修复法是土壤重金属污染的修复方法之一,具有成本... 详细信息

铜是动植物生长发育所必需的一种微量元素,其缺乏或过量都会对生物体产生相应的损伤。农业土壤中存在的高浓度铜能通过食物链进行传播和累积,对生态环境安全和人类健康造成威胁。微生物修复法是土壤重金属污染的修复方法之一,具有成本低、操作简单和无二次污染等特点。但是微生物菌株稳定性差和修复机制不清楚制约其大规模应用。为了筛选新工程菌株和阐明微生物肥料对铜污染土壤的修复机制,本研究通过分子生物学方法、生理生化特征以及形态学鉴定一株铜富集细菌HNU1菌株;采用单因素和正交设计试验方法筛选出HNU1菌株的最适培养条件和最适培养基成分;采用单因素试验确定HNU1菌株对铜离子的吸附容量;采用固态发酵法制备微生物肥料;采用盆栽试验分析微生物肥料对铜胁迫下的小白菜的促生长作用和机制。结果如下:1、HNU1菌株是由海南大学重点生物学实验室从海南儋州土壤中分离纯化的芽孢杆菌菌株,命名为HNU1。采用细菌16S r DNA通用引物对27f和1492r以及gyr B基因的引物对UP1和UP2r对HNU1菌株的基因组DNA进行PCR扩增并将所获得的序列在NCBI上比对,HNU1菌株的两个基因序列与解淀粉芽孢杆菌的最高同源性分别达为99.59%和99.2%。基于两个基因序列构建的系统进化树显示HNU1菌株与解淀粉芽孢杆菌聚为一类,命名为解淀粉芽孢杆菌HNU1。2、HNU1菌株的最适培养条件为培养温度为37℃、摇床转速为180 r/min、培养基p H8.0、菌株的接种量为0.1%、装液量为40%。HNU1菌株的最适培养基组成及比例为蔗糖2.0 g/L、酵母粉4.0 g/L、蛋白胨6.0 g/L、Mg SO 5.0 g/L。3、HNU1菌株对Cu的吸附量主要受pH、铜初始浓度和菌体生物量的影响。HUN1菌株对铜的吸附量随p H值和初始铜浓度的升高而升高,但随菌体生物量的升高而减少。HNU1菌株对铜的生物吸附量最高达到54.82 mg/g。4、采用固态发酵法制备5种不同配方的微生物肥料(WF1、WF2、WF3、WF4和WF5)。铜添加浓度为0 mg/kg时,WF1、WF2、WF3和WF4处理的小白菜生长指标值间没有显著性差异,但均显著高于WF5。在铜添加浓度为200mg/kg时,WF4处理的小白菜生长指标值均显著高于其他4种肥料。5、与对照相比,在铜添加浓度为0 mg/kg时,微生物肥料处理下的小白菜株高、鲜重和干重的增加率分别为10.37%、65.3%和67.78%,说明微生物肥料能显著促进小白菜的生长。在铜添加浓度50～200 mg/kg范围内,随着铜添加浓度的增加,小白菜的生物量也显著下降,但微生物肥料处理下的小白菜生物量均显著高于对照组。6、施用微生物肥料能显著促进小白菜抗氧化酶基因的表达量,提高土壤的p H值。根据以上结果得出以下结论:1、通过分子生物学方法、生理生化特征以及形态学等方法鉴定微生物肥料核心HNU1菌株为解淀粉芽孢杆菌;2、解淀粉芽孢杆菌HNU1菌株对培养条件的适应范围较广,有利于大规模生产,并降低生产成本;3、解淀粉芽孢杆菌HNU1菌株对铜(Cu)具有高效的吸附性能;4、固态发酵法制备的WF4具有良好的肥效作用;5.施用微生物肥料能显著促进小白菜生长并缓解铜对小白菜的胁迫作用,其机制为提高小白菜的抗逆性,改善土壤性质。

关键词：解淀粉芽孢杆菌微生物肥料小白菜铜污染土壤

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飞机草致病菌筛选及生防价值研究

飞机草致病菌筛选及生防价值研究

作者：李雨龙海南大学

学位级别：硕士

飞机草(Chromolaena odorata L)是菊科(Compositae)多年生杂草,学名香泽兰。目前,该草遍布海南全岛,且对海南的农林牧业的生产、物种多样性和生态系统危害严重。研究表明,筛选和利用本土植物病原真菌资源控制入侵生物是一条简捷安全的途... 详细信息

飞机草(Chromolaena odorata L)是菊科(Compositae)多年生杂草,学名香泽兰。目前,该草遍布海南全岛,且对海南的农林牧业的生产、物种多样性和生态系统危害严重。研究表明,筛选和利用本土植物病原真菌资源控制入侵生物是一条简捷安全的途径,本研究旨在从飞机草上分离出具有较高生物活性的病原真菌,对其致病力和代谢产物的生防价值进行研究。包括以下几个部分:1.对海南地区飞机草病害进行调研。飞机草真菌性病害主要有5种,病原分别是链格孢属(Alternariasp.)、弯孢属(Curvularia sp.)、炭疽属(Colletotrichum sp.)、镰刀菌属(Fusarium sp.)、尾孢属(Cercospora sp.)真菌,其中最常见的是尾孢引起的角斑病。野外飞机草叶斑病的发生受自然环境及病原菌的种类的影响,且不同地区存在差异。2.从野外自然发病飞机草上共分离到61株病原菌。从中选取易分离、致病力较高的46株病原菌进行致病力测试,结果表明,不同菌株对飞机草致病力差异较大。同时经过形态学观察与分子鉴定,确定飞机草的重要病原真菌分别为:链格孢(Alternarialternata)、新月弯孢(Curvlaria unaata)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporu)。选取11株高致病力菌株对热带地区常见杂草进行寄主范围测试,仅蟛蜞菊、马唐、三叶鬼针草、龙葵对这些菌株表现出高度和中度感病。3.针对菌株LGB100401、WB110216进行生物学特性研究。菌株LGB100401菌丝生长最适温度为25℃,pH为6,最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为牛肉浸膏,光照对菌丝生长无显著影响;菌株WB110216菌丝生长最适温度为30℃,pH为7,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,光照对菌丝生长无显著影响。对两个菌株适宜的产毒条件进行研究。菌株LGB100401最适产毒条件为:25℃、pH 4-pH6、培养15d、低速振荡与静置结合培养。菌株WB110216最适产毒条件为:20℃、pH6-pH8、培养15d、低速振荡与静置结合培养。4.菌株LGB100401、WB110216粗毒素对飞机草的活性研究表明,其对飞机草种子、根长、芽长具有一定的生物活性,表现为对飞机草的抑制作用,且代谢产物也可产生植物性毒素并导致飞机草叶片坏死;对两个菌株粗毒素杀草谱研究表明,橡胶、玉米、黄瓜等作物对两个菌株均不敏感,菌株LGB100401粗毒素致病范围较广,羽芒菊、飞机草、三叶鬼针草对其较敏感;菌株WB110216粗毒素致病范围则较小,只有飞机草对其较敏感。两个菌株粗毒素对不同植物材料种子的生物活性研究表明,两个菌株粗毒素对反之苋、马唐、三叶鬼针草均有较高的抑制作用,而对南瓜、豇豆、四季豆等作物安全。5.利用大孔树脂及硅胶柱层析梯度洗脱法纯化富集菌株LGB100401、WB110216的粗毒素,按照极性和生物活性检测情况合并毒素。最终确定菌株LGB100401最佳洗脱系统为乙酸乙酯:甲醇=5:2;菌株WB110216最佳洗脱系统为石油醚:乙酸乙酯=5:4。两种洗脱系统的洗脱组分对飞机草叶片致病力最强。6.针对两个菌株粗毒素的洗脱组分进行GC-MS分析。其洗脱组分鉴定出了5-羟甲基糠醛、细交链格孢菌酮酸等大量化合物,其中包含了植物病原真菌毒素常见组分,如苯甲酸酯类、酰胺类,多糖衍生物及羧酸衍生物。

关键词：飞机草病原真菌代谢产物粗毒素产毒条件寄主范围

顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应

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顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰...

作者：王春蕾浙江省医学科学院

学位级别：硕士

目的在对映体层面上研究拟除虫菊酯类农药顺式联苯菊酯（cis-BF）对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应及其作用机制。方法利用高效液相色谱系统和手性色谱柱对cis-BF两对映体（1S-cis-BF和1R-cis-BF）进行拆分,并通过气相色... 详细信息

目的在对映体层面上研究拟除虫菊酯类农药顺式联苯菊酯（cis-BF）对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应及其作用机制。方法利用高效液相色谱系统和手性色谱柱对cis-BF两对映体（1S-cis-BF和1R-cis-BF）进行拆分,并通过气相色谱系统和圆二色光谱仪对单个对映体分别进行定量分析和构型判定。选取H295R细胞为研究模型,将细胞暴露于不同浓度（0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L）1S-cis-BF/1R-cis-BF 或 1S-cis-BF/1R-cis-BF 与 8-Br-cAMP（500 μmol/L）的混合物24 h,同时设置DMSO（0.1%,v/v）为溶剂对照组、8-Br-cAMP（500 μmol/L）为阳性对照组。用MTS法检测细胞增殖活性,确定染毒浓度。用ELISA法检测细胞上清液中皮质醇、醛固酮水平和细胞内cAMP含量,并用RT-qPCR法分析类固醇激素合成相关酶（StAR、P450scc、3βHSD2以及CYP17）mRNA的表达水平。结果cis-BF两对映体在高效液相色谱系统和手性色谱柱上成功得到分离,且1S-cis-BF和1R-cis-BF纯度均在99%以上。MTS结果显示,高浓度（1、10 μmol/L）1S-cis-BF/1 R-cis-BF对细胞增殖活性有刺激作用（P＜0.05）,因此本研究选择无细胞毒性浓度（0.001、0.01、0.1μmol/L）为cis-BF对映体的染毒浓度。激素测定结果显示,与溶剂对照组相比,0.001、0.01、0.1 μmol/L 1S-cis-BF/1R-cis-BF均显著降低本底皮质醇分泌水平（P＜0.05）,且 1S-cis-BF对本底皮质醇分泌的抑制作用分别是1R-cis-BF的1.49、1.68和1.04 倍,0.001、0.1mol/L 1S-cis-BF与0.1 μmol/L1R-cis-BF均明显降低本底醛固酮分泌水平（P＜0.05）,在0.1μmol/L浓度组1S-cis-BF对本底醛固酮分泌的抑制作用是1R-cis-BF的2.16倍,具有显著的对映体差异（P＜0.05）;与阳性对照组相比,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平随着浓度的增加而降低,而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平无明显改变,两对映体染毒组激素水平变化无显著性差异。RT-qPCR结果显示,与溶剂对照组相比,0.1 μmol/L 1S-cis-BF 显著下调本底 StAR、P450scc、3βHSD2 和 CYP17 mRNA表达水平（P＜0.05）,0.01、0.1 μmol/L 1R-cis-BF 显著下调本底 3βHSD2 mRNA 表达水平（P＜0.05）,且在 0.1 μmol/L 浓度组,1S-cis-BF 对本底 StAR、3βHSD2 和 CYP17 mRNA表达水平的抑制作用分别是1R-cis-BF的2.23、2.04和5.00倍,具有显著的对映体差异（P＜0.05）;与阳性对照组相比,随着浓度的升高,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17mRNA表达水平的抑制作用越明显,其中在0.1 μmol/L浓度组3βHSD2和CYP17 mRNA表达下调幅度有统计学差异（P＜0.05）,而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的此四种基因的表达有下调趋势,但差异没有统计学意义,两对映体染毒组四种酶基因转录水平无统计学差异。cAMP测定结果显示,与对照组相比,0.1 μmol/L 1S-cis-BF染毒致细胞内cAMP含量降低了 8.10%（P＜0.05）,0.1μmol/L 1R-cis-BF处理组细胞内cAMP含量略有降低,但差异没有显著性,且在0.1 μmol/L浓度组,1S-cis-BF的抑制作用是1R-cis-BF的1.95倍,具有显著的对映体差异（P＜0.05）。结论cis-BF两对映体都能不同程度地抑制H295R细胞肾上腺皮质激素的分泌水平,且1S-cis-BF比1R-cis-BF具有更强抑制作用。cis-BF对映体主要通过阻碍cAMP信号通路,下调下游类固醇激素合成酶mRNA表达水平,从而引起肾上腺皮质激素分泌异常。

关键词：拟除虫菊酯顺式联苯菊酯 H295R细胞肾上腺皮质激素对映体选择性内分泌干扰效应

芒果可可球二孢对多菌灵抗性检测及抗性机制初步探讨

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芒果可可球二孢对多菌灵抗性检测及抗性机制初步探讨

作者：赵磊海南大学

学位级别：硕士

芒果(Martgiferci indica L.)为著名热带水果。中国是芒果主要生产国,每年产值达数百万吨,海南是我国种植面积最大的芒果产区。芒果蒂腐病是海南第二大采后病害,可造成贮藏与运输中的极大损耗。可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)... 详细信息

芒果(Martgiferci indica L.)为著名热带水果。中国是芒果主要生产国,每年产值达数百万吨,海南是我国种植面积最大的芒果产区。芒果蒂腐病是海南第二大采后病害,可造成贮藏与运输中的极大损耗。可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)是引起芒果蒂腐病的主要真菌之一,该菌具有潜伏侵染特性,病菌在田间就侵入芒果。芒果种植期间大量频繁使用杀菌剂防治各种病害,使海南芒果可可球二孢(***)对多菌灵等杀菌剂存在产生抗性的风险。为了确定海南芒果可可球二孢对多菌灵的抗性现状、抗性菌的特性及产生抗性的生化机制,从以下几方面开展研究。于2016年从海南16个芒果种植区采集芒果,大量分离及保存芒果蒂腐病菌可可球二孢菌株;检测了芒果可可球二孢对多菌灵的抗性水平,通过抗敏菌株的生物学特性、适合度、渗透压、菌丝电渗率及酶活力之间的差异探讨了可能的抗性机制。研究结果表明:1.从海南各芒果产区共采回522个芒果,发生芒果蒂腐病的病果137个,发病率为26.2 %;共分离得到共259个菌株,通过形态及分子鉴定有139株为可可球二孢,检出率为53.7%,确证可可球二孢是海南芒果蒂腐病的主要致病菌。2.针对90个菌株进行致病力水平测定,发现强致病力菌株65株,占72.22%,中致病力菌株14株,占15.56%,弱致病力和无致病性菌株为11株,占12.22%。3.病菌对多菌灵的抗药性检测结果显示,90个菌株中有51个高抗菌株,8个中抗菌株,31个敏感菌株;抗性菌株比率为65.56%,高抗性菌株比率达56.67%。测定了部分菌株的EC50值,敏感菌株EC50范围在0.03mg/mL左右,而高抗性水平菌株,在多菌灵高达2000 mg/mL时仍然能正常生长,抗性倍数可达数万倍;可可球二孢菌株的孢子对多菌灵有极高抗性。抗性菌株对多菌灵的抗性具有遗传稳定性,连续转代培养15代后仍能保持高水平抗性。4.比较抗性不同的菌株之间的生物学特性及生理适合度,发现高抗性的菌株菌丝生长速度比敏感和中等抗性的菌株快,不同抗性菌株之间致病力和对温度的敏感性并未有明显差异。5.研究表明,抗性菌株对葡萄糖和氯化钠的较高渗透压比敏感菌株更为敏感,表明敏感菌株的渗透压调节能力要高于抗性菌株。敏感菌株的相对渗率高于抗性菌株,显示敏感菌株的细胞膜透性大,胞内电解质渗出较多,而抗性菌株较敏感菌株的细胞膜透性小,这可能与菌株抗药性有关。6.实验中抗敏菌株体内CAT与GST两种酶的活性无显著差异。

关键词：芒果蒂腐病可可球二孢抗药性检测抗药性机理

芒果蒂腐病菌可可毛色二孢对吡唑醚菌酯抗性机制研究

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芒果蒂腐病菌可可毛色二孢对吡唑醚菌酯抗性机制研究

作者：董国然海南大学

学位级别：硕士

芒果(Mangifera indica L.),作为亚热带地区的重要经济作物在我国海南省广泛种植,年产量近70万吨。芒果蒂腐病作为芒果主要采后病害之一,严重危害芒果的产量和品质。可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)是导致芒果蒂腐病及采后果实... 详细信息

芒果(Mangifera indica L.),作为亚热带地区的重要经济作物在我国海南省广泛种植,年产量近70万吨。芒果蒂腐病作为芒果主要采后病害之一,严重危害芒果的产量和品质。可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)是导致芒果蒂腐病及采后果实腐烂的重要病原菌,病菌在田间就已侵入但不表现症状,具有潜伏侵染的特性。由于芒果种植期间长期大量频繁的使用化学杀菌剂进行防治,增加了病原菌的选择压力和抗性。为确定海南地区芒果可可毛色二孢对Qo I类杀菌剂抗性现状,探究抗性产生的生化机制、分子机制,本实验从以下几个方面进行了相关研究:测定海南芒果主产区采集分离的91株可可毛色二孢菌株对吡唑醚菌酯的抗性水平,检测可可毛色二孢菌株对其他4类杀菌剂的交互抗药性;不同吡唑醚菌酯抗性水平的菌株进行抗性遗传稳定性、ATP含量测定、AOX酶含量测定,探讨病原菌抗性生化机制;克隆并分析抗感菌株Cytb基因和AOX基因序列,以及两种基因表达量与病原菌抗药性之间的关系,探究病原菌抗性分子机制。研究结果表明:1.供试91株可可毛色二孢菌株中抗性菌株87株,抗性频率达95.6%,其中高抗菌株占比28.6%,说明海南地区芒果蒂腐病菌对吡唑醚菌酯已具有较高抗性风险。2.交互抗药性测定表明:吡唑醚菌酯抗性菌株对Qo I类杀菌剂嘧菌酯普遍表现为抗性,吡唑醚菌酯同嘧菌酯之间存在交互抗药性;部分菌株对苯并咪唑类杀菌剂多菌灵表现出极高的抗性,对吡咯类杀菌剂咯菌腈和三唑类杀菌剂苯醚甲环唑均为敏感,并且吡唑醚菌酯与这3种杀菌剂之间不存在交互抗药性。3.在无药剂的PDA培养基上连续接种10代后,在含有吡唑醚菌酯的PDA培养基上培养,菌丝生长速率变化很小,抗性可以稳定遗传。在药剂处理下,随着吡唑醚菌酯药剂浓度的提高,抗感菌株体内ATP含量存在显著差异(p<0.05),菌株抗药性水平越高,体内ATP含量越高,说明吡唑醚菌酯抗性菌株的抗药性与菌体内ATP合成有关。4.不同抗性水平菌株在吡唑醚菌酯药剂作用条件下,体内旁路氧化酶含量出现不同程度的提高,其中高抗菌株AOX酶含量显著大于敏感及低抗菌株。水杨羟肟酸(SHAM)对AOX酶有一定抑制作用,在SHAM作用时,抗性菌株体内AOX酶含量显著高于敏感菌株(p<0.05)。5.对抗感吡唑醚菌酯可可毛色二孢的Cytb基因和AOX基因序列比对发现:抗性菌株Cytb基因潜在抗性突变位点第129、137、143位氨基酸密码子均未发生碱基突变,但抗感菌株AOX基因氨基酸密码子存在25处差异。此外不同抗性水平菌株Cytb基因相对表达量无显著差异,但高抗菌株AOX基因相对表达量在药剂作用条件下显著高于低抗菌株和敏感菌株。结论:芒果蒂腐病菌可可毛色二孢菌株对吡唑醚菌酯产生严重抗药性;吡唑醚菌酯同嘧菌酯之间存在交互抗药性;病原菌抗药性与Cytb基因129、137、143位氨基酸密码子碱基突变无关,但与AOX基因表达量、AOX基因点突变可能存在一定关系。

关键词：芒果可可毛色二孢吡唑醚菌酯 Cytb基因 AOX基因抗性机制

4-水杨酰基氨基硫脲衍生物及其铁金属冠醚的合成、表征和生物活性的研究

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4-水杨酰基氨基硫脲衍生物及其铁金属冠醚的合成、表征和生物活性...

作者：金呈之海南大学

学位级别：硕士

本学位论文以4-水杨酰基氨基硫脲衍生物及其金属冠醚为研究对象,设计并合成了4-水杨酰基氨基硫脲、4-(4-甲基水杨酰基)氨基硫脲、4-(5-氯水杨酰基)氨基硫脲和4-(5-溴水杨酰基)氨基硫脲,及其相应的铁冠醚化合物,进而研究水杨酰基氨基硫... 详细信息

本学位论文以4-水杨酰基氨基硫脲衍生物及其金属冠醚为研究对象,设计并合成了4-水杨酰基氨基硫脲、4-(4-甲基水杨酰基)氨基硫脲、4-(5-氯水杨酰基)氨基硫脲和4-(5-溴水杨酰基)氨基硫脲,及其相应的铁冠醚化合物,进而研究水杨酰基氨基硫脲衍生物及其金属冠醚对微生物的影响及活性。研究工作为铁金属冠醚配合物的合成、表征和晶体结构的分析,以及所合成的铁金属冠醚配合物的生物活性及其各种影响因素的探讨。目前已获得的初步结果主要有：1.合成、表征了配体4-水杨酰基氨基硫脲(H3st),并以它为配体,通过去质子化,与金属离子配位,制备了铁金属冠醚化合物[Fe6(st)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF·4MeOH。其结构经过各类分析方法加以了表征。培养得到了金属冠醚化合物的晶体,并通过X-Ray晶体分析,确定了[Fe6(st)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF-4MeOH金属冠醚的分子结构。金属冠醚化合物[Fe6(st)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF-4MeOH为Triclinic晶系,空间群P-1。 a=13.1518(11) A, b=13.5489(11) A, c=14.6584(12) A, a=81.7210(10)°, β=74.3120(10)°, y=85.2420(10)°, V=2485.9(4)A3, Z=1, Dcalc=1.480g/cm3, R1=0.0878, wR2=0.2676(I>20(1)的7969个衍射点), GOF=1.028.2.合成、表征了配体4-(4-甲基水杨酰基)氨基硫脲(H3mst),并以它为配体,通过去质子化,与金属离子配位,制备了铁金属冠醚化合物[Fe6(mst)6(DMF)6(MeOH)4]·2DMF-2MeOH=其结构经过各类分析方法加以了表征。培养得到了金属冠醚化合物的晶体,并通过X-Ray晶体分析,确定了[Fe6(mst)6(DMF)6(MeOH)4]·2DMF·2MeOH金属冠醚的分子结构。金属冠醚化合物[Fe6(mst)6(DMF)6(MeOH)4]·2DMF·2MeOH为Triclinic晶系,空间群P-1。 a=13.4581(12) A, b=13.5595(12) A, c=15.9795(15) A, a=78.5150(10)°, β=75.2610(10)°, γ=82.562(2)°, V=2754.0(4) A3, Z=1, Dcalc=1.348g/cm3, R1=0.0503, wR2=0.2273(I>2c(I)的7345个衍射点),GOF=1.547。3.合成、表征了配体4-(5-氯水杨酰基氨基)硫脲(H3cst),并以它为配体,通过去质子化,与金属离子配位,制备了铁金属冠醚化合物[Fe6(cst)6(DMF)4(MeOH)2J-·2DMF·2MeOH·4H2Oo其结构经过各类分析方法加以了表征。培养得到了金属冠醚化合物的晶体,并通过X-Ray晶体分析,确定了[Fe6(cst)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF·2MeOH·4H2O金属冠醚的分子结构。金属冠醚化合物[Fe6(cst)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF·2MeOH·4H2O为Monoclinic晶系,空间群P2(1)/c. a=14.3299(14) A, b=15.8649(15) A, c=24.529(2) A, a=90°, p=90.816(2)°,7=90°, V=5576.0(9)A3, Z=2, Dcalc=1.426g/cm3, R,=0.0651, wR2=0.1756(I>2σ(I)的6448个衍射点),GOF=1.971。4.合成、表征了配体4-(5-溴水杨酰基氨基)硫脲(H3bst),并以它为配体,通过去质子化,与金属离子配位,制备了铁金属冠醚化合物[Fe6(bst)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF-4MeOH。其结构经过各类分析方法加以了表征。培养得到了金属冠醚化合物的晶体,并通过X-Ray晶体分析,确定了[Fe6(bst)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF-4MeOH金属冠醚的分子结构。金属冠醚化合物[Fe6(bst)6(DMF)4(MeOH)2]·2DMF-4MeOH为Monoclinic晶系,空间群P2(1)/c。a=14.228(2)A, b=15.695(2) A, c=24.384(4) A, α=90°, β=92.647(3)°, γ=90°, V=5439.1(14)A3, Z=2, Dcalc=1.642g/cm3, R1=0.0708, wR2=0.2487(I>2σ(I)的5704个衍射点),GOF=1.031。

关键词：水杨酰基氨基硫脲衍生物金属冠醚合成表征抗菌活性

生长期喷施复硝酚钠对经济林果（杧果）果实发育及果实品质的影响

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生长期喷施复硝酚钠对经济林果（杧果）果实发育及果实品质的影响

作者：付堯海南大学

学位级别：硕士

近年来,为了提高杧果产量,生产中常施用一些能增产和促进果实膨大的植物生长调节剂,其中以赤霉素(GA)、氯吡苯脲(CPPU)和噻苯隆(TDZ)的应用较为广泛。然而,在提高杧果产量的同时,植物生长调节剂的盲用、滥用以及不科学使用也导致了严重... 详细信息

近年来,为了提高杧果产量,生产中常施用一些能增产和促进果实膨大的植物生长调节剂,其中以赤霉素(GA)、氯吡苯脲(CPPU)和噻苯隆(TDZ)的应用较为广泛。然而,在提高杧果产量的同时,植物生长调节剂的盲用、滥用以及不科学使用也导致了严重的负面效果;比如导致畸形果增加,果实品质下降,采后果实转色不正常等。复硝酚钠(Compound Sodium Nitrophenolate,缩写CSN),化学成分为5-硝基愈创木酚钠、邻硝基苯酚钠和对硝基苯酚钠;它与作物接触后能迅速渗透到植物体内,促进细胞的原生质流动,提高细胞活力;同时还能促进生长发育、防止落花落果、改善产品品质、提高产量及作物的抗逆能力。目前复硝酚钠在杧果上主要用作催花剂,在果实生育期少有施用,其相关研究鲜有报道。预实验结果表明,500 mg.L的复硝酚钠可以显著提高‘贵妃’杧果的产量,但其对果实品质的影响尚不知晓。因此,本研究选用‘贵妃’杧果为试材,先采用石蜡切片法制片观察杧果果肉细胞的发育规律,探明果肉细胞的分裂期及果实膨大期的大致时间;然后在其对应的发育期喷施复硝酚钠,每隔10 d喷施1次,共喷施6次,并测定杧果果实发育及果实品质指标。旨在探明生长期科学地喷施复硝酚钠对‘贵妃’杧果果实发育及采后果实品质的影响,以期为复硝酚钠在杧果生产中的使用提供科学合理的理论依据。试验结果表明:(1)‘贵妃’杧果果肉细胞分裂期结束时,果实纵径为(34.79±0.52)-(41.71±1.12)mm,横径为(23.03±0.56)-(24.51±0.59)mm。杧果果肉细胞纵横径与果实大小呈显著正相关。杧果果肉细胞分裂期大致于盛花期后37-56 d(5-8周)截止。(2)生长期喷施复硝酚钠能够促进果实膨大,显著增加‘贵妃’杧果成熟期的单果质量;有利于果实转红和成熟期果实转黄,可有效降低杧果果皮中叶绿素的含量;显著增加杧果中赤霉素(GA)的含量,降低脱落酸(ABA)的含量。(3)生长期喷施复硝酚钠一定程度上延缓了果实贮藏期间硬度的下降和可溶性固形物含量的上升,总酸和Vc含量基本保持不变;一定程度上提高了杧果生长发育期间的淀粉含量。(4)生长期喷施复硝酚钠显著提高了‘贵妃’杧果的总酚含量;酚单体中,儿茶素和绿原酸的含量提高最明显。显著地降低了杧果采后病害发病率和发病指数,对炭疽病和蒂腐病具有一定的防治效果。

关键词：复硝酚钠果实发育果实品质石蜡切片

海南芒果蒂腐病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的抗性检测及抗性菌株生化特性探究

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海南芒果蒂腐病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的抗性检测及抗性菌株...

作者：贺瑞海南大学

学位级别：硕士

芒果(MangiferaindicaL.)产于热带,是较为重要的经济作物,海南地区的芒果产量和种植面积,皆位居全国的首位,芒果病害的发生严重。研究表明,芒果蒂腐病属于芒果采后病害,其危害程度仅次于芒果炭疽病,该病原菌具有潜伏侵染的特性,给芒果... 详细信息

芒果(MangiferaindicaL.)产于热带,是较为重要的经济作物,海南地区的芒果产量和种植面积,皆位居全国的首位,芒果病害的发生严重。研究表明,芒果蒂腐病属于芒果采后病害,其危害程度仅次于芒果炭疽病,该病原菌具有潜伏侵染的特性,给芒果蒂腐病的防治带来很大困难。甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂是一类细胞呼吸抑制剂,作用范围较广,但因其作用位点比较单一,近年来,抗药性已成为该类杀菌剂的一个重要问题。为了解海南芒果蒂腐病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的抗性水平、抗性菌的生化特性及产生抗性的机制,我们从以下几方面开展研究。分别测定芒果蒂腐病菌对吡唑醚菌酯和嘧菌酯的抗性,检测分析菌株对温度的敏感性,不同抗性和敏感菌株的渗透压力、菌丝电渗率及相关酶活性检测,探讨菌株可能的抗性机制。研究结果表明:1.海南芒果地区的蒂腐病菌菌株对吡唑醚菌酯的抗性菌株发生抗性频率为58.95%。菌株对嘧菌酯的抗性发生频率极高,抗性菌株的发生频率为91.58%。供试菌株的EC50在3.12～1525.43 mg/L之间,呈现近似的连续性正态分布,多数菌株对药剂表现出中抗或者高抗的水平。2.菌株的培养及生化特性结果表明:菌株对温度的敏感性实验表明,高温及低温均会抑制菌株的生长,抗性菌株在低温下比敏感菌株表现更敏感;低浓度葡萄糖对菌株的生长不利,低浓度氯化钠促进菌株的生长,不同抗性菌株间差别不大;菌丝相对电导率的测定发现,抗性菌株在药剂处理后相对电导率变化缓慢,细胞膜通透性变化较慢,这可能与菌株的抗药性有关。3.菌株的相关酶活力测定中结果表明,高抗菌株的POD、CAT及PAL活力均明显高于敏感菌株。随着药剂浓度升高,菌株的GST活力减小,差异具有明显统计学意义。

关键词：芒果蒂腐病可可球二孢甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗药性

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杧果果柄胶损伤果皮机理及其清除剂筛选

杧果果柄胶损伤果皮机理及其清除剂筛选

作者：母军霞海南大学

学位级别：硕士

杧果(Mangifera indica L.)为漆树科杧果属热带果树。杧果果实肉厚,营养成分丰富,深受大众喜爱。杧果果柄胶是一种酸性粘稠状液体,接触果皮后会形成褐色至黑色的斑点,损伤处容易受到真菌侵染,导致炭疽病的发生,影响杧果的外观及品质,对... 详细信息

杧果(Mangifera indica L.)为漆树科杧果属热带果树。杧果果实肉厚,营养成分丰富,深受大众喜爱。杧果果柄胶是一种酸性粘稠状液体,接触果皮后会形成褐色至黑色的斑点,损伤处容易受到真菌侵染,导致炭疽病的发生,影响杧果的外观及品质,对杧果产业造成严重损失。本研究从以下4个方面开展研究:杧果果柄流胶与果实贮藏期病害的关系、果柄胶挥发性成分的定性与定量分析、果柄胶损伤果皮的作用机理和果柄胶清除剂的筛选;为探究果柄胶损伤果皮引起贮藏期病害的原因和减轻果柄胶的损伤效果提供参考依据。主要研究结果如下:(1)通过统计分析贮藏期杧果果柄胶导致褐变的果实个数和后熟时褐变果实的发病个数的结果表明:杧果果柄流胶导致果实褐变与贮藏期果实发病呈线性正相关;损伤杧果果皮的是果柄胶的非水相成分,其症状与全果胶相同,而水相成分未见明显损伤果皮的症状。(2)通过气相色谱质谱联用法(GC-MS)对‘金煌’等8个杧果品种的果柄胶挥发性成分进行定性分析,共鉴定出30种匹配度大于90%的化合物,其中,萜烯类是主要挥发性成分,相对含量>99%,酚类、醛类和烷烃类占比极少。8个杧果品种果柄胶中共有的化合物有α-蒎烯、3-蒈烯、α-水芹烯、α-松油烯、(R)-(+)-柠檬烯、β-水芹烯、γ-萜品烯、萜品油烯、β-丁香烯和2,4-二叔丁基苯酚共10种。其中,萜品油烯和3-蒈烯为8个杧果品种果柄胶的最主要挥发性成分,α-蒎烯为‘红杉林’果柄胶中的主要挥发性成分之一,含量达到21.28%。通过GC-MS法对6种主要成分在8个杧果品种中的含量进行分析时发现,不同品种6个主要成分的总含量为291.82μL/m L-30.27μL/m L。其中,‘红象牙’中的6种成分的总含量显著高于其他品种,达到291.82μL/m L,其次是‘红杉林’,达到120.90μL/m L,再次是‘金穗’,达到79.77μL/m L;‘玉文’、‘台农1号’、‘四季蜜芒’、‘金煌’和‘贵妃’中6种成分的总含量为65.83μL/m L-30.27μL/m L。供试的3种萜烯成分中,3-蒈烯和β-水芹烯损伤果皮明显,α-松油烯损伤果皮较轻。(3)通过超景深三维显微镜、光学显微镜和扫描电镜观察果皮结构发现,果柄胶主要损伤果皮皮孔,造成皮孔孔口开裂变大,中央呈黑褐色,蜡质层破裂;角质层开裂、表面粗糙凌乱、组织瓦解、细胞连接被破坏、表皮细胞排列杂乱,但气孔闭合无损伤。(4)通过测定果柄胶导致果皮褐变相关指标发现,在果皮的褐变过程中,PPO和POD活性均上升达到峰值后下降,且损伤处理组中的含量始终高于对照组;SOD活性呈先下降后上升、再下降再上升的趋势,CAT活性则呈逐渐下降的趋势,且SOD和CAT活性在损伤处理组中的含量始终低于对照组。通过将褐变相关指标与果实损伤指数进行相关性分析发现,损伤指数与PPO活性呈正相关关系,与POD活性呈正相关关系,与SOD、CAT和总酚含量呈负相关,其中,CAT活性与损伤指数呈极显著的负相关关系。(5)筛选果柄胶清除剂及其使用方法时发现,在供试的4种试剂中,筛选出1%CaCO或2%NaHCO清除效果优于吐温80和羧甲基纤维素钠(CMC-Na),果柄胶接触果皮的1 h内使用清除效果最好。

关键词：杧果果柄胶挥发性成分褐变清除剂

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海南芒果可可球二孢对多菌灵抗性机制的研究

海南芒果可可球二孢对多菌灵抗性机制的研究

作者：曾耿狄海南大学

学位级别：硕士

芒果（Mangfera indica L.）是热带地区重要的经济作物,海南省是我国芒果的主产区。苯并咪唑类杀菌剂由于作用位点单一的特点,加上这类药在海南施用频率高很容易产生抗药性。在前期研究基础上选取3株MBC-S、4株MBC-MR和5株MBC-HR芒果可... 详细信息

芒果（Mangfera indica L.）是热带地区重要的经济作物,海南省是我国芒果的主产区。苯并咪唑类杀菌剂由于作用位点单一的特点,加上这类药在海南施用频率高很容易产生抗药性。在前期研究基础上选取3株MBC-S、4株MBC-MR和5株MBC-HR芒果可可球二孢分别进行菌株抗性的遗传稳定性、对温度的敏感性、高渗溶液的敏感、菌丝电导率及相关酶活性检测,旨在探讨菌株可能的抗性特性及抗性生化机制。克隆并分析比对抗感多菌灵芒果可可球二孢菌株的β-微管蛋白基因序列;及β-微管蛋白基因表达量与多菌灵敏感性的关系,探讨抗药性产生的分子机制;根据MBC-HR和MBC-MR菌株中β-微管蛋白基因第198位和200位的密码子的点突变,根据ASO-PCR法设计了 PCR引物LYT-R/LYT-Z和YT-R1/YT-Z1尝试芒果可可球二孢对多菌灵的抗性快速检测技术。研究结果表明:1.12株抗感多菌灵芒果可可球二孢的抗性可以稳定遗传,高温及低温均会抑制菌株的生长,抗性菌株存在低温敏感性。12株抗感多菌灵可可球二孢菌株菌丝的生长随着葡萄糖和NaCl的浓度增加先促进后抑制,MBC-S敏感菌株高盐环境比MBC-HR和MBC-MR菌株更敏感。2.12株抗感多菌灵芒果可可球二孢的相对电导率呈现一个先上升后趋于平缓的趋势。50 mg/L的多菌灵药剂处理后,敏感菌株的相对电导率明显提高且始终大于抗性菌株,也说明敏感菌株对多菌灵敏感,受药剂的破坏细胞内物质渗漏严重。测定抗感多菌灵芒果可可球二孢菌丝中甘油的含量,结果表明抗感菌株菌丝中甘油含量没有差异。3.可可球二孢抗、感多菌灵菌株的菌丝内的CAT酶活性存在明显差异,抗性菌株中的酶活性较高;高抗菌株CAT酶活性约是敏感菌株的4倍。抗性菌株中的GST酶的活性也比敏感菌高;抗感菌株的POD酶活性没有显著性差异。4.通过克隆抗感多菌灵可可球二孢菌株的β-微管蛋白的基因序列的比对分析,发现MBC-HR高抗菌株第198氨基酸的密码子谷氨酸（GAG（Glu））突变为丙氨酸GCG（Ala）,发生碱基突变,MBC-MR中抗菌株第200位氨基酸密码子200位TTC（Phe）变为酪氨酸TAC（Tyr）。β-微管蛋白基因序列的cDNA全长行447个氨基酸,MBC-HR高抗菌株β-微管蛋白的基因相对表达量大于MBC-MR中抗菌株大于MBC-S敏感菌株。***-PCR法设计了 PCR引物LYT-R/LYT-Z能使MBC-MR中抗菌株扩增出700 bp左右的条带,其他菌株不能不增出来。而YT-R1/YT-Z1能使MBC-HR高抗菌株扩增出700 bp左右的条带,其他菌株不能不增出来。结论:芒果蒂腐病菌可可球二孢对多菌灵产生抗药性的田间菌株β-微管蛋白基因发生点突变、抗性菌株具有稳定性及高适合度,抗性风险高。除了基因突变,菌株在细胞膜透性及酶活性均与抗性产生机制的有关。

关键词：芒果可可球二孢多菌灵 β-微管蛋白基因抗性机制