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呋虫胺对映体对意大利蜜蜂归巢与能量代谢的影响机制

呋虫胺对映体对意大利蜜蜂归巢与能量代谢的影响机制

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作者：陈丽超广西大学

学位级别：硕士

意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)是全球最主要的授粉昆虫之一。目前新烟碱类杀虫剂对蜜蜂的毒性研究成为热点,呋虫胺作为新烟碱类杀虫剂中最常用的品种之一,自登记以来,广泛用于全球农业生产中。虽然呋虫胺对蜜蜂的毒性研究目前已经取得... 详细信息

意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)是全球最主要的授粉昆虫之一。目前新烟碱类杀虫剂对蜜蜂的毒性研究成为热点,呋虫胺作为新烟碱类杀虫剂中最常用的品种之一,自登记以来,广泛用于全球农业生产中。虽然呋虫胺对蜜蜂的毒性研究目前已经取得了一定的进展,但是呋虫胺光学对映异构体对蜜蜂归巢及飞行的影响还鲜有报道。本文首次比较了呋虫胺R、S对映异构体在饲喂和挥发胁迫两种方式下对蜜蜂归巢能力的影响,并系统研究了呋虫胺R、S对映异构体在两种胁迫方式下对蜜蜂飞行相关基因flightin、乙酰胆碱受体基因、脂质代谢和糖类代谢以及对蜜蜂触角和足中OBPs的影响,并且通过转录组分析等手段,初步阐述了呋虫胺对映异构体胁迫对蜜蜂归巢能力的影响及可能的机制。为更有效保护蜜蜂提供依据,为蜜蜂种群崩溃综合症(CCD)现象提供一种新的视角。主要研究结果如下:(1)每只蜜蜂分别饲喂1 ng的S-呋虫胺时,蜜蜂的归巢率显著上升(p<0.05),归巢时间显著缩短(p<0.05);饲喂1 ng的R-呋虫胺时,归巢率和归巢时间无明显差异。(2)采用50μg/L的S-呋虫胺近距离挥发胁迫时,蜜蜂的归巢率显著降低(p<0.001),但归巢时间无明显差异,当采用50μg/L的R-呋虫胺挥发胁迫时,蜜蜂的归巢率也显著降低(p<0.05),归巢时间无明显差异。(3)不同时间饲喂呋虫胺R及S对映异构体对飞行相关基因flightin的影响:结果表明,分别饲喂呋虫胺对映体3小时后,蜜蜂体内flightin基因均显著上调,12小时后,flightin基因无明显变化,48小时后,flightin基因的表达量均显著下调。结果表明蜜蜂在饲喂暴露于呋虫胺对映异构体时,flightin基因的相对表达量会迅速上升,随后逐渐降低。这可能是分别饲喂S及R体呋虫胺后短时间内蜜蜂表现为归巢率显著上升,归巢时间显著缩短的原因。(4)呋虫胺R及S对映异构体近距离挥发胁迫3小时后,蜜蜂的flightin基因的相对表达量显著下降,这一结果与呋虫胺对映异构体挥发使蜜蜂的归巢能力显著降低的结果一致,说明呋虫胺对映异构体可能通过影响蜜蜂飞行flightin基因而影响蜜蜂的归巢。当分别剪掉蜜蜂的足或者触角后,呋虫胺挥发胁迫后检测其flightin基因的变化。结果表明,无论有触角或有足存在时,呋虫胺挥发胁迫都下调了蜜蜂flightin基因的相对表达量,表明蜜蜂可以通过触角及足感知呋虫胺的存在。(5)评估了呋虫胺对映异构体饲喂和挥发对蜜蜂乙酰胆碱受体基因的影响。研究发现:饲喂1 ng的R-呋虫胺3小时后,n Ch Rα2和n Ch Rα3显著上调(p<0.01),饲喂1 ng的S-呋虫胺会使n Ch Rα9显著下调(p<0.05);当蜜蜂受到50μg/L的S-呋虫胺挥发胁迫3小时后,n Ch Rα4和n Ch Rα6会显著下调(p<0.05),其他均无明显变化。(6)研究发现:18种气味结合蛋白(OBPs)主要在触角和足中表达。当挥发呋虫胺异构体时,S-呋虫胺能引起足中12种OBPs上调,引起触角中16种OBPs上调;而R-呋虫胺的挥发胁迫会引起足中2种OBPs的下调,引起触角中3种OBPs的下调。(7)当每只蜜蜂被饲喂1 ng的呋虫胺对映异构体3小时后,JH3滴度显著上升,说明呋虫胺的暴露会提高蜜蜂的保幼激素水平。当挥发50μg/L的呋虫胺对映异构体3小时后,保幼激素略有下降,无明显差异。(8)探究了呋虫胺对映异构体长期暴露对脂质代谢和糖类代谢的影响。当饲喂呋虫胺对映异构体48小时后,蜜蜂甘油三酯的含量显著下降(p<0.05),丙酮酸激酶的活力无明显变化,海藻糖含量上升,统计学上无明显差异,海藻糖酶的活力显著下降。研究结果表明,呋虫胺对映异构体的长期暴露对蜜蜂的脂类代谢和糖类代谢有负面影响。(9)通过转录组分析,饲喂呋虫胺对映体引起更多的基因差异、GO富集和KEGG富集,主要和氨基酸代谢和应激损伤有关,而挥发呋虫胺引起更少的基因差异、GO富集和KEGG富集,主要与表皮蛋白,气味结合蛋白,氨基酸代谢和脂类代谢等相关。综上所述,我们发现了呋虫胺对映异构体饲喂和挥发胁迫两种不同的接触方式会对蜜蜂的归巢和飞行有不同的结果,饲喂呋虫胺会引起JH3水平的上升,降低能量代谢,造成应激损伤,呋虫胺对映异构体的挥发胁迫会引起蜜蜂的气味结合蛋白(OBPs)、乙酰胆碱受体、表皮蛋白、氨基酸代谢和脂类代谢的变化。本文为CCD现象提供了更新的解释。

关键词：意大利蜜蜂呋虫胺对映异构体归巢能力飞行能量代谢

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离子迁移谱快速分析果蔬中二硫代氨基甲酸酯及氨基甲酸酯农药残留技术的开发与应用

离子迁移谱快速分析果蔬中二硫代氨基甲酸酯及氨基甲酸酯农药残留...

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作者：雷雨豪广西大学

学位级别：硕士

离子迁移谱(IMS)是一种快速高效的检测技术,本研究选取了四种二硫代氨基甲酸酯农药(DTCs)代森锌、代森联、福美双、代森锰锌和共同代谢物乙撑硫脲(ETU)及三种氨基甲酸酯农药(NMCs)甲萘威、苯氧威、茚虫威,利用离子迁移谱标定了这几种农... 详细信息

离子迁移谱(IMS)是一种快速高效的检测技术,本研究选取了四种二硫代氨基甲酸酯农药(DTCs)代森锌、代森联、福美双、代森锰锌和共同代谢物乙撑硫脲(ETU)及三种氨基甲酸酯农药(NMCs)甲萘威、苯氧威、茚虫威,利用离子迁移谱标定了这几种农药的约化离子迁移率(K),建立了这两类农药的离子迁移谱标准谱库。通过优化前处理条件,建立了离子迁移谱对四种二硫代氨基甲酸酯农药和代谢物乙撑硫脲以及三种氨基甲酸酯农药的快速分析方法,二硫代氨基甲酸酯类农药无需衍生为二硫化碳,氨基甲酸酯农药无需水解为甲胺或酚,而采用棉签表面擦拭与溶剂洗脱相结合的方法进行提取,首次实现了二硫代氨基甲酸酯类农药的单体目标物定性和定量分析。其中二硫代氨基甲酸酯农药的检出限(LOD)与定量限(LOQ)分别为0.03mg/kg及0.1mg/kg,代谢物乙撑硫脲检出限(LOD)与定量限(LOQ)分别为0.01mg/k g及0.03mg/kg,氨基甲酸酯农药的检出限(LOD)与定量限(LOQ)分别为0.01mg/kg及0.03mg/kg,可以满足樱桃番茄等基质中二硫代氨基甲酸酯农药及氨基甲酸酯农药的残留检测分析要求。利用色谱及色谱串联质谱等常规的大型检测仪器,分别测定施药后果皮及果肉农药残留,证明二硫代氨基甲酸酯农药及氨基甲酸酯农药的残留绝大部分在表皮上,通过表面洗脱及表面擦拭的方法可以代表样本整体性检测。同时为了优化快速检测方法,针对基质干扰对I MS分析结果影响的因素,初步研究了几种基质替代物质与传统基质在原始沉积量及降解规律上的相似处与不同处,通过比较发现几种替代材料与植物基质存在较大差异。将建立的离子迁移谱快速检测方法进行实际应用,对市场中常见苹果、番茄、葡萄、大白菜、小白菜及樱桃番茄等六种基质,进行了市场抽样检测,检测结果表明代森锌、代森联、福美双、代森锰锌、甲萘威、苯氧威、茚虫威以及代谢物ETU均低于规定的MRL值,慢性风险指标%ADI及急性风险指标%ARFD均小于100%,风险评估表明,其残留风险均在可接受范围,作物生产中农药的使用是规范合理的。研究结果表明了离子迁移谱可以作为快速的检测工具,相较于传统设备具有快速省时、省力等优点,但同时存在对基质的要求较高,只能用于基质表面农药的分析等缺点,相较于传统色谱检测仪器,离子迁移谱更适合用于快速的现场分析等情况。

关键词：离子迁移谱二硫代氨基甲酸酯氨基甲酸酯残留

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五种保幼激素在60种昆虫中的测定及手性构型分析

五种保幼激素在60种昆虫中的测定及手性构型分析

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作者：易国强广西大学

学位级别：硕士

保幼激素(Juvenile Hormone,JH)是一系列具有倍半萜结构的化合物,作为最重要的内分泌激素之一,在昆虫的生殖行为、进化、变态等生理行为中起着至关重要的作用,但目前缺乏关于不同昆虫体内JH的种类、滴度和手性构型差异的系统研究。因此... 详细信息

保幼激素(Juvenile Hormone,JH)是一系列具有倍半萜结构的化合物,作为最重要的内分泌激素之一,在昆虫的生殖行为、进化、变态等生理行为中起着至关重要的作用,但目前缺乏关于不同昆虫体内JH的种类、滴度和手性构型差异的系统研究。因此,本文建立了昆虫整虫的五种JH(JH I、JHⅡ、JHⅢ、JHB和JHSB,共18种手性异构体)的UPLC-ESI-Qq Q高灵敏度分析方法,选取60种昆虫(分布于昆虫的10个目),系统检测昆虫体内五种JH的种类、滴度和手性构型,分析了JH与昆虫在变态类型、取食方式、社会性行为等方面的关联性。研究结果阐明了代表性昆虫中JH的种类、滴度和手性构型分布及规律,为进一步研究JH在调控昆虫变态发育、生殖、社会行为等的功能和机理提供了重要参考。(1)试验首先建立了五种JH的UPLC-ESI-Qq Q检测方法,选择不同型号的手性柱对五种JH(共18种手性异构体)进行分离试验。结果表明,手性柱CHIRALPAK IA-3同时分离五种保幼激素的18种JH异构体。方法的检出限(LOD)为0.02-0.12 ng/m L,定量限(LOQ)为0.06-0.4ng/m L,相对标准偏差(RSD)均低于20%,1 ng/m L的添加回收率范围为59%-110%,5 ng/m L的添加回收率范围为61%-111%,10-100 ng/m L的添加回收率范围为73%-106%。方法具有良好的灵敏度、分离效果、准确度和重复性,满足痕量分析要求。(2)使用建立的方法对收集的60种昆虫(分布于10种昆虫目)进行五种JH的种类分布测定,结果表明,JHⅢ在10个昆虫目中均能检出,滴度范围为0.1-151.06 ng/g;JHⅡ只在鳞翅目昆虫中检出,滴度范围为0.12-0.61 ng/g;JH I在鳞翅目昆虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda检出,滴度范围为0.05-0.56 ng/g;JHB只在双翅目昆虫的丝光丽蝇Lucilia sericata成虫中检出,滴度为0.17 ng/g;JHSB只在半翅目昆虫中检出,滴度范围为0.08-0.42 ng/g。此外,实验发现具有双环氧化结构的JHSB存在于刺吸式口器的昆虫中,推测昆虫体内可能存在某种双氧化酶在昆虫完成刺吸取食中起重要作用。(3)在能检测JH手性构型的33种昆虫中,JHⅢ的手性构型均为10R,JH I和JHⅡ的手性构型为(10R,11S),JHSB的手性构型为(2R,3S,10R),JHB的手性构型为(6S,7S,10R),同时,JH I、JHⅡ、JHⅢ、JHB和JHSB在10号位的手性构型都是R型。实验结果表明,昆虫在合成JH过程中保持手性构型的相对稳定性,JH的手性构型在昆虫物种,昆虫目之间有高度保守性。(4)分析了19种成虫和7种四龄幼虫的JHⅢ滴度规律,结果表明,无论在成虫还是幼虫中,社会性昆虫的JHⅢ滴度显著高于其他非社会性昆虫,推测JHⅢ可能在调控昆虫社会性行为方面具有重要作用。(5)选取并测定草地贪夜蛾S.frugiperda,意大利蜜蜂Apis mellifera和荔枝蝽Tessaratoma papillosa发育过程中的JH滴度变化并比较成虫草地贪夜蛾和眉斑并脊天牛Glenea cantor雌雄的JH滴度差异,发现草地贪夜蛾幼虫发育阶段的JHⅡ和JHⅢ滴度变化趋势不同于荔枝蝽的JHSB和意大利蜜蜂的JHⅢ滴度变化趋势,而草地贪夜蛾的JH I滴度变化趋势与荔枝蝽的JHSB和意大利蜜蜂的JHⅢ滴度变化趋势是一致的;成虫眉斑并脊天牛雌雄之间的JHⅢ滴度存在显著差异,草地贪夜蛾雌雄之间的JH I和JHⅡ滴度存在显著差异,但草地贪夜蛾雌雄之间的的JHⅢ滴度无显著差异。结果表明,在具有多种JH(JH I,JHⅡ和JHⅢ)的草地贪夜蛾中,JHⅠ可能在调控幼虫期变态发育中有显著优势的趋势,而JH I和JHⅡ比JHⅢ在调控成虫期的生殖行为中可能具有显著优势。

关键词：保幼激素种类分布滴度手性构型

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媒介取样结合离子迁移谱快速检测蔬菜中的农药多残留

媒介取样结合离子迁移谱快速检测蔬菜中的农药多残留

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作者：梅勇广西大学

学位级别：硕士

本文主要利用田间媒介取样结合离子迁移谱(IMS)等农药残留快速检测技术建立蔬菜中的农药多残留的快速检测方法。通过探究载玻片介质和蔬菜间的农药残留量的关系,实现对黄瓜和番茄中农药初始残留浓度的快速检测。首先,在喷雾塔的水平均... 详细信息

本文主要利用田间媒介取样结合离子迁移谱(IMS)等农药残留快速检测技术建立蔬菜中的农药多残留的快速检测方法。通过探究载玻片介质和蔬菜间的农药残留量的关系,实现对黄瓜和番茄中农药初始残留浓度的快速检测。首先,在喷雾塔的水平均匀施药条件下,利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析载玻片和蔬菜中33种农药初始残留浓度的关系,根据两者之间的关系建立一个公式模型,根据该公式模型可以通过载玻片中的农药初始残留浓度推算出蔬菜中的初始残留浓度。其次,进行了田间试验对该公式模型进行了验证和优化。最后,将田间载玻片样品经过前处理后结合离子迁移谱等快速检测技术进行分析,通过该方法可以快速分析蔬菜中的农药多残留。利用UPLC-MS/MS对33种常用的农药进行检测。33种农药的检出限(LOD)范围在0.01-3.1μg/kg之间、定量限(LOQ)范围在0.03-9.3μg/kg之间。对Qu ECh ERS前处理方法中萃取溶剂的种类,除水剂配比、净化剂的种类和用量进行了优化,其次对黄瓜、西红柿和上海青三种样品进行10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg三个浓度水平的添加回收试验。结果显示,33种农药的回收率在70.1%-113.7%范围内,相对标准偏差在0.3%-18.3%范围内,符合残留分析的检测要求。研究两种载玻片和三种蔬菜中农药初始残留浓度之间的关系。33种农药在两种载玻片中和三种蔬菜中的初始残留浓度的比值范围在0.43-52.46之间,每种农药在特定的载玻片和特定的蔬菜中的比值是稳定的。根据这种关系,建立了一个相关的公式模型,通过田间试验对该公式进行了优化和验证,结果表明公式模型值和实际测量值具有较高的吻合度,R范围在0.927-0.983之间。建立了一种载玻片快速前处理方法和IMS检测相结合的快速检测方法,评估了载玻片-IMS方法在真实田间样本分析中的适用性。研究了10种农药标准物质在IMS分析方法中的线性方程、LOD、LOQ。将载玻片放入乙腈中进行简单的萃取以释放农药,检测分析后可以直接获得载玻片表面的农药残留浓度。将载玻片测得的数据代入公式中,得出的模型值和实际测量值吻合度良好。建立了载玻片-速测卡的方法测定啶虫脒、吡虫啉和二嗪磷三种农药残留,该方法与传统的速测卡相比,消除了基质效应,避免了假阳性和假阴性的结果。载玻片-IMS方法快速、灵敏、成本低廉,可进行现场应用。此方法被验证可以简便,快速且有效的预测在最高风险点时黄瓜和番茄中的农药残留浓度,大大降低了蔬菜样品处理过程中基质效应的影响。同时可以结合不同的检测技术,应用范围广泛,降低了检测的技术性。提供了一种即时监测,可进行大范围推广的全新快速检测思路。

关键词：载玻片初始残留浓度公式模型离子迁移谱

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SpfAKH及其受体SpfAKHR基因在草地贪夜蛾生殖和氯虫苯甲酰胺敏感性中的功能分析

SpfAKH及其受体SpfAKHR基因在草地贪夜蛾生殖和氯虫苯甲酰胺敏感...

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作者：谭奇美广西大学

学位级别：硕士

草地贪夜蛾是世界范围内造成重大经济损失的破坏性和侵袭性很强的害虫之一。草地贪夜蛾寄主范围广、繁殖能力强、危害程度重、防控难度大和抗药性更容易形成。杀虫剂的密集和频繁使用导致草地贪夜蛾的杀虫剂抗性问题日益严重。此前的研... 详细信息

草地贪夜蛾是世界范围内造成重大经济损失的破坏性和侵袭性很强的害虫之一。草地贪夜蛾寄主范围广、繁殖能力强、危害程度重、防控难度大和抗药性更容易形成。杀虫剂的密集和频繁使用导致草地贪夜蛾的杀虫剂抗性问题日益严重。此前的研究表明,激脂激素（AKH）及其受体基因在昆虫能量代谢和繁殖等重要生理过程中具有重要作用,此外激脂激素（AKH）及其受体基因还参与昆虫对杀虫剂的抗性。然而,AKH信号通路介导氯虫苯甲酰胺耐药的分子机制以及AKH信号通路在草地贪夜蛾成虫生殖这一耗能活动中的作用尚不清楚。基于此,本文以草地贪夜蛾为研究对象,初步探究了Spf AKHR基因在草地贪夜蛾生殖中的作用。此外,本文还以氯虫苯甲酰胺为模式药物,研究了氯虫苯甲酰胺胁迫下草地贪夜蛾Spf AKH和Spf AKHR基因的响应模式,探究了Spf AKH和Spf AKHR基因调控草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺敏感性的作用机制。主要结果如下:1.首次扩增获得草地贪夜蛾Spf AKHR基因的ORF全长,Gen Bank登录号为OL614005。全长为1197bp,编码399个氨基酸,分子质量约为45.14365KDa,p I为9.55,没有信号肽断裂。Spf AKHR包含7个高度保守的跨膜结构域,为典型的G蛋白偶联受体（GPCR）。系统发育分析结果表明,草地贪夜蛾与同属鳞翅目的烟草天蛾和家蚕亲缘关系最近,AKHR氨基酸序列相似度分别为89.45%和88.19%,表明鳞翅目昆虫的AKHR在进化上保守性较好。利用q PCR分析了Spf AKH和Spf AKHR基因在草地贪夜蛾不同发育阶段中的表达特点,结果表明Spf AKH和Spf AKHR基因在草地贪夜蛾不同发育阶段中均广泛表达。Spf AKHR在雄性成虫中表达量最高,在1龄幼虫中表达量最低。Spf AKH在卵中表达量最高,在6龄幼虫中表达量最低。2.为了进一步探究Spf AKHR基因在草地贪夜蛾生殖中的作用,基于饥饿胁迫处理和RNA干扰研究了Spf AKHR基因在草地贪夜蛾生殖中的功能。结果表明,饥饿6 h可显著诱导Spf AKHR表达上调。进一步研究发现沉默Spf AKHR基因可显著增加草地贪夜蛾成虫的脂质蓄积,且显著减缓草地贪夜蛾成虫卵巢发育,但不能减缓精巢的发育。以上结果表明Spf AKHR基因在草地贪夜蛾雌成虫生殖中发挥了重要作用。3.毒理学生物测定结果表明AKH信号参与了草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感性,因为氯虫苯甲酰胺与硫氯酚（AKH信号通路中关键酶的抑制剂）联合使用显著增加了草地贪夜蛾的死亡率。氯虫苯甲酰胺显著诱导草地贪夜蛾10种细胞色素P450单加氧酶（P450s）、Spf AKH和Spf AKHR的表达。RNA干扰Spf AKHR显著降低P450含量,下调3个P450基因（Spf CYP6B50、Spf CYP321A9和Spf CYP9A58）的表达,降低草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺的耐药性。局部应用AKH肽可显著提高P450含量,上调5个P450基因（Spf CYP321A9、Spf CY321A8、Spf CYP321A10、Spf CYP321A7和Spf CYP6AB12）的表达,增强草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺的耐药能力。氯虫苯甲酰胺胁迫还能显著诱导草地贪夜蛾保幼激素Ⅰ（JHⅠ）、保幼激素Ⅱ（JHⅡ）、保幼激素Ⅲ（JHⅢ）滴度差异性增加。以上结果表明Spf AKH和Spf AKHR基因通过调节P450基因表达和P450酶含量在增强草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺的抵抗方面发挥重要作用,还表明JHⅠ、JHⅡ、JHⅢ也可能参与草地贪夜蛾对氯虫苯甲酰胺的抵抗过程。这些研究结果为害虫抗药性调控和草地贪夜蛾控制策略提供了理论参考。

关键词：草地贪夜蛾激脂激素激脂激素受体生殖 P450 氯虫苯甲酰胺

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保幼激素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及蜕皮激素对草地贪夜蛾发育级联影响研究

保幼激素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及蜕皮激素对草地贪夜蛾发育级联影响研究

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作者：廖树成广西大学

学位级别：硕士

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)由于其迁飞能力强,繁殖速度快,寄主植物多,抗性程度高等特点被认为是一种超级害虫。当前的研究表明,保幼激素(JH)和蜕皮激素(20E)共同调控昆虫的生长发育,繁殖与变态等一系列生理活动。草地贪夜蛾体... 详细信息

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)由于其迁飞能力强,繁殖速度快,寄主植物多,抗性程度高等特点被认为是一种超级害虫。当前的研究表明,保幼激素(JH)和蜕皮激素(20E)共同调控昆虫的生长发育,繁殖与变态等一系列生理活动。草地贪夜蛾体内含有20E和3种不同种类的JH(JH I、JH II、JH III),然而,不同种类的JH与20E在协调草地贪夜蛾生命周期中的相互作用尚不明确。在本研究中,利用高精度的UPLC-MS/MS检测了草地贪夜蛾JH和20E水平的变化,初步了解不同种类的JH与20E在草地贪夜蛾的作用,并通过外源增加JH与20E探究其在草地贪夜蛾中对维持幼虫状态,启动化蛹程序以及羽化后卵巢发育的作用,最后采用q RT-PCR技术检测20E的受体和应答基因转录水平,初步探究不同JH对20E的作用机制。1.建立了草地贪夜蛾体内20E的UPLC-ESI-Qq Q检测方法,对20E进行准确的定性定量。结果表明该方法的检出限(LOD)为0.4 ng/m L,定量限(LOQ)为1.2 ng/m L,回收率为97-106%出峰时间为1.27 min,此方法灵敏度强、回收率高,重复性好,满足痕量分析要求。2.测定草地贪夜蛾不同龄期JH和20E的滴度,确定了每个阶段主要存在的JH种类。JH I在一龄幼虫时滴度最高达到5.14 ng/g,随着龄期增加滴度不断下降,在三四五龄时维持在0.5-1.0 ng/g之间,随后下降到检测水平之下(LOQ生殖器官的成熟。本研究初步探究了JH和20E如何调控草地贪夜蛾幼虫蜕皮,化蛹羽化和繁殖之间的内在机制,一方面有利于增强对草地贪夜蛾体内各类型JH保守性及功能多样性的认识,另一方面草地贪夜蛾作为重要的农业害虫,以具体JH类型以及JH和20E受体为靶标开发新型害虫药剂提供重要的理论基础,为草地贪夜蛾控制策略提供新见解。

关键词：草地贪夜蛾 JH 20E 蜕皮化蛹羽化

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聚乙二醇溶胶凝胶在农药多残留检测及农药协同增效作用中的应用与研究

聚乙二醇溶胶凝胶在农药多残留检测及农药协同增效作用中的应用与...

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作者：陈韦尾广西大学

学位级别：硕士

农药的利用率低促使农药的过量应用间接造成了蔬菜上农药残留问题日益严重。如何方便快捷的检测蔬菜上的农药残留,开发出利用率更高的农药产品一直是国内外研究学者们所关注的问题。本文选取聚乙二醇为前驱体制作强极性的溶胶凝胶,把纤... 详细信息

农药的利用率低促使农药的过量应用间接造成了蔬菜上农药残留问题日益严重。如何方便快捷的检测蔬菜上的农药残留,开发出利用率更高的农药产品一直是国内外研究学者们所关注的问题。本文选取聚乙二醇为前驱体制作强极性的溶胶凝胶,把纤维布作为涂布底物,使溶胶凝胶涂布到纤维布上,将聚乙二醇溶胶凝胶纤维布和截取的固相萃取柱通过磁力搅拌珠固定在一起,使得纤维布在整个萃取过程中能够在磁力搅拌器作用下自动搅拌。利用了高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法结合磁力搅拌FPSE（Fabric Phase Sorptive Extraction）技术,同时对番茄,黄瓜,白菜中48种农药进行残留检测。对萃取过程中的条件进行了一系列的优化,最终得出当磁力搅拌器的转速为1500 rpm/min、磁力搅拌器的搅拌时长为25 min、样品中不添加氯化钠、不调整样品溶液的p H、解吸时分别使用500μL乙酸乙酯和丙酮各进行时长为5 min的解吸时,得到了最佳的萃取效果。对目标农药进行方法学验证,48种农药的方法检出限（LOD）范围在0.014～6.280ng/g;对番茄、黄瓜、白菜三种样品进行10 ng/g、50 ng/g、100 ng/g三个水平的添加回收试验,结果表明,回收率范围在71.4%～99.8%,相对标准偏差（RSD）均小于7.8%,符合残留分析检测要求。此外,将聚乙二醇溶胶凝胶与农药按适当比例混合添加后,观察到溶胶凝胶利用自身的多羟基特性作为一个“桥梁”连接着农药和叶片的角质层,增强了农药在作物叶片上的附着力。结果表明,加入溶胶凝胶之后的农药结构更加紧凑,具有规则的六边形微观结构,在不同的浓度处理下与叶片的接触角减少了5.6～7°,农药的粘附性能提高了26%,72小时内叶片上的农药持留量明显增加,害虫的死亡速度加快,死亡率增加了40%。本研究证明了强极性的聚乙二醇溶胶凝胶纤维布对蔬菜上中低极性农药进行萃取是可行的。同时对萃取过程中的条件和仪器参数进行了系统的研究和优化,结果表明该检测方法特异性强,重现性好,灵敏度高。溶胶凝胶还是一种良好的农药助剂,在农药中添加溶胶凝胶之后,增加了农药粘附性,减少了农药在径流时的损失,农药的使用量也随之降低。因此,溶胶凝胶在目标分析物的吸附萃取、提高农药利用率和防治害虫方面具有很大的应用潜力。

关键词：聚乙二醇溶胶凝胶农药残留织物相吸附萃取农药利用效率农药粘附性

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防除大薸和水葫芦除草剂的筛选及环境安全性评估

防除大薸和水葫芦除草剂的筛选及环境安全性评估

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作者：陈兆杰广西大学

学位级别：硕士

Eichhornia crassipes(Mart.)Solms,also known as water hyacinth,is a perennial herb.water hyacinth originated from South America,has invaded more than 60 countries and regions in the world.It has been badly threatened to ecological environment,agriculture,livestock and health of citizen and waterway transportation.It is one of the most serious invasive aquatic plants in the world.Pistia stratiotes Linn,also called Water Lettuce,is a perennial herb,water hyacinth originated from South America-Brazil,has been distributed in tropical,subtropical regions and affected seriously,such as the East China and South China.It has caused great harm to the ecological environment,the water conservancy irrigation and the use of the waterway,is listed for 100 most dangerous invasive species in China with water hyacinth.In order to screen the low toxicity and high efficiency herbicides in controlling the water lettuce and water hyacinth and assess the environmental safety after using.The study is consist of four main section to discuss,including the result of herbicides screening and LC50 determination,determination of acute toxicity on zebrafish and selenastrum capricoinutum and environmental safety assessment of herbicide,digestion of herbicides in natural light conditions in water and the dynamic distribution of herbicide in water lettuce and water hyacinth,qualitative and quantitative analysis of the metabolites of herbicides in water under the natural light conditions.The conclusion are as follows:1.mesotrione,bentazone and fomesafen were screened as the low toxicity,rapid and high efficacy herbicides of controlling against water lettuce and water hyacinth,And the toxicity test result of water hyacinth show that after foliar herbicide application 10 d,the inhibitory effect of 3 herbicides on the new root of water hyacinth was stronger than other parts,which mesotrione has the best inhibitory effect on the new root of water hyacinth with value of LC50 is 14.22 mg/kg,0.32 times of the value of LC50 of bentazone;But the mesotrione

关键词： water Lettuce water hyacinth mesotrione bentazone fomesafen acute toxicity degradation metabolite

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灭草松的水解和光解特性研究

灭草松的水解和光解特性研究

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作者：宋世明广西大学

学位级别：硕士

本文以灭草松为研究对象,建立了一种快速检测液相样品中灭草松的分析方法,研究了灭草松在室内的水解和光解特性;比较了在不同条件下灭草松水解和光解的规律,利用UPLC-QTOF-MS对灭草松的水解和光解产物进行分析鉴定,初步解释灭草松的水... 详细信息

本文以灭草松为研究对象,建立了一种快速检测液相样品中灭草松的分析方法,研究了灭草松在室内的水解和光解特性;比较了在不同条件下灭草松水解和光解的规律,利用UPLC-QTOF-MS对灭草松的水解和光解产物进行分析鉴定,初步解释灭草松的水解和光解机理;利用LC-MS/MS对灭草松水解和光解产物6-羟基苯达松的含量进行检测;从而发现有利于灭草松在液相中的降解条件。本研究结果有利于进一步了解灭草松在环境中的迁移和转化过程,为指导灭草松的合理使用及药后对环境的评价提供一定依据。主要研究结果如下所示。研究灭草松在不同pH、温度、表而活性剂、初始浓度和金属离子条件下的水解。结果表明:灭草松在pH4、7和9的条件下水解,其半衰期(T1/2)分别为87 d、77 d和58 d,说明灭草松水解速率随pH值的增大而加快;在温度为15℃、25℃、35℃和45℃的条件下水解,其T1/2分别为87 d、87 d、77 d和69 d,说明高温对灭草松的水解起促进作用,低温不利于灭草松的水解;在表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80和十二烷基磺酸钠(SDS)的条件下水解,其T1/2分别为63 d、99d、77d和99d,与对照组相比(T1/2=77d)吐温20有利于灭草松的水解,其它表面活性剂均对灭草松的水解起阻碍作用;在初始浓度为0.5 mg/L、1.0 mg/L和1.5 mg/L的条件下水解,其T1/2分别为63 d、77 d和87 d,说明浓度影响灭草松的水解,低浓度对灭草松的水解有利,高浓度则不利;在Cu2+的浓度为1 mg/L、5mg/L和10 mg/L的条件下水解,其T1/2分别为53 d、50 d和37 d,与对照组相比,Cu2+对灭草松的水解起促进作用,且随着Cu2+浓度的增加而加快。在Fe3+的浓度为1 mg/L、5 mg/L和10 mg/L的条件下水解,其T1/2分别为63 d、53 d和46 d,与对照组相比,Fe3+对灭草松的水解起促进作用,且随着Fe3+浓度的增加而加快。研究灭草松在不同pH、表面活性剂、初始浓度、有机溶剂和金属离子条件下的光解(500 w和300 w高压汞灯下)。结果表明:灭草松在pH4、7和9的条件下光解,其T1/2在2.3h～5.1h之间,碱性对灭草松的光解起促进作用;在表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80和SDS的条件下光解,其T1/2在5.0 h～7.5 h之间,不同的表面活性剂对灭草松的光解具有光淬灭作用;在初始浓度为0.5 mg/L、1.0 mg/L和1.5 mg/L条件下光解,其T1/2在2.3 h～5.8 h之间,初始浓度与灭草松的光解速率呈负相关;在甲醇、乙腈、丙酮和乙酸乙酯的含量分别为10%、20%和30%的的条件下光解,其T1/2在3.2h～12.2h之间,甲醇和乙酸乙酯对灭草松的光解具有光催化作用,乙腈和丙酮则具有光淬灭作用;在Cu2+和Fe3+的浓度均为1 mg/L、5 mg/L和10 mg/L的条件下水解,其T1/2在1.6h～4.4h之间,Cu2+和Fe3+都对灭草松的光解起促进作用;与此同时,当灭草松在光源为500 w高压汞灯、300 w高压汞灯和氙灯的条件下的光解时,结果表明:灭草松在500 w高压汞灯下的光解速率最快,在氙灯下的光解速率最慢。经UPLC-QTOF-MS分析鉴定,灭草松水解时的降解产物主要为6-羟基苯达松或8-羟基苯达松;灭草松光解时的降解产物主要为N-甲基苯达松和6-羟基苯达松或8-羟基苯达松;但对于降解产物具体是6-羟基苯达松还是8-羟基苯达松,有待进一步研究。灭草松在不同条件下水解,均能检测出6-羟基苯达松,其浓度随灭草松的水解先缓慢增加,增加至一定浓度后,随灭草松的水解而逐渐减少,直至低于检出浓度(0.001 mg/L),范围在0.001 mg/L～0.009 mg/L之间;灭草松在不同的条件下光解,其光解产物6-羟基苯达松仅在乙酸乙酯、甲醇和不同表面活性剂中存在,浓度同样呈现先增加后减少趋势,其浓度在0.001 mg/L～0.008 mg/L之间。

关键词：灭草松光解水解 6-羟基苯达松

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广西柳州市柑橘黄龙病综合防控存在的问题及对策研究

广西柳州市柑橘黄龙病综合防控存在的问题及对策研究

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作者：刘晓彬广西大学

学位级别：硕士

柑橘产业是柳州市农业的主导产业之一,近年来柑橘产业发展较快,2018年柳州市柑橘种植面积约5.7万公顷,种植面积和产量均占水果总量的77%左右,主要品种包括蜜桔、砂糖橘、金桔、椪柑、橙类、柚类等。柑橘黄龙病是影响柳州市柑橘产业发展... 详细信息

柑橘产业是柳州市农业的主导产业之一,近年来柑橘产业发展较快,2018年柳州市柑橘种植面积约5.7万公顷,种植面积和产量均占水果总量的77%左右,主要品种包括蜜桔、砂糖橘、金桔、椪柑、橙类、柚类等。柑橘黄龙病是影响柳州市柑橘产业发展的主要因素之一。因此,加强对柳州市柑橘黄龙病综合防控存在的问题及对策研究十分必要且迫切。针对柑橘黄龙病尚无特效治疗药剂,也没有抗(耐)病品种可供使用。“防木虱、砍病树、种无病苗”(俗称“三板斧”)是目前最为有效的防治手段。本文根据国内外研究现状,总结分析了当前柑橘黄龙病的主要防治手段及其优缺点。通过查阅资料,了解柳州市柑橘黄龙病发生概况,重点对柳州市柑橘黄龙病综合防控示范区建设情况进行分析,总结近年来柳州市开展柑橘黄龙病综合防控的主要做法,分析存在的问题,主要包括政策法规执行力度不足、缺乏高效的组织管理职能、财政投入仍不足且资金到位较晚、全面开展普查难度大、无病苗木繁育体系建设起步晚、柑橘苗木市场监管仍不到位、不能及时高效清除病树、缺乏高素质的专业化种植管理队伍等。探究应对柳州市柑橘黄龙病综合防控存在问题的对策,从法律保障、政策保障、财政保障、技术保障、示范建设等方面提出对策,以期建立起柑橘黄龙病防控长效机制,有效控制黄龙病所带来的严重危害,维持果园在较低黄龙病发病水平条件下实现较长时期正常投产,并获得较好的经济效益。

关键词：柳州市柑橘黄龙病柑橘木虱综合防控

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