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作者：高见红延边大学

学位级别：硕士

为了进一步证明活性氧(ROS，reactive oxygen species)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。本试验以昆明小鼠1-细胞期胚胎为实验对象，以CZB培养液为基础液在不同发育阶段添加外源性ROS，体外培养发育至囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，... 详细信息

为了进一步证明活性氧(ROS，reactive oxygen species)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。本试验以昆明小鼠1-细胞期胚胎为实验对象，以CZB培养液为基础液在不同发育阶段添加外源性ROS，体外培养发育至囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，分别观察染色体数目、相对长度的变化。实验结果表明：体内与体外CZB培养的胚胎发育至囊胚、扩张囊胚阶段的染色体数目分别是39.00、38.43和42.47、39.56。经统计分析，体内与体外CZB培养的胚胎染色体数目无显著性差异;在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时，体外培养的胚胎染色体相对长度比体内发育至囊胚、扩张囊胚阶段的短。在体外CZB培养的不同时期添加外源性ROS，胚胎发育至囊胚、扩张囊胚阶段，观察其染色体数目和染色体相对长度。结果显示：0～72h组发育至扩张囊胚阶段的胚胎染色体数目与对照组的有显著性差异(P＜0.05)，而其它各处理组发育至囊胚、扩张囊胚阶段的染色体数目之间均无显著性差异;在体外培养的不同时期添加外源性过氧化氢(HO)，胚胎发育至囊胚、扩张囊胚阶段的染色体相对长度比对照组的短。说明经过氧化氢处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育的胚胎的染色体数目没有差异，而染色体相对长度发生了变化。

关键词：活性氧早期胚胎染色体数目相对长度

小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本制备的研究

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小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本制备的研究

作者：杨薇延边大学

学位级别：硕士

染色体是生物遗传的物质载体，在生物的世代相传过程中表现出高度的稳定性和物种特异性。通过染色体分析，可为研究物种的起源进化、品种的形成和基因的定位提供细胞遗传学方面的基本资料。本实验以昆明小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球为... 详细信息

染色体是生物遗传的物质载体，在生物的世代相传过程中表现出高度的稳定性和物种特异性。通过染色体分析，可为研究物种的起源进化、品种的形成和基因的定位提供细胞遗传学方面的基本资料。本实验以昆明小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球为研究对象，以CZB培养液为基础培养液，采用空气干燥法制备单卵裂球的染色体标本。实验中分别添加不同浓度的两种纺锤体阻断剂——秋水仙素和长春花碱进行不同阻断培养时间的实验以确定阻断剂的最佳处理浓度和时间，并以不同低渗液对胚胎进行低渗处理以确定最佳的低渗液种类，从而获得了理想的实验参数，进一步对得到的中期分裂相进行了分级评定。实验结果如下：1、在确定秋水仙素不同处理浓度和时间对小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数影响的实验中，经统计分析，阻断培养2小时组中0.6μg／ml浓度组与其他三组差异显著(0.2μg／ml组、0.4μg／ml组和0.8μg／ml组);阻断培养4小时组中0.4μg／ml浓度组与其他三组差异显著;阻断培养6小时组中0.6μg／ml浓度组与其他三组差异显著;阻断培养8小时组中0.4μg／ml浓度组与其他三组差异显著(P＜0.05)。根据实验的实际情况，适宜制备小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本的秋水仙素的处理浓度和时间是0.6μg／ml和6小时。2、在确定秋水仙素不同处理浓度和时间对小鼠8-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数影响的实验中，经统计分析，阻断培养2小时组中四个浓度组差异均不显著;阻断培养4小时组中0.2μg／ml浓度组与其他三组差异显著;阻断培养6小时组中四个浓度组差异均不显著;阻断培养8小时组中0.4μg／ml浓度组与其他三组差异显著(P＜0.05)。根据实验的实际情况，适宜制备小鼠8-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本的秋水仙素的处理浓度和时间是0.2μg／ml和6小时。3、在确定长春花碱不同处理浓度和时间对小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数影响的实验中，经统计分析，阻断培养0.1μg／ml浓度组中10小时组与其他三组差异显著(4小时组、6小时组和8小时组);阻断培养0.3μg／ml浓度组中8小时组和10小时组间差异不显著，但与其他两组差异显著;阻断培养0.5μg／ml浓度组中10小时组与6小时组差异不显著，而与其他两组差异显著;阻断培养0.7μg／ml浓度组中8小时组与其他三组差异显著(P＜0.05)。根据实验的实际情况，适宜制备小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本的长春花碱的处理浓度和时间是0.1μg／ml和8小时。4、在确定长春花碱不同处理浓度和时间对小鼠8-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数影响的实验中，经统计分析，阻断培养0.1μg／ml浓度组中10小时组与其他三组差异显著;阻断培养0.3μg／ml浓度组中8小时组和10小时组间差异不显著，但与其他两组差异显著;阻断培养0.5μg／ml浓度组中10小时组与其他三组差异显著;阻断培养0.7μg／ml浓度组中10小时组与其他三组差异显著(P＜0.05)。根据实验的实际情况，适宜制备小鼠8-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本的长春花碱的处理浓度和时间是0.1μg／ml和10小时。5、在确定不同种类低渗液处理对小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数影响的实验中，经统计分析，0.45％氯化钠低渗液组与其他两组(0.5％柠檬酸钠和0.35％氯化钾)差异显著(P＜0.05)。低渗液选用0.45％氯化钠时，低渗效果优于选用0.5％柠檬酸钠和0.35％氯化钾的。6、在利用最佳参数制备小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球染色体标本时，经统计分析，两种阻断剂的作用效果差异不显著;而在制备小鼠8-细胞期胚胎单卵裂球染色体时阻断剂选用长春花碱的效果优于秋水仙素的(P＜0.05)。7、秋水仙素组和长春花碱组小鼠4、8-细胞胚胎单卵裂球染色体标本制备质量分别为：2.5、2.7、2.4、1.9。

关键词：小鼠单卵裂球染色体制备秋水仙素长春花碱

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茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

作者：王洋延边大学

学位级别：硕士

细胞凋亡(Apoptosis)是生物体内自发发生的细胞生理性的死亡,细胞正常凋亡对维持生物体正常生长发育和维持细胞内环境稳态的作用,细胞异常凋亡能够引发疾病,如癌症和肿瘤等。有报道指出在体外培养的细胞中添加抗氧化剂能够抑制细胞凋亡... 详细信息

细胞凋亡(Apoptosis)是生物体内自发发生的细胞生理性的死亡,细胞正常凋亡对维持生物体正常生长发育和维持细胞内环境稳态的作用,细胞异常凋亡能够引发疾病,如癌症和肿瘤等。有报道指出在体外培养的细胞中添加抗氧化剂能够抑制细胞凋亡,茶多酚(Tea polyphenols,TP)是一种天然抗氧化剂,具有多种生物学功能,抗氧化能力比其他抗氧化剂抗氧化能力强很多倍,对体外培养细胞主要用于癌细胞和肿瘤细胞的研究,且对抑制癌细胞和肿瘤细胞的生长作用效果显著,研究表明,TP具有抗癌和抗肿瘤的作用,但是在体细胞培养液中添加TP对体外培养鼠胎儿成纤维细胞凋亡效果的影响尚未见报道。[目的]：本试验主要通过体外培养MEF细胞,用不同浓度的TP培养液处理细胞,研究不同浓度的茶多酚培养液对鼠胎儿成纤维细胞存活率和细胞形态变化的影响,并应用反转录方法检测抗凋亡基因Bcl-2基因、促凋亡Bax基因和促凋亡基因Casase-3从分子水平上检测基因表达量的变化,用来确定天然抗氧化剂茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡效果的影响。[方法]：1.取妊娠12.5天昆明白母鼠,热消化法分离原代细胞进行培养,差速贴壁法纯化细胞,传至第3代,绘制细胞生长曲线,检测细胞活力。2.用含有不同浓度的茶多酚培养液培养细胞,分别培养24h、36h、72h、96h,倒置显微镜观察细胞形态,用MTT法进行细胞存活率的检测,比较添加不同浓度茶多酚培养液对细胞存活率的影响。3.用不同浓度的茶多酚培养液处理细胞,培养72h,分别提取细胞总RNA,进行RT-PCR反应,反转录合成目的基因Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因,琼脂糖凝胶电泳对反应产物进行检测,使用软件进行条带灰度值的检测,比较基因的相对表达量。[结论]：通过细胞生长曲线确定了3代细胞适合试验用,不同浓度的茶多酚培养液处理细胞后对鼠胎儿成纤维细胞生存率和形态的影响为：当茶多酚浓度低于100mg/L时,MTT结果为72h时,对细胞促进作用最明显,96h时,细胞生存率低于72h时,可能是细胞正常生长的结果。对鼠胎儿成纤维细胞的生长具有促进作用,并且细胞形态没有发生明显的变化,通过实验结果,当浓度为40mg/mL时促进作用略微明显,高于细胞对照组,但是没有显著差异,当细胞浓度高于100mg/mL时对细胞生长具有抑制作用,从形态学观察出细胞出现调亡现象。通过反转录结果表明在Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子途径上没有什么影响,因此,TP各个浓度处理组中基因相对表达量没有显著性差异。证明了适宜浓度TP对MEF细胞生长具有正向的保护作用但是在凋亡基因bcl-2、bax和caspase-3表达途径上无影响,其他机理还有待进一步研究。

关键词：细胞凋亡茶多酚鼠胎儿成纤维细胞反转录

热应激条件下SD大鼠生理生化指标变化分析及转录组水平差异表达基因筛选

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热应激条件下SD大鼠生理生化指标变化分析及转录组水平差异表达基...

作者：窦金焕延边大学

学位级别：硕士

热应激不仅严重的威胁人类的生存,而且也严重制约受到热应激影响区域的畜牧业,尤其是奶业的发展。以热应激反应特征指标变化规律为出发点,挖掘热应激反应关联基因,深入探求动物机体热应激调节机制,并及时制定适合实际生产的行之有效的... 详细信息

热应激不仅严重的威胁人类的生存,而且也严重制约受到热应激影响区域的畜牧业,尤其是奶业的发展。以热应激反应特征指标变化规律为出发点,挖掘热应激反应关联基因,深入探求动物机体热应激调节机制,并及时制定适合实际生产的行之有效的抗热应激管理策略和选种策略,对减轻动物热应激损伤、减少热应激造成的经济损失意义深远。因直接以奶牛为研究对象存在试验条件不可控、个体遗传背景差异大及成本高等缺点,本研究目的在于以SD大鼠为热应激反应模式动物,获得在可控的热应激条件下,热应激反应相关生理、生化指标及转录组水平基因差异表达的变化规律,筛选热应激敏感生化指标、敏感基因,获得参与热应激调节的重要生理、应激应答通路,探索热应激条件下机体的调节机制,为奶牛热应激相关研究奠定基础。本研究选用28只体重约180-210g雌性8周龄SD大鼠作为研究对象,随机分配到热应激组(HS组)(42℃、Relative humidity (RH)50%)及对照组(NC组)(25℃、RH50%)。对大鼠进行不同时间长度的热应激处理(***60min、 HS120min),分别检测大鼠血液、肝脏、肾上腺、腿肌等组织相关生化指标含量变化;选取热应激组HS120min处理及NC组SD大鼠的血液、肝脏和肾上腺组织进行转录组测序筛选差异表达基因。研究结果表明：1)环境温度为42℃、RH50%条件下,SD大鼠出现严重热应激,但无致死现象发生。42℃条件下分别HS30min、HS60min及HS120min时,大鼠体温由37.13℃度极显著上升至39.70℃、39.63℃及40.48℃,随后,体温呈持续高温状态;2) 42℃、RH50%的热应激情况下,应激HS120min时腿肌组织皮质酮(CORT)含量极显著高于NC组、HS30min组及HS60min组,肾上腺组织CORT含量显著高于NC组,而肺脏、心脏、肾脏、胃脏四个组织中CORT含量随应激时间延长呈现极显著下降趋势;随着热应激时间延长,腿肌组织多巴胺(DA)含量逐渐上升,至HS120min时DA含量极显著高于NC组水平。对HS120min时血液和腿肌组织生化指标热敏感性分析发现,GH (Growth hormone)是血液中对热刺激最为敏感的生化指标,CORT是腿肌组织中最为敏感的热应激生化指标。3)分别筛选到血液、肝脏及肾上腺组织差异表达基因98、3551和4484个,针对三个组织差异表达基因进行GO和通路分析结果显示,主要富集在细胞代谢、DNA和蛋白损伤修复及应激应答等功能,富集的通路主要为昼夜节律变化、固醇类激素合成通路、MAPK信号通路和PPAR信号通路及抗原加工呈递通路。本研究获得的热敏感生化指标以及热应激条件下组织差异表达基因等结果,揭示了热应激条件下,体温升高为大鼠最为直观的生理表现,为维持稳态,HPA轴被激活,相关激素和蛋白类生化指标含量发生变化,究其原因归结于热刺激诱导大鼠体内相关温度应激应答、蛋白损伤修复、激素合成等通路相互作用,共同减轻热应激损伤的生命机制。本研究将为畜禽热应激反应评定、热应激调节机制研究,乃至培育抗热应激品种提供基础数据。

关键词： SD大鼠热应激体温生理生化指标 RNA-seq 差异表达基因

小鼠早期胚胎内部活性氧水平与胚胎凋亡通路关系的研究

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小鼠早期胚胎内部活性氧水平与胚胎凋亡通路关系的研究

作者：马冬雪延边大学

学位级别：硕士

哺乳动物的胚胎在体外早期发育过程中会发生发育阻滞、降低胚胎发育率并影响胚胎质量,最终导致细胞凋亡,而活性氧类物质(如H2O2)是造成这种现象的原因之一。目前被人们熟知的主要细胞凋亡通路是死亡受体通路、线粒体通路及内质网通路,但... 详细信息

哺乳动物的胚胎在体外早期发育过程中会发生发育阻滞、降低胚胎发育率并影响胚胎质量,最终导致细胞凋亡,而活性氧类物质(如H2O2)是造成这种现象的原因之一。目前被人们熟知的主要细胞凋亡通路是死亡受体通路、线粒体通路及内质网通路,但Caspase-12是否参与活性氧引起的内质网应激所诱导胚胎凋亡过程仍不是很清楚,另一方面活性氧诱导小鼠早期胚胎发育凋亡过程中起主要作用的凋亡通路不明。因此本试验的目的是证实活性氧诱导通过内质网通路的胚胎凋亡是否有Caspase-12参与,并探讨不同活性氧水平及不同时期中凋亡通路的主次关系。试验设置了小鼠早期胚胎内部ROS水平低、中、高水平3个组,首先利用DCFH-DA法、TUNEL法验证分组的正确性(检测2-cell、4-cell及囊胚期),其次检测Caspase-12基因的表达,证实ROS诱导的小鼠早期胚胎凋亡是否有内质网通路参与,最后检测死亡受体通路的关键基因Caspase-8,线粒体凋亡通路的关键基因Caspase-9及Caspase-3的mRNA表达水平,探讨ROS诱导的胚胎凋亡过程中不同凋亡通路的主次关系。实验结果表明:体外组2-cell、4-cell及囊胚期胚胎的活性氧水平均高于体内组的胚胎,H2O2处理组的胚胎均显著高于其他两组(P<0.05),验证了分组的正确性。H2O2处理组的凋亡指数显著高于其他两组、总细胞数显著低于其他两组(P<0.05),进一步验证了随着ROS水平的升高不仅影响了影响了凋亡指数,从而影响了胚胎的质量,为后续更好的研究提供基础。其次检测内质网通路的启动基因Caspase-12的表达,证实了 Caspase-12参与活性氧引起的应激过程。另外,无论ROS水平的高低,2-cell、4-cell期H2O2组诱导凋亡基因表达上调且死亡受体通路中的Caspase-8基因mRNA表达量最高;囊胚期基因表达虽然随活性氧水平升高而增强,但mRNA表达量上并无主次之分。而相同活性氧水平下,体内组、体外组及H2O2组的caspase-8基因表达量最高。综上所述,Caspase-12参与活性氧引起的内质网通路应激过程;在相同活性氧水平条件下各时期均以死亡受体通路为主。在不同活性氧水平条件下,2-cell期及4-cell期以死亡受体通路诱导胚胎凋亡为主,而囊胚期三条凋亡通路并无主次之分。

关键词：活性氧小鼠早期胚胎凋亡通路凋亡基因

人血清白蛋白乳腺特异表达载体在延边奶山羊乳腺中瞬时表达的研究

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人血清白蛋白乳腺特异表达载体在延边奶山羊乳腺中瞬时表达的研究

作者：苑圆圆延边大学

学位级别：硕士

本实验对5月龄延边奶山羊进行了精氨酸、利血平等激素处理,使5月龄延边奶山羊在正常泌乳前得到一个泌乳周期,并对5月龄延边奶山羊分泌的乳汁进行了乳质分析,结果表明经过外源性激素诱导延边5月龄奶山羊产生的乳汁与经过妊娠的成年延边... 详细信息

本实验对5月龄延边奶山羊进行了精氨酸、利血平等激素处理,使5月龄延边奶山羊在正常泌乳前得到一个泌乳周期,并对5月龄延边奶山羊分泌的乳汁进行了乳质分析,结果表明经过外源性激素诱导延边5月龄奶山羊产生的乳汁与经过妊娠的成年延边奶山羊分泌的初乳相比较,蛋白质,乳糖等营养成分无显著差异。利用经外源性激素处理后可以分泌乳汁的5月龄延边奶山羊,在其一侧乳腺组织中注射入约100μ g的pBC-NE0-HSA质粒,经ELSA检测,在6h时分泌的乳汁发现开始表达目的基因,在10h左右达到最高,表达量达到86. μg/L,17h表达停止。说明在5月龄延边奶山羊乳腺中成功的检测到了目的基因的表达。本实验得出的结论有：1.5月龄延边奶山羊经过激素处理后可以分泌乳汁。2.经过比较,精氨酸比利血平更适合做诱导奶山羊泌乳的药物。3.外源性激素诱导5月龄延边奶山羊分泌的第1天-第7天的乳汁与经过妊娠的延边奶山羊同一时期分泌的乳汁比较,主要营养成分含量差异不显著。4.外源性激素诱导5月龄延边奶山羊分泌的第8天-第28天的乳汁与经过妊娠的延边奶山羊同一时期分泌的乳汁比较,主要营养成分含量差异显著。5.将乳腺特异表达载体pBC-NEO-HSA注射入奶山羊的乳腺中,成功的检测到了目的基因的表达,说明构建的载体可以在奶山羊的乳腺中重组合成HSA

关键词：乳质分析瞬时表达人血清白蛋白激素诱导延边5月龄奶山羊

FGF2对氧化应激小鼠卵母细胞抗氧化和糖代谢能力的影响

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FGF2对氧化应激小鼠卵母细胞抗氧化和糖代谢能力的影响

作者：李瑞冬延边大学

学位级别：硕士

碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor 2,FGF2)是一种成纤维细胞因子超家族中的一员,研究表明FGF2不仅具有神经细胞、组织细胞的修复作用,还对心肌、脑等细胞具有抵御氧化应激的作用。本实验旨在探究FGF2能否通过改善线粒... 详细信息

碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor 2,FGF2)是一种成纤维细胞因子超家族中的一员,研究表明FGF2不仅具有神经细胞、组织细胞的修复作用,还对心肌、脑等细胞具有抵御氧化应激的作用。本实验旨在探究FGF2能否通过改善线粒体的功能,以及通过PI3K-AKT1-HIF信号通路来改善有氧糖代谢途径,从而保护氧化应激卵母细胞,提高卵母细胞质量。本实验共分为对照组(0 ng/ml FGF2+0μmol/L HO)、HO组(250μmol/L HO+0 ng/ml FGF2)、抗氧化组(150 ng/ml FGF2+250μmol/L HO)三组。将收集的卵母细胞分别添加至三组培养液中培养24 h后,对各组细胞氧化应激标志物(ROS、MDA、8-OHd G)以及还原型谷胱甘肽(GSH)进行检测,验证FGF2对卵母细胞的氧化应激的影响;随后对卵母细胞的线粒体功能进行检测(线粒体膜电位、ATP、ADP、AMP、能荷);最后利用Westernblot和酶联免疫法对细胞中糖代谢通路PI3K-AKT-HIF以及糖代谢途径关键酶的活力进行检测。最终得到如下结果:1.卵母细胞内氧化应激标志物含量比较结果显示:8-OHd G含量,在三组间差异显著(P0.05);MDA含量,在三组间差异显著(P0.05)。***2对卵母细胞糖代谢酶活性的影响:对照组与抗氧化组的HK、6-PFK、PK酶活力均显著低于HO组,而PDK1结果则恰恰相反(P0.05),HK、PK酶活性仍显著低于对照组水平(P0.05)。结论:FGF2通过提高GSH的水平,减少氧化应激的产生,提高线粒体功能,使小鼠卵母细胞免受氧化应激的影响;而且通过修复PI3K/AKT-HIF通路,降低无氧酵解途径(EMP)酶的活力,促进糖有氧代谢途径(TCA)酶的活力,从而提高卵母细胞的质量。

关键词：小鼠卵母细胞氧化应激 FGF2 抗氧化糖代谢

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小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

作者：张日欣延边大学

学位级别：硕士

端粒酶作为生命的“生物钟”在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用,同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚... 详细信息

端粒酶作为生命的“生物钟”在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用,同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚(NT)早期端粒酶活性的变化特点,本研究对小鼠卵母细胞和体细胞核移植重构胚2-细胞,4-细胞,8-细胞,桑葚胚以及囊胚各阶段相对端粒酶活性变化规律。方法：依据PCR产物进行电泳,利用端粒酶重复序列扩增法(TRAP)-银染,电泳条带在成像系统下的光密度值,对总产品产量相对定量计算(TPG)。结果：1.阳性细胞对照标准条带中,相对端粒酶活性与细胞浓度呈正相关。2.小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及核移植胚胎各细胞期端粒酶检测为阳性。随胚胎分裂端粒酶活性呈上升趋势,在囊胚期达到最高。在体内受精胚胎中,合.子期(1-cell)相对端粒酶活性较高。3.核移植胚胎与体内受精胚胎比较在2-细胞相对端粒酶活性有差异(P0.05)。4.体内受精胚胎与核移植胚胎在各自胚胎发育过程中呈现相似的规律：2-细胞、4-细胞、8-细胞相对端粒酶活性差异不显著(P>0.05)。囊胚期相对端粒酶活性与各胚胎时期差异显著(P<0.05)。5.胚胎的单卵裂球相对活性呈总下降趋势到囊胚达最低。胚胎2-细胞期差异显著(P<0.05)。6.通过对体内受精胚胎与体细胞重构囊胚的胚胎时期计数,体内受精胚胎单卵裂球细胞数多于体细胞核移植胚胎的囊胚,二者呈显著性差异(P<0.05)。

关键词：体细胞克隆胚胎端粒酶活性端粒重复序列法(TRAP) 银染法

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黑熊核型研究

黑熊核型研究

作者：张颖延边大学

学位级别：硕士

为了从选种、疾病诊断等方面为黑熊的繁育与临床提供更为有效的细胞遗传学资料,本试验采用外周血淋巴细胞培养法制备染色体,分析了22头延边黑熊(公母熊各11头)的染色体及其核型,并通过BSG法(Barium hydroxide/saline/Giemsa氢氧化钡—... 详细信息

为了从选种、疾病诊断等方面为黑熊的繁育与临床提供更为有效的细胞遗传学资料,本试验采用外周血淋巴细胞培养法制备染色体,分析了22头延边黑熊(公母熊各11头)的染色体及其核型,并通过BSG法(Barium hydroxide/saline/Giemsa氢氧化钡—盐溶液—吉姆萨)与胰酶-EDTA法法分别对羊驼的C—分带和G—分带进行分析。结果表明: (1) 黑熊体染色体数目为2n=74,公熊核型为74,XY;母熊核型为74,XX.其中,1—8对常染色体为中间着丝粒染色体,9-36对常染色体为端部着丝粒染色体,X为中着丝粒染色体,Y为最小的为端部着丝粒染色体。 (2) C—带分析表明,阳性带分布于所有端着丝粒染色体的着丝粒部位,其余部位均浅染,中间着丝粒染色体和X染色体呈现弱阳性,Y染色体淡染。 (3) G—带分析表明,黑熊G带明暗相间,显现出不同的带纹。本实验发现黑熊的单倍体有96条阳性带纹,且黑熊每对染色体都有其独特的带纹特征,其带纹的数目和精细程度随着染色体长度的增加而增加。另外观察到了黑熊的三倍体与四倍体。

关键词：黑熊染色体核型 G-带 C-带

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延边黄牛体细胞克隆胚胎的核型分析

延边黄牛体细胞克隆胚胎的核型分析

作者：吴昊延边大学

学位级别：硕士

为了从细胞遗传学的角度研究延边黄牛体细胞克隆胚胎的染色体,了解其遗传学特性,以期克服克隆动物的生理缺陷,为延边黄牛的繁育提供更为有效的细胞遗传学资料。本试验采用传统的细胞遗传学方法,利用延边黄牛体细胞克隆6～8天后产生的囊... 详细信息

为了从细胞遗传学的角度研究延边黄牛体细胞克隆胚胎的染色体,了解其遗传学特性,以期克服克隆动物的生理缺陷,为延边黄牛的繁育提供更为有效的细胞遗传学资料。本试验采用传统的细胞遗传学方法,利用延边黄牛体细胞克隆6～8天后产生的囊胚制备染色体标本,分析延边黄牛体细胞克隆胚胎的染色体及其核型,以及通过BSG法(Barium hydroxide/saline/Giemsa氢氧化钡-盐溶液-吉姆萨)与胰酶-EDTA法分别分析其C-带和G-带。结果表明:(1)延边黄牛体细胞克隆胚胎染色体数目为2n=60,雄性核型为60,XY;雌性核型为60,XX。其中,1～29对常染色体为端部着丝粒染色体,,X为较大的亚中部着丝粒染色体,Y为较小的中部着丝粒染色体。(2)C-带分析表明,阳性区出现在所有常染色体着丝粒部位和Y染色体上。染色特征为所有常染色体的着丝粒部位被深染,臂为浅染:X染色体不出现C带阳性区,整个被浅染;Y染色体为半深染,着色程度介于常染色体着丝粒部位深染区与长臂及X染色体浅染区之间。(3)G-带分析表明,G带明暗相间,显现出不同的带纹。本实验发现延边黄牛体细胞克隆胚胎的单倍体有200条阳性带纹,且每对染色体都有其独特的带纹特征,其带纹的数目和精细程度随着染色体长度的增加而增加。

关键词：延边黄牛体细胞克隆胚胎染色体 C-带 G-带