检索结果-南通市图书馆

作者：童津津东北农业大学

学位级别：硕士

奶牛乳腺是乳汁合成及分泌的重要器官,乳腺的发育和泌乳功能调控与细胞结合和连接关系密切,其中钙粘连蛋白（E-cadherin）作为细胞连接和信号转导中的重要因子,在乳腺发育及泌乳过程中发挥一定的作用。但目前对乳腺早期发育结构形成及... 详细信息

奶牛乳腺是乳汁合成及分泌的重要器官,乳腺的发育和泌乳功能调控与细胞结合和连接关系密切,其中钙粘连蛋白（E-cadherin）作为细胞连接和信号转导中的重要因子,在乳腺发育及泌乳过程中发挥一定的作用。但目前对乳腺早期发育结构形成及相关信号转导途径的研究尚未全面进行。本研究目的在正确了解乳腺结构功能基础上,通过分子生物学手段揭示乳腺发育、泌乳及退化过程中E-cadherin的分子机理和信号转导机制,为构建乳腺发育和泌乳调控网络提供有用信息。本研究以荷斯坦奶牛为实验对象,应用免疫荧光三重标记染色、荧光定量RT-PCR以及Western blotting技术,检测不同发育时期奶牛乳腺组织中E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1的定位定量表达;以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞系为模型,添加王不留行和蒲公英中药有效成分,应用荧光定量RT-PCR和Western blotting方法,检测王不留行和蒲公英对乳腺上皮细胞粘附分子表达的影响：使用RNA干扰技术沉寂Beta-catenin基因,检测Wnt信号通路中E-cadherin和Cyclin D1表达变化以及对细胞增殖生长的影响。研究结果表明,E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1在奶牛乳腺发育的不同时期均有表达,但不同时期的组织表达量差异显著（P＜0.05）。采用组织块培养法成功获取的奶牛乳腺上皮细胞系,添加王不留行和蒲公英有效成分提取物处理细胞后,荧光定量RT-PCR结果表明,处理组的E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1mRNA表达量均高于对照组（P＜0.05）与Western blotting结果一致。利用siRNA干扰技术,成功建立了Beta-catenin基因沉寂细胞模型;荧光定量RT-PCR和Western blotting检测表明,Beta-catenin基因沉寂后,E-cadherin mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.05）,而Cyclin D1mRNA和蛋白表达显著升高（P＜0.05）,促进奶牛乳腺上皮细胞增殖。在奶牛乳腺发育的不同时期,E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1的表达均发生了显著变化,提示与奶牛乳腺发育过程关系密切;添加王不留行和蒲公英中药有效成分可使奶牛乳腺上皮细胞中E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1表达量增加,促进细胞增殖;而当Beta-catenin基因沉寂后,Cyclin D1蛋白表达量显著增高,促进奶牛乳腺上皮细胞增殖,提示Beta-catenin表达在Wnt信号通路调控乳腺上皮细胞增殖中具有重要作用。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞 E-cadherin Beta-catenin Cyclin D1

乙酸钠和丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞及腺泡乳脂合成相关基因表达的影响

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乙酸钠和丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞及腺泡乳脂合成相关基因表达的...

作者：孔庆洋东北农业大学

学位级别：硕士

乳腺泌乳过程中重要功能基因的表达变化是调节乳腺生长、发育、分化以及乳汁合成、分泌、转运等重要生理过程的基础。因此,乳腺发育重要功能基因的研究对改善奶牛遗传性能、促进我国奶业发展具有积极作用。脂肪酸合酶（FAS）是一种多功... 详细信息

乳腺泌乳过程中重要功能基因的表达变化是调节乳腺生长、发育、分化以及乳汁合成、分泌、转运等重要生理过程的基础。因此,乳腺发育重要功能基因的研究对改善奶牛遗传性能、促进我国奶业发展具有积极作用。脂肪酸合酶（FAS）是一种多功能复合酶,是体内合成脂肪途径中的一个关键酶。乙酰辅酶A羧化酶（ACC）是脂肪酸合成途径的限速酶,它催化脂肪酸（FA）合成的第一步反应,在肝脏,脂肪和乳腺组织中,Acc显著地受到磷酸或去磷酸化作用调控,同时还受FA变构机制的影响。二酰基甘油转酰基酶1（DGAT1）是甘油三酯合成过程中的限速酶,与乳用动物乳脂肪含量高低有关。本实验旨通过乳脂肪前体物对乳脂肪合成基因表达的影响,揭示奶牛乳脂肪合成的基因调控机理。用体外培养方法获得乳腺腺泡模型,已成为一种有效简化乳腺发育和泌乳功能研究过程的基本方法和重要手段。本实验以乳腺上皮细胞和体外构建的奶牛乳腺腺泡为研究对象,采用荧光定量RT-PCR方法,探讨了外源添加乙酸钠和丁酸钠,对乳腺上皮细胞和乳腺腺泡模型中乳脂肪合成的关键酶Fas、Acc、Dgatl表达的影响,并采用半自动生化分析仪检测了添加乙酸钠和丁酸钠后培养体系中甘油三酯浓度的变化,确定了体外调控乳腺上皮细胞乳脂肪生物合成的最佳乙酸钠浓度为16mmol/L,最佳丁酸钠浓度为0.75mmol/L;通过转染对Srebp基因进行沉默试验,结果显示在二维细胞体系和三维腺泡体系中,干扰Srebp对3种重要的酶的表达呈现抑制作用,此研究为进一步研究泌乳基因调控提供了理论依据。

关键词：乳腺上皮细胞乳腺腺泡乙酸钠丁酸钠乳脂肪合成

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中国荷斯坦奶牛泌乳相关营养代谢组学研究

中国荷斯坦奶牛泌乳相关营养代谢组学研究

作者：王小艳东北农业大学

学位级别：硕士

乳蛋白和乳脂肪的含量与组成是衡量牛奶营养品质的重要指标，其含量高低不仅决定牛奶的风味水平，而且是乳制品企业的核心竞争力。随着遗传育种及日粮水平的改善，奶牛乳产量有了很大提高，但乳品质却没有得到明显提高。目前，我国生鲜... 详细信息

乳蛋白和乳脂肪的含量与组成是衡量牛奶营养品质的重要指标，其含量高低不仅决定牛奶的风味水平，而且是乳制品企业的核心竞争力。随着遗传育种及日粮水平的改善，奶牛乳产量有了很大提高，但乳品质却没有得到明显提高。目前，我国生鲜乳指标乳蛋白、乳脂肪含量仍低于发达国家生鲜乳的标准含量，饲养模式、生产环境与奶牛品种能够显著影响牛奶品质。本研究以泌乳90日高乳品质组奶牛、泌乳90日低乳品质组奶牛、干奶期30日奶牛为实验材料，应用核磁共振、气相色谱等方法，系统研究3组奶牛肝、乳腺、瘤胃液、阴外动脉和乳静脉血清、乳汁及整体代谢产物的变化。NMR技术测定3组奶牛瘤胃内小分子代谢物，结果显示高、低乳品质组奶牛都与干奶期奶牛存在差异显著代谢物，且代谢物差异趋势一致，高、低乳品质组之间小分子代谢物水平差异不显著。肝脏是反刍动物重要的物质代谢器官，经NMR技术检测，PLS-DA分析可见，3组奶牛肝组织水相代谢物模型建立成功。OPLS-DA分析显示高乳品质组奶牛中异亮氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、胆碱、柠檬酸盐、延胡索酸、胞苷水平显著低于低乳品质组奶牛。奶牛阴外动脉血清中，高、低乳品质组模型建立成功，且高乳品质组奶牛中异亮氨酸、亮氨酸、葡萄糖、脂类、缬氨酸、谷氨酸显著高于低乳品质组奶牛，异亮氨酸、缬氨酸、谷氨酸主要用于乳腺乳蛋白的合成，脂类用于乳腺长链脂肪酸的合成，提示这几种代谢物可能是引起高、低乳品质组奶牛乳蛋白率和乳脂率差异的标志物。NMR检测与PLS-DA分析3组奶牛乳腺水相代谢物模型建立成功，而脂类代谢物模型不成立。OPLS-DA分析结果可见，高乳品质组奶牛亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸水平显著高于低乳品质组奶牛，提示这些差异代谢物可能是乳腺内影响奶牛乳蛋白合成的标志物。NMR测定乳静脉血清代谢物，OPLS-DA分析3组奶牛乳静脉血清模型建立成功，经OPLS-DA分析，高乳品质组奶牛中脂类、胆碱、肌酸水平显著低于低乳品质组奶牛，其中脂类水平较低与阴外动脉血清OPLS-DA分析结果共同提示高乳品质组奶牛乳腺乳脂合成时由血液转化的脂类消耗量较大。乳产量与乳品质是奶牛经济价值的体现，经OPLS-DA分析，高乳品质组奶牛中组氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸显著高于低乳品质组奶牛，这与乳蛋白水解氨基酸测定结果一致。奶牛尿液NMR检测结果可知，3组奶牛模型建立不成功，可推测3组样本内小分子代谢物无显著差异。本研究还采用了氨基酸全自动分析仪测定了高、低乳品质组奶牛阴外动脉、乳静脉血游离氨基酸含量，结果显示高乳品质奶牛组阴外动脉血浆必需氨基酸Met、Leu、Ile、Thr、Val质量浓度显著高于低乳品质奶牛组相应氨基酸的质量浓度。高乳品质组奶牛对必需氨基酸Thr、Val、Met、Ile、His的摄取率显著高于低乳品质组奶牛相应氨基酸。荧光定量PCR结果显示调控奶牛乳蛋白合成的信号途径的靶基因STAT5、AKT1、mTOR的mRNA处于高表达水平。气相色谱结果显示，高乳品质组奶牛中长链脂肪酸含量显著高于低乳品质组奶牛的含量，长链脂肪酸的合成来自血脂的转化，同时OPLS-DA分析结果显示高乳品质组奶牛脂类水平较高，推测这可能是高乳品质组奶牛乳脂肪率较高的原因。而且荧光定量PCR和酶活性测定结果显示，调控乳脂肪合成的基因和酶活性均处于较高的水平，分别从基因和蛋白水平解释了高乳品质组奶牛合成代谢旺盛的原因。

关键词：奶牛代谢组学代谢物乳蛋白合成乳脂肪合成

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利用电融合方法生产体细胞克隆小鼠

利用电融合方法生产体细胞克隆小鼠

作者：于洋东北农业大学

学位级别：硕士

目前,生产体细胞克隆小鼠的常规方法是注射方法,只有1 篇文章报道用尾尖成纤维细胞与去除遗传物质的MⅡ期卵母细胞融合,成功生产体细胞克隆小鼠,但是克隆的效率远远没有达到人们预想的程度。本实验主要研究电融合技术对于体细胞克隆小... 详细信息

目前,生产体细胞克隆小鼠的常规方法是注射方法,只有1 篇文章报道用尾尖成纤维细胞与去除遗传物质的MⅡ期卵母细胞融合,成功生产体细胞克隆小鼠,但是克隆的效率远远没有达到人们预想的程度。本实验主要研究电融合技术对于体细胞克隆小鼠生产的可行性和影响因素。采用新鲜的颗粒细胞直接注入到去除遗传物质的MⅡ期卵母细胞的透明带下,在1 次2.4kv/cm,20usec的直流电脉冲作用下,采用没有Ca融合液(0.3mol/L 甘露醇)诱导细胞融合。融合后的胚胎经过1 小时的培养,放置在含有10mmol/L Sr的激活液中活化6 小时。活化后的胚胎,一部分在体外培养3.5 天,观察囊胚发育率,并且移植到假孕2.5 天的代孕母鼠子宫中;另外一部分在体外培养到2-细胞期,移植到假孕0.5 天的代孕母鼠输卵管壶腹部中。19.5 天后,通过剖腹产获得体细胞克隆小鼠。对照实验采用注射的方法同样获得体细胞克隆小鼠。通过对电融合和注射方法获得的克隆胚胎对比,发现2 种克隆胚胎在活化率上没有显著差异(87.3% VS 90.3%,P>0.05)。但是在卵裂率(82.4% VS 92.9%,P<0.05)和囊胚率(47.3% VS 57.2%,P<0.05)上,具有显著差异。实验还对影响融合效率的一些因素进行了研究,包括受体卵母细胞的老化﹑融合参数的改变﹑不同品系小鼠核移植﹑不同供体细胞核移植等影响因素对于电融合重构胚胎体外发育的影响。实验结果证明,目前使用的融和参数与融合条件都是合理并且可行的。实验证明,两种核移植技术都能获得体细胞克隆小鼠。由于目前电融合技术已经成为克隆动物生产中的常规手段,因此从技术角度而言,电融合技术更便于广泛推广和使用。

关键词：电融合小鼠核移植

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奶牛乳腺上皮细胞培养及干细胞鉴定

奶牛乳腺上皮细胞培养及干细胞鉴定

作者：郝雨蒙东北农业大学

学位级别：硕士

奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)作为常用的体外实验工具,为奶牛乳腺发育、泌乳调控及乳腺生物反应器等方面的研究提供细胞模型。目前,DCMECs永生化细胞系的建立尚未成熟,需要在体外诱导并模拟生理条件,... 详细信息

奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)作为常用的体外实验工具,为奶牛乳腺发育、泌乳调控及乳腺生物反应器等方面的研究提供细胞模型。目前,DCMECs永生化细胞系的建立尚未成熟,需要在体外诱导并模拟生理条件,通过原代培养来获得具有泌乳功能的分泌性乳腺上皮细胞或构建三维立体的腺泡模型。乳腺是出生后发育的器官,青春期首次快速发育及妊娠期再次发育都与乳腺干细胞(mammary stem cells,MaSCs)活跃的自我更新及分化密切相关。研究表明乳腺中存在一定比例的干细胞,但区分鉴定这些多潜能干细胞的特异性分子标志仍不十分明确。一些激素及生长因子类物质在体内能够促进乳腺发育、调控泌乳,在体外能够促进乳腺上皮细胞增殖,影响细胞黏附、迁移、伸展和分化,并且涉及到对MaSCs的调控。激素和生长因子如何影响MaSCs扩增、分化并维持其多能性,以及调控乳腺上皮细胞生长、分化参与体外立体腺泡构建的机制值得深入研究。本研究以原代培养的DCMECs为实验模型,探讨短期内获得大量DCMECs的方法,筛选乳腺上皮干细胞新型分子标志,鉴定奶牛乳腺上皮干细胞,观察黄苷及IGF-Ⅰ对乳腺上皮细胞及乳腺上皮干细胞的影响。实验中采用胶原酶消化法体外培养DCMECs,通过绘制细胞生长曲线、核型分析、Western Blotting检测酪蛋白、荧光定量PCR检测泌乳相关基因等实验技术与方法评估原代(或传代)细胞的生长活性与泌乳潜能;利用激光共聚焦显微技术进行免疫荧光观察与分析,根据乳腺上皮干细胞分子标志表达、Brd U标记滞留的特点以及细胞分裂方式鉴定原代乳腺上皮细胞体外培养体系中的乳腺上皮干细胞。结果表明:(1)主要成分为胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、DNA酶Ⅰ的消化液混合物在3h内高效率消化组织块,得到的原代及传代细胞是具有60条染色体,呈现典型上皮细胞形态,CK18表达阳性,生长活力旺盛,能够合成分泌β-casein的正常DCMECs,可作为后期实验材料。(2)在体外培养过程中,通过实时荧光定量PCR方法检测分析P0、P3、P6、P9细胞中催乳素、生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及其受体基因的表达变化,经过比较分析发现原代与传代后细胞在激素、生长因子及其受体mRNA水平上差异极显著降低(P0.05),PRL/P RLR、GH/GHR、I GF-I/I GF-IR m RNA的相对表达量在P0-P3细胞中有升高趋势而在P6-P9细胞中有下降趋势,提示黄苷及IGF-Ⅰ对上皮细胞及干细胞的增殖有一定的促进作用,并对早期乳腺上皮细胞泌乳基因表达呈正调控。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞干/祖细胞标记滞留泌乳

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小鼠乳腺细胞凋亡及瘦素对凋亡的影响

小鼠乳腺细胞凋亡及瘦素对凋亡的影响

作者：侯晓明东北农业大学

学位级别：硕士

凋亡(apoptosis，AP)是细胞的程序性死亡(programmed cell death，PCD)过程。凋亡过程中，不再需要的或受损伤组织的细胞发生程序性死亡，可以说凋亡是细胞的正常死亡，同细胞的增殖发育是相反的生理过程。动物乳腺在整个发育过程中也... 详细信息

凋亡(apoptosis，AP)是细胞的程序性死亡(programmed cell death，PCD)过程。凋亡过程中，不再需要的或受损伤组织的细胞发生程序性死亡，可以说凋亡是细胞的正常死亡，同细胞的增殖发育是相反的生理过程。动物乳腺在整个发育过程中也存在着细胞增殖与凋亡的动态平衡，乳腺细胞凋亡的研究是乳腺生物学的重要组成部分，动物乳腺细胞凋亡机理的研究对揭示乳腺发育的规律，为泌乳生物学和乳腺功能调控的深入研究提供了依据。本试验以小鼠乳腺为材料，采用TUNEL法和毛细管电泳法系统地研究了小鼠乳腺正常发育过程中的细胞凋亡。结果表明小鼠乳腺发育不同时期细胞凋亡同结构和功能发育之间相互联系。青春期乳腺发育缓慢，结构变化较小，乳腺细胞凋亡量相对较小，其中青春期50～60d随着乳腺导管的发育，乳腺导管周围的脂肪细胞凋亡量有所增加。妊娠期乳腺导管持续发育，乳腺中主要是脂肪细胞发生凋亡，凋亡量维持在中等水平，其中妊娠末期，乳腺腺泡大量出现，脂肪细胞凋亡也随之增加。泌乳期乳腺的结构和功能最为完善，乳腺结构变化很小，细胞凋亡量维持在很低水平。退化期随着泌乳的结束，乳腺导管和腺泡结构开始瓦解，大量细胞发生凋亡，其中退化初期乳腺细胞凋亡持续增加，退化3d达到最大值，然后凋亡量逐渐降低，此时脂肪细胞数量开始增多，占据导管及腺泡细胞凋亡后的位置;退化10d后乳腺已经基本恢复到青春期状态，凋亡细胞量也随之减少。试验中毛细管电泳检测小鼠乳腺细胞凋亡很好地验证了TUNEL法检测结果。结果显示，小鼠乳腺在青春期、妊娠期、泌乳期凋亡量都很低，退化期凋亡量显著增加，退化3d达到凋亡高峰，而后逐渐下降。试验也证明了毛细管电泳是一种方便快速、灵敏度高的细胞凋亡检测方法，有广泛的应用价值。瘦素是一种多靶器官、功能广泛的蛋白激素，瘦素及其长型受体在乳腺脂肪垫和乳腺上皮细胞中都有表达，提示它对乳腺发育、泌乳和退化有一定的调控作用。本试验通过小鼠乳腺组织体外培养的方法，将退化1d的乳腺组织分别在含有瘦素和不含瘦素的培养基中培养，培养后的组织分别用TUNEL法检测细胞凋亡，分析瘦素对退化期乳腺细胞凋亡的作用。结果显示，不加瘦素培养的组织形态保持较好，凋亡细胞较少;加瘦素培养组织的导管和腺泡结构已经开始发生解体，组织中有较多的凋亡细胞，证明瘦素在退化期乳腺组织中可明显诱导细胞凋亡。

关键词：乳腺凋亡瘦素 TUNEL 毛细管电泳

miR-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的调控

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miR-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的调控

作者：王褚悦东北农业大学

学位级别：硕士

具有泌乳功能的乳腺是哺乳动物的特殊腺体。为了提高奶山羊的泌乳量,研究者们在分子生物学的基础上对乳腺进行了大量的研究。mi RNA是一类长度约为185个核苷酸组成的单链非编码RNA,大量存在于在人类和哺乳动物的细胞中并发挥着重要的调... 详细信息

具有泌乳功能的乳腺是哺乳动物的特殊腺体。为了提高奶山羊的泌乳量,研究者们在分子生物学的基础上对乳腺进行了大量的研究。mi RNA是一类长度约为185个核苷酸组成的单链非编码RNA,大量存在于在人类和哺乳动物的细胞中并发挥着重要的调节作用。本研究以奶山羊乳腺上皮细胞中的mi R-142-3p为研究对象,通过使用mi Rbase数据库对mi R-142-3p靶位点预测发现,mi R-142-3p以不完全配对的方式结合于催乳素受体(PRLR)3’UTR区域即它们之间存在靶向关系,所以推测mi R-142-3p可能与奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能密切相关。本研究旨在通过mi R-142-3p基因过表达与抑制,进一步研究mi R-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳调节作用。本研究利用脂质体载体向奶山羊乳腺上皮细胞中转染mi R-142-3p mimics和mi R-142-3p inhibitor并作用48h,进而研究mi R-142-3p对奶山羊乳腺上皮泌乳功能的调控作用。应用q RT-PCR检测技术检测Prlr及其相关通路基因的变化;利用Western blotting方法检测mi R-142-3p对PRLR等泌乳相关通路蛋白的影响;利用免疫荧光检测PRLR在奶山羊乳腺上皮细胞中的定位及表达;应用EDU法检测奶山羊乳腺上皮细胞增殖;应用流式检测法检测奶山羊乳腺上皮细胞周期及凋亡;使用CCK试剂盒检测奶山羊乳腺上皮细胞活力的变化。同时收集作用48h后的培养液,应用TG试剂盒检测奶山羊乳腺上皮细胞甘油三酯的分泌的变化及乳糖试剂盒检测其分泌乳糖的变化情况。实验结果表明:①应用q RT-PCR方法分别检测过表达及抑制mi R-142-3p时mi R-142-3p与靶基因Prlr的变化,mi R-142-3p过表达,mi R-142-3p表达量升高,Prlr下调;mi R-142-3p抑制,mi R-142-3p表达量降低,Prlr上调。②Western blotting技术检测结果显示,mi R-142-3p过表达时,奶山羊乳腺上皮细胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表达量均下降;mi R-142-3p抑制时,奶山羊乳腺上皮细胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表达均升高;过表达及抑制时,GLUT1均表达变化不显著。③利用免疫荧光结果显示,mi R-142-3p在细胞水平调控PRLR位置,并使PRLR表达水平降低。④应用EDU法检测奶山羊乳腺上皮细胞增殖,结果显示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮细胞增殖。⑤流式细胞检测法检测奶山羊乳腺上皮细胞周期及凋亡,发现mi R-142-3p可抑制细胞周期,促进细胞凋亡。⑥使用CCK法检测奶山羊乳腺上皮细胞活力的变化,结果显示mi R-142-3p可抑制细胞活力。⑦采用TG试剂盒及乳糖试剂盒分别检测奶山羊乳腺上皮细胞分泌甘油三酯及乳糖的变化情况,结果显示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮细胞甘油三酯的生物合成,但对乳糖分泌无显著影响。综上所述,mi R-142-3p通过抑制PRLR的表达,下调泌乳信号相关通路蛋白,从而抑制乳腺上皮奶山羊乳腺上皮细胞的增殖和活力,促进细胞凋亡,并对奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳功能具有负向调节作用。

关键词：奶山羊乳腺上皮细胞泌乳 miR-142-3p PRLR

不同日粮模式下奶牛泌乳相关营养代谢组学研究

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不同日粮模式下奶牛泌乳相关营养代谢组学研究

作者：沙珊珊东北农业大学

学位级别：硕士

我国奶业发展迅速,但牛奶中决定乳品质的乳蛋白和乳脂肪含量较低已成为制约我国奶业和乳业发展的关键问题。目前影响我国奶牛乳品质的主要有奶牛品种、日粮类型和环境3种因素,其中日粮类型的影响很大。通过改变日粮类型提高乳品质成为... 详细信息

我国奶业发展迅速,但牛奶中决定乳品质的乳蛋白和乳脂肪含量较低已成为制约我国奶业和乳业发展的关键问题。目前影响我国奶牛乳品质的主要有奶牛品种、日粮类型和环境3种因素,其中日粮类型的影响很大。通过改变日粮类型提高乳品质成为目前我国奶业研究的重点课题。本研究立足于我国奶牛饲料资源现状,研究不同粗饲料日粮奶牛泌乳相关营养代谢组差异以及对乳品质的影响。实验选取10头体重相近的泌乳期健康中国荷斯坦奶牛,随机分成2组,每组5头,分别饲喂单一秸秆(CS)和混合粗饲料(MF)日粮,试验分为3期,每期30日;应用液相色谱/质谱联用(LC-MS)等代谢组学方法,系统研究2组奶牛乳房(乳汁、乳腺组织、乳动脉血、乳静脉血)、瘤胃液、肝及颈静脉血差异代谢物;通过测定2组奶牛差异代谢物,研究2种不同粗饲料日粮对奶牛乳品质的影响。研究结果如下:(1)CS组奶牛乳蛋白率、乳脂肪率、乳产量、乳蛋白产量、乳脂肪产量、总固体量、干物质采食量显著低于MF组奶牛(P<0.05),乳汁中溶血磷脂酰胆碱(16:0)、马尿酸、三酰甘油(30:0、36:0、37:0、38:0、40:0、42:0、46:0、50:4)含量显著低于MF组奶牛(P<0.05);乙酰肉碱、甘油-3-磷酸胆碱、丙酰-L-肉毒碱、磷脂酰胆碱、肉毒碱含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(2)CS组奶牛乳腺组织中L-亮氨酸、L-精氨酸、棕榈酰胺、油酰胺含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),次黄嘌呤、黄嘌呤、脯氨酸甜菜碱等12种代谢物含量均显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(3)CS组奶牛乳动脉血中脯氨酸甜菜碱、三甲胺-N-氧化物、L-色氨酸、三酰甘油(55:1、62:0)、磷脂酰胆碱(36:0、36:5、38:2)、缩醛磷脂酰乙醇胺(36:3)含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),丙酰左旋肉碱、马尿酸、鞘磷脂(41:2、42:2)含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(4)CS组奶牛乳静脉血中磷脂酰胆碱(34:4、38:2、38:3、38:4、40:4)、牛磺酸、溶血磷脂酰胆碱(18:3、20:3)、L-精氨酸含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),鞘磷脂(32:1、40:2、42:2)、三酰甘油(58:0)、马尿酸含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(5)CS组奶牛瘤胃液中丙氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、缬氨酸、乙苯基丁酸酯、苯丙基异丁酸盐、α-甲苯基丁酸盐、甲基苯乙基异丁酸盐、异丁酸、乙酸盐、丙酸盐、乙酸含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),乙酰胆碱、三甲胺-N-氧化物、甲胺含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(6)CS组奶牛肝组织磷脂酰胆碱(30:0、34:3、38:1、38:4)、组氨酸、次黄嘌呤、尿苷含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),三酰甘油(51:3、52:2、52:3、52:4、53:2、53:3、54:0、54:2、54:3、54:4、54:5)、缩醛磷脂酰胆碱(42:0)、缩醛磷脂酰乙醇胺(36:2)、磷脂酰乙醇胺(34:2、36:2、36:3)、鞘磷脂(42:2)、乙酰肉碱、尿酸含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(7)CS组奶牛颈静脉血磷脂酰胆碱(36:0、36:2、38:1、38:2、38:3)、三酰甘油(55:1、57:1、58:1、59:0、60:0、60:1)、缩醛磷脂酰胆碱(36:4、38:2)、溶血磷脂酰乙醇胺(20:1)、瓜氨酸、L-苏氨酸含量显著低于MF组奶牛(P<0.05),鞘磷脂(41:2)含量显著高于MF组奶牛(P<0.05)。(8)CS组奶牛乳腺组织乳蛋白合成相关重要功能基因STAT5、AKT1、mTOR和CSN2的mRNA表达量显著和极显著低于MF组奶牛(P<0.05,P<0.01),PTEN的m RNA表达量显著高于MF组奶牛(P<0.05);CS组奶牛乳腺组织乳脂肪合成相关重要功能基因PPARγ、FABP3、SREBP1c、ACC、FAS和SCD的mRNA表达量显著和极显著低于MF组奶牛(P<0.05,P<0.01)。本研究揭示,混合粗饲料日粮和单一秸秆日粮奶牛乳房(乳汁、乳腺组织、乳动脉血、乳静脉血)、瘤胃液、肝、颈静脉血泌乳相关营养代谢组变化以及乳腺组织泌乳相关功能基因组表达存在显著差异,混合粗饲料日粮奶牛具有显著的乳蛋白和乳脂肪合成前体物质生成利用优势以及乳蛋白和乳脂肪合成相关重要功能基因正向上调优势,促进乳蛋白和乳脂肪合成,提高乳蛋白产量和乳脂肪产量以及乳蛋白率和乳脂肪率,改善乳品质。

关键词：奶牛乳品质乳蛋白合成乳脂肪合成代谢组学

催乳素、雌激素和胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞中瘦素及其受体的影响

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催乳素、雌激素和胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞中瘦素及其受体的影响

作者：李冬辉东北农业大学

学位级别：硕士

乳腺的泌乳是乳腺发育和激素共同作用的结果,激素在泌乳过程中起着重要的作用。本实验以荷斯坦奶牛为实验材料,通过体外培养奶牛乳腺上皮细胞,添加催乳素、雌激素、胰岛素并采用激光扫描共聚焦显微技术、Western blotting、Real-Time PC... 详细信息

乳腺的泌乳是乳腺发育和激素共同作用的结果,激素在泌乳过程中起着重要的作用。本实验以荷斯坦奶牛为实验材料,通过体外培养奶牛乳腺上皮细胞,添加催乳素、雌激素、胰岛素并采用激光扫描共聚焦显微技术、Western blotting、Real-Time PCR等来观察乳腺上皮细胞中瘦素及其受体表达和泌乳功能的变化规律,旨在了解外源激素与瘦素的关系,寻求人工调控乳产量和乳质量的新方法、新技术和新途径,为奶牛乳腺发育和泌乳功能调控提供理论基础和试验根据。研究结果表明,用组织块培养法成功获取了泌乳期奶牛乳腺上皮细胞。采用激光扫描共聚焦显微技术对泌乳期奶牛乳腺上皮细胞中瘦素和瘦素受体的表达定位进行检测,结果显示;瘦素在奶牛乳腺上皮细胞中表达,瘦素受体在乳腺上皮细胞中被检测到,但表达水平很低。三种激素处理细胞后,应用Western blotting对奶牛乳腺上皮细胞中瘦素和瘦素受体的蛋白表达量进行研究,结果显示：催乳素、雌激素能显著提高瘦素及其受体的表达(P0.05)。荧光定量RT-PCR结果表明,催乳素和雌激素能提高瘦素及其受体mRNA表达量(P0.05)。采用高效液相色谱技术及甘油三酯试剂盒研究激素对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的作用,结果表明：催乳素、雌激素和胰岛素处理乳腺上皮细胞培养液中β-酪蛋白升高均较显著(P0.05)。而三种激素对奶牛乳腺上皮细胞乳脂分泌能力均没有显著影响(P>0.05)。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞催乳素雌激素胰岛素瘦素及瘦素受体

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猪囊尾蚴的生化代谢规模和药物作用机理

猪囊尾蚴的生化代谢规模和药物作用机理

作者：高文学东北农业大学

学位级别：硕士

本研究通过测定发育过程中猪囊尾蚴及抗囊药物作用下猪囊尾蚴的多种生化代谢指标，阐明了猪囊尾蚴的基本生化代谢规律和药物作用机理，为猪囊尾蚴病的科学防治提供了重要的实验和理论依据。从发育过程中的猪囊尾蚴检测到参与物... 详细信息

本研究通过测定发育过程中猪囊尾蚴及抗囊药物作用下猪囊尾蚴的多种生化代谢指标，阐明了猪囊尾蚴的基本生化代谢规律和药物作用机理，为猪囊尾蚴病的科学防治提供了重要的实验和理论依据。从发育过程中的猪囊尾蚴检测到参与物质吸收转运的三种ATPase、ALP，糖类物质代谢的GLc、HK、MDH、PK、LDH、LAC、G6PDH，脂类物质代谢的TG，氨基酸代谢的GOT、GPT、GDH、UN，嘌呤代谢的XOD、UA。发现囊壁HK、PK、MDH、 NaK—ATPase活性及GLc含量、头颈节Ca—ATPase活性随虫体由未成熟期进入成熟期而升高，表明虫体存在着类似于其它蠕虫的物质转运、糖有氧分解、糖无氧分解、磷酸戊糖途径、氨基酸代谢等生化代谢通路，并且随着虫体生长发育，膜转运功能加强，由HK催化GLc进入代谢的通路活跃，由PEP经PK、LDH催化生成LAC的支路和经 MDH等催化进入逆向三羧酸循环的支路均加强。实验结果表明，三种药物NX、NX、NX对体外培养六钩蚴、未成熟猪囊尾蚴、成熟期猪囊尾蚴生化代谢均有一定作用，在成熟期NX、NX对猪囊尾蚴生化代谢的影响相似，即首先使HK、MDH活性及GLc含量降低，PK、LDH活性及LAC含量升高，于后期各代谢系统均受影响，酶活性下降，代谢产物蓄积。说明药物首先抑制MDH所在糖有氧分解通路，糖无氧分解过程代偿性增强，而后糖分解代谢全面抑制，致使虫体能量耗竭，直至死亡。药物对体内各时期猪囊尾蚴生化代谢的影响，根据疗效观察NX 无效，NX优于NX，NX对未成熟期猪囊尾蚴的杀灭作用优于成熟期。

关键词：六钩蚴,猪囊尾蚴,生化代谢,药物作用